利用模拟酶催化显色和等温核酸扩增反应检测特定序列DNA

基于血红素（Hemin）与G-四联体（G4）所形成模拟酶的催化作用,结合等温指数扩增反应（IEX-PAR）,建立了特定序列DNA的显色检测方法.目标DNA引发IEXPAR,通过设计模板序列,IEXPAR产生大量富含鸟嘌呤的单链DNA,在K＋存在时,该单链DNA可形成G4结构,G4可以与Hemin结合形成具有过氧化物酶活性的模拟酶（Hemin-G4）,Hemin-G4催化H2 O2氧化2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）,使体系颜色发生变化,反应产物最大吸收波长为421 nm.对显色反应体系中的实验参数进行了优化,包括Hemin浓度、ABTS浓度、H2 O2浓度、IEXPAR时间和显色反应时间.在最佳条件下,所建立的体系可以简便、快速检测0.1 ～ 10 nmol/L的目标DNA分子,且本方法能够很好地区分单个碱基的差别,具有良好的特异性.

基于恒温指数扩增反应高灵敏度检测端粒酶活性

端粒酶延伸产物是具有(ggttag)n重复序列的DNA.设计1条与2个重复序列相匹配的特异性的DNA探针-(ctaacc)2使其与端粒酶延伸产物杂交,形成双链DNA.过量的DNA探针被磁性石墨烯吸附,通过磁分离去除.利用恒温指数扩增反应(IEXPAR)对端粒酶延伸产物捕捉的DNA探针进行快速的扩增.用与双链DNA特异性结合的SYBR Green I染料对扩增产物进行实时荧光检测.在优化条件下,可以检测到低至50个癌细胞中的端粒酶活性.实现了恒温扩增条件下端粒酶活性的高灵敏度检测.

基于DNA“Y”型结构的指数型核酸恒温扩增策略检测microRNA

该文基于“Y”型DNA模板和恒温指数扩增反应(EXPAR)技术的信号放大功能,建立了一种快速低序列依赖性的miRNA检测方法(Y-EXPAR)。以let-7b为检测目标,设计两条部分互补的DNA模板,与目标miRNA共同构成“Y”型结构,能够同时进行双向扩增,反应效率高,反应时间短,并降低了放大性能对模板序列的依赖。方法检出限低至0.3 amol/L(相当于10μL溶液中有1.8拷贝的let-7b),并能区分单碱基差异的let-7家族同源序列。应用于肿瘤细胞裂解液let-7b的检测,POI值与细胞数目对数值呈线性关系,说明Y-EXPAR在实际样品miRNA的检测中具有优势。得益于扩增的高特异性、抗干扰性和低序列依赖性,该方法为miRNA的快速检测提供了新思路,在miRNA相关的疾病研究和临床诊断方面具有良好应用前景。