A theoretical study on the molecular structure and chemical reactivity of traditional Chinese medicine extract isopimpinellin

Isopimpinellin(C13H10O5),alternative name 5,8-dimethoxypsoralen,is one of the furocoumarin compounds.This traditional Chinese medicine extract has attracted a great deal of attention in recent years due to its pharmacological properties,especially its antifungal effect.The main purpose of this study was to study the molecular structure and chemical reactivity of isopimpinellin using the density functional theory method.To understand and interpret the reactivity of isopimpinellin,various chemical reactivity descriptors such as chemical potential(μ),electronegativity(χ),chemical hardness(η)and electrophilicity(ω)and local reactivity index condensed Fukui function(fi(r))have been calculated with five hybrid functionals PBE1PBE,MPW1PW91,B3LYP,X3LYP and B3PW91.These chemical reactivity descriptors indicate that the isopimpinellin molecule has a good antioxidant activity,which could be one of the reasons for its action as an effective antifungal drug.The condensed Fukui functions of isopimpinellin molecule provide a complete scheme of chemical reactivity of one molecule.

高效液相色谱法测定飞龙掌血中异茴芹香豆素含量

目的 :用高效液相色谱法对苗药飞龙掌血中异茴芹香豆素含量进行测定。方法 :采用HypersilC18柱为分析柱 ,以甲醇 水 (70∶30 )为流动相 ,检测波长 30 6nm。结果 :线性范围 0 .0 0 4 2 0～ 0 .4 2 0 μg ,平均回收率 99.7% ,RSD =2 .8%。结论 :本法简便、准确、重现性好 。

LC-MS/MS技术同时测定滋心阴口服液中6种化学成分

目的:建立HPLC-ESI-MS方法同时测定滋心阴口服液(北沙参、赤芍、麦冬、三七)中6种化学成分。方法:采用多反应监测(MRM)模式同时监测4种香豆素类和2种苷类成分。ESI源,正、负离子同时检测,源喷射电压分别为5 500 V和-4 500 V,离子源温度为650℃。6种被测成分的监测离子对分别为479.1/121.0(芍药内酯苷)、525.2/449.1(芍药苷)、217.1/202.1(花椒毒素)、187.2/131.1(补骨脂素)、247.1/217.0(异茴芹内酯)和217.1/202.1(佛手柑内酯)。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱,流动相为甲醇-0.1‰甲酸,梯度洗脱,分析时间7.5 min。采用所建立的方法对4批滋心阴口服液进行了测定。结果:6种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,平均加样回收率为91.7%～108.7%,精密度RSD为1.1%～3.0%。结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好,可用于滋心阴口服液中芍药内酯苷、芍药苷、花椒毒素、补骨脂素、异茴芹内酯和佛手柑内酯的含量测定。除芍药苷外,其它5种成分均为滋心阴口服液中首次测定。

高效液相色谱法同时测定蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的含量。方法Promosil C18色谱柱（4．6mm×250mm．5μm）；流动相为甲醇-0．1形磷酸（80：20）；流速为0．8mL·min^-1；检测波长为265nm;柱温为30℃。结果蛇床子素在0．2191～2．191μg线性关系良好，平均回收率为98．53％；异茴芹素在0．0126～0．126μg线性关系良好，平均回收率为99．23％。结论该方法简便、快速、准确、重复性好，可用于蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的同时测定。

异虎耳草素-β-环糊精包合物的制备

以 β 环糊精为包合材料 ,制备异虎耳草素 β 环糊精包合物 ,以提高异虎耳草素的水溶性。结果表明 ,包合是成功的 ;异虎耳草素用 β 环糊精包合后在水中的溶解度比包合前提高 60倍。

异虎耳草素对PCPA致松果体损伤模型大鼠的改善作用及生物钟基因表达的影响

目的:研究异虎耳草素对对氯苯丙氨酸(PCPA)致松果体损伤模型大鼠的改善作用及其对生物钟基因表达的影响。方法:将60只大鼠随机分为空白对照组(2%聚山梨酯80溶液)、模型对照组(2%聚山梨酯80溶液)、阳性对照组(褪黑素,10 mg/kg)和异虎耳草素高、中、低剂量组(3、1.5、0.75 mg/kg),每组10只。除空白对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射PCPA(450mg/kg)的方法构建松果体损伤模型。造模结束后,各组大鼠灌胃给药,每天1次,连续7 d。在给药第6天,通过戊巴比妥钠协同睡眠实验考察各组大鼠的入睡潜伏期和睡眠持续时间;末次给药后,采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中褪黑素水平,分别在荧光显微镜和电子显微镜下观察大鼠松果体组织的病理变化和细胞超微结构改变,并采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法测定大鼠松果体中生物钟基因Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2 mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠的入睡潜伏期显著延长(P<0.05);血清中褪黑素水平和松果体中Bmal1、Per1 mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),Per3mRNA表达水平显著升高(P<0.05);松果体细胞排列紊乱、核固缩,空泡变性明显增多,数目明显减少,线粒体多见肿胀、嵴断裂、固缩。与模型对照组比较,异虎耳草素高剂量组大鼠的入睡潜伏期显著缩短(P<0.05)、睡眠持续时间显著延长(P<0.05),血清中褪黑素水平和松果体中Clock、Bmal1、Per1、Cry1、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);异虎耳草素中剂量组大鼠的入睡潜伏期显著缩短(P<0.05),血清中褪黑素水平和松果体中Clock、Bmal1、Per1、Cry1、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),Per3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);异虎耳草素低剂量组大鼠Clock、Bmal1、Per2、Cry2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Per3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);异虎耳草素各剂量组大鼠松果体细胞排列紊乱均有一定程度改善、核固缩空泡变性减少,线粒体肿胀、嵴断裂、固缩均有一定程度减少。结论:异虎耳草素对PCPA致大鼠松果体损伤具有一定的改善作用;其可上调松果体正向调节因子Clock、Bmal1和负向调节因子Per1、Per2、Cry1、Cry2的表达,下调负向调节因子Per3的表达。

RP-HPLC法同时测定蛇床子中蛇床子素、欧芹属素乙和异茴芹素的含量

目的建立蛇床子Cnidiummonnieri中蛇床子素(osthole)、欧芹属素乙(imperatorin)和异茴芹素(isopimpinellin)的高效液相色谱测定方法。方法采用VercoparkInertsilN-5ODS柱,1%醋酸-甲醇(梯度为0～30min1%醋酸95%～5%)为流动相,检测波长254nm。结果该法回收率蛇床子素为99.1%,欧芹属素乙为95.8%,异茴芹素为97.3%;RSD蛇床子素为1.8%,欧芹属素乙为0.8%,异茴芹素为3.3%(n=5)。结论本方法为蛇床子药材、蛇床子提取物及含蛇床子药材的复方的质量评估提供了可靠的依据。

异虎耳草素通过调控Nrf2-NF-κB通路轴减轻松果体损伤大鼠氧化应激和炎症反应

目的探讨异虎耳草素对PCPA诱导的大鼠松果体损伤的保护作用及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,褪黑素10 mg/kg组和异虎耳草素1.5 mg/kg组,每组10只。除正常组外,其余3组均通过腹腔注射PCPA(450 mg/kg)构建松果体损伤大鼠模型,造模成功后灌胃给药,连续7 d。在给药第6天,采用戊巴比妥钠协同睡眠实验评估各组大鼠的入睡潜伏期和睡眠持续时间。给药结束后,检测血清褪黑素、松果体组织超氧化物歧酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、白介素(IL)-6、IL-2和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;HE染色观察松果体组织病理学变化;Western blot法检测松果体组织中血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核转录因子-κB(NF-κB)p65、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠松果体细胞结构损伤严重、数目减少,大鼠入睡潜伏期延长,睡眠持续时间缩短,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量降低,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量升高(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达上调,Keap1和胞质NF-κB p65表达下调(P<0.05);与模型组比较,异虎耳草素组大鼠松果体组织损伤得到缓解,入睡潜伏期和睡眠持续时间明显改善,褪黑素、SOD、GSH、GPx和CAT含量增加,NO、MDA、IL-2、TNF-α和IL-6含量减少(P<0.05),Nrf2、NQO1、HO-1、NF-κB p65、IKKβ、p-IKKβ和核NF-κB p65蛋白表达下调,Keap1和胞质NF-κB p65表达上调(P<0.05)。结论异虎耳草素能够通过激活Nrf2信号通路和抑制NF-κB信号通路,抑制氧化应激和炎症反应,减轻大鼠松果体组织损伤,促进褪黑素分泌。

蛇床子配方颗粒HPLC指纹图谱研究及6种香豆素类成分含量测定

目的建立蛇床子配方颗粒HPLC指纹图谱及花椒毒酚、花椒毒素、异茴芹素、佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床子素6种香豆素类成分含量测定方法,为蛇床子配方颗粒物质基准的研究提供参考。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters XBridge C18(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.1%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量为0.5 mL/min,进样量为10μL,柱温40℃。蛇床子配方颗粒HPLC指纹图谱及花椒毒酚、花椒毒素、异茴芹素、佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素含量测定的检测波长为320 nm。采用国家药典委员会出版的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版),建立蛇床子配方颗粒指纹图谱,并使用HPLC法同时测定6种香豆素成分含量。结果对18批蛇床子配方颗粒进行了研究,其指纹图谱相似度均≥0.992,标定了19个共有峰,各峰分离度较好。含量测定结果表明花椒毒素与蛇床子素为蛇床子配方颗粒中含量较高的香豆素类成分。经方法学考察,方法精密度RSD值均小于1.6%,方法的重复性良好,样品在48 h内稳定;花椒毒酚、花椒毒素、欧前胡素、异茴芹素、佛手柑内酯和蛇床子素的加样回收率分别为100.69%、101.03%、99.48%、100.88%、101.27%、100.35%,RSD均小于2.5%;6种成分在一定质量浓度内线性关系良好;18批蛇床子配方颗粒中花椒毒酚、花椒毒素、异茴芹素、佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素的质量分数依次为8.01~8.29、2.37~2.63、4.30~4.61、4.04~4.40、3.45~3.90、6.02~6.80 mg/g。结论建立了蛇床子配方颗粒的指纹图谱及同时测定其6种主要香豆素类成分含量的方法,操作简便,结果稳定、准确,对建立蛇床子配方颗粒的质量控制标准提供了依据,具有重要的应用价值。

明党参根皮化学成分研究

目的研究明党参Changium smyrnioides根皮的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相柱色谱以及LH-20凝胶柱色谱等多种技术进行分离纯化,并根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果从明党参根皮95%乙醇提取物中分离得到了15个化合物,分别鉴定为欧前胡素（1）、珊瑚菜内酯（2）、花椒毒酚（3）、5-羟基8-甲氧基补骨脂素（4）、香草酸（5）、别欧前胡素（6）、补骨脂素（7）、佛手柑内酯（8）、5-甲氧基-8-O-β-D-葡萄糖基补骨脂素（9）、异茴芹内酯（10）、咖啡酸（11）、橙黄胡椒酰胺乙酸酯（12）、vaginatin（13）、β-谷甾醇（14）、琥珀酸（15）。结论化合物6~13为首次从党参属植物中分离得到。

紫花前胡的化学成分研究

目的对紫花前胡Peucedanum decursivum的化学成分进行研究。方法采用95%乙醇提取,经多种色谱方法分离纯化,利用质谱、核磁共振等现代波谱技术鉴定结构。结果从紫花前胡95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为异佛手柑内酯(1)、佛手柑内酯(2)、茴芹内酯(3)、异茴芹内酯(4)、二氢欧山芹醇乙酯(5)、6-牛防风素(6)、前胡香豆素E(7)、花椒毒素(8)、甲氧基欧芹酚(9)、阿魏酸(10)、β-谷甾醇(11)、补骨脂素(12)。结论化合物1、4、5为首次从前胡属植物中分离得到,化合物2、3、6～10、12为首次从该植物中分离得到。

钩吻的化学成分研究

目的研究马钱科胡蔓藤属植物钩吻Gelsemium elegans的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、HPLC等色谱方法进行分离纯化,通过理化性质及核磁共振谱学数据对分得的化合物进行结构鉴定。结果从钩吻的95%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为钩吻素子(1)、钩吻素甲(2)、钩吻绿碱(3)、钩吻素己(4)、花椒毒素(5)、香柑内酯(6)、异茴芹内酯(7)、欧前胡素(8)、蛇床子素(9)、对羟基苯甲酸(10)、香草酸(11)、β-谷甾醇(12)、β-胡萝卜苷(13)、钩吻内酰胺(14)、16-表伏康树卡平碱(15)。结论化合物5～9为首次从该种植物中分离得到。

一测多评法同时测定阿娜尔妇洁液中7种成分

目的建立阿娜尔妇洁液中7种成分花椒毒酚、花椒毒素、异茴芹内酯、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、欧前胡素、蛇床子素的一测多评法,验证该方法在阿娜尔妇洁液质量分析中应用的科学性与可行性。方法采用HPLC法,以花椒毒酚为内参物,建立花椒毒素、异茴芹内酯、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、欧前胡素、蛇床子素的相对校正因子(fs/i),并利用fs/i计算阿娜尔妇洁液中该7种成分的含量,同时采用外标法计算各成分的含量,并比较2种方法差异。结果花椒毒素、异茴芹内酯、羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、欧前胡素、蛇床子素的fs/i分别为1.0057、1.2721、2.4210、3.1606、1.2054、1.2993。一测多评法与外标法得到的10批阿娜尔妇洁液样品含量测定结果RSD<2.0%,没有显著差异。结论在对照品短缺的情况下,以花椒毒酚为内参物,建立的一测多评法可用于阿娜尔妇洁液中多指标成分的含量测定和质量评价。

蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的高效液相色谱-二级管阵列检测法同时测定

目的建立同时测定蛇床子中佛手柑内酯和异虎耳草素含量的方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法对其含量进行测定，色谱柱为SinoChromC18（250ram×4．6ram，5μm，Elite），流动相为甲醇-0．1％醋酸（55：45），流速1.0ml／min，柱温250C；二极管阵列检测器（DAD）检测器，检测波长310nm。结果佛手柑内酯在0．0315～0．945txg范围内呈良好的线性关系A=2385C～6．666（r=0．9999），异虎耳草素在0．0296—0．888μg范围内呈良好的线性关系A=1711C＋1．203（r=0．9999）；平均回收率分别为99．2％和99．1％，相对标准偏差分别为0．91％和0．67％（n=6）；在常温下8h内稳定性较好。结论HPLC—DAD法简便快速，准确，重现性好，结果可靠，可作为蛇床子的质量控制方法。

异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

目的:观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞γ-氨基丁酸(GABA),5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组,地西泮组(25 mg·L^-1),异虎耳草素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·L^-1),共5组,给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA,5-HT含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA1,GABRA5,GABRB2,γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)基因GABBR1,5-羟色胺1A型受体(5-HT1A)基因5-HT1A(A),5-HT1A(B),5-HT1A(C)表达的变化。结果:第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度> 90%;与空白组比较,海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(P <0. 01),GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(P <0. 01),GABRA1,GABRA5,5-HT1A(A),5-HT1A(C)mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(P <0. 05,P <0. 01),GABBR1,5-HT1A(B)mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论:异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡,升高抑制性神经递质GABA含量,上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。

毛酸浆果实化学成分的分离与鉴定

目的研究毛酸浆Physalis pubescens新鲜果实的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等多种色谱手段进行分离纯化,通过理化性质和多种波谱分析技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从毛酸浆新鲜果实75%乙醇溶液提取物中共分离得到20个化合物,分别鉴定为蛇床子素(1)、8-甲氧基补骨脂素(2)、异茴芹素(3)、欧前胡素(4)、(-)-橙皮内酯水合物(5)、酸橙素烯醇(6)、1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)ethanone(7)、2,5-二甲氧基对苯醌(8)、对羟基苯乙酸(9)、(S)-methyl 2-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)acetate(10)、pyrocatechol 1-O-β-D-glucopyranoside(11)、benzylβ-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(12)、2-phenylethyl-O-β-D-glucopyranoside(13)、对羟基苯丙酸(14)、3,4-二羟基苯丙酸(15)、(1-O-p-coumaroyl)-(6-O-β-glucosyl)-β-glucoside(16)、1-O-trans-cinnamoyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(17)、N-反式阿魏酰酪胺(18)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、佛手柑内酯(20)。结论化合物1～16均为首次从酸浆属植物中分离得到;化合物17～20均为首次从该植物中分离得到。