中华苦荬菜中Ixerin D和chinensiolide B的含量分析

建立HPLC法同时测定中华苦荬菜中Ixerin D和chinensiolide B含量,并对不同采收期、部位中的这两种成分进行比较。在流动相为水-甲醇梯度洗脱(0→5 min,90﹕10;5→10 min,90﹕10→80﹕20,10→22 min,80﹕20;22→45 min,80﹕20→75﹕25;45→50 min,75﹕25→73﹕27),流速1.0 m L/min,检测波长210 nm条件下测定。平均加样回收率分别为101.5%,100.4%。采收的样品中,随着生长期延长,两者含量均呈现两个增长周期,都是先升高再降低后又升高又降低的趋势,其中6月末叶部的Ixerin D含量最高,chinensiolide B的含量以6月下旬在叶部最高。

超高效液相色谱-质谱/质谱联用法快速测定苦碟子注射液中两种倍半萜内酯类成分的含量

目的:建立快速测定苦碟子注射液中两种倍半萜内酯类成分Ixerin Z、11,13α-dihydroixerin Z含量的超高效液相色谱-质谱/质谱联用方法(UPLC-ESI-MS/MS)。方法:采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水系统梯度洗脱,流速为0.4 m L·min-1,柱温为40℃;在ESI负离子模式下,采用多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测。结果:苦碟子注射液中两种倍半萜内酯类成分在2 min内完全分离,Ixerin Z的线性范围在5.70-182.50 ng·m L-1,11,13α-dihydroixerin Z的线性范围在4.60-131.25 ng·m L-1,相关系数r均大于0.999 0,加样回收率(n=6)分别为98.18%、97.52%,RSD值均小于1.5%。应用所建立的方法对市售苦碟子注射液中两种倍半萜内酯类成分Ixerin Z、11,13α-dihydroixerin Z进行含量测定,两个厂家6个批次苦碟子注射液中Ixerin Z、11,13α-dihydroixerin Z的含量有一定的差异。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏,可用于苦碟子注射液中两种倍半萜内酯类成分的含量测定。

基于UHPLC-LTQ/Orbitrap MS法的苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z的大鼠肝微粒体体外代谢产物鉴定

苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z是苦碟子(Ixeris sonchifolia(Bunge)Hance)中2种重要的倍半萜内酯类成分。为研究它们在大鼠肝微粒体中的代谢产物,采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm×1.7μm)分离,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,采用高效液相色谱-线性离子阱静电轨道场质谱(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)技术,在ESI负离子模式下分析样品。筛选出18个化合物(包括苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z,及其16个代谢产物),并对其中15个代谢产物进行结构鉴定。结果表明,苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z经大鼠肝微粒体主要发生了羟基化、加氢和脱氢的Ⅰ相代谢反应。该结果初步阐明了苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z在大鼠肝微粒体中的代谢规律,可为新药、毒理学研究提供支持。

苦碟子中2个倍半萜内酯的牛血清白蛋白结合率的测定

目的:研究苦碟子中倍半萜内酯类化合物苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z的牛血清白蛋白的结合率。方法:采用HPLC法测定苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z的总浓度及游离药物浓度,色谱分离采用Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以水(A)-甲醇(B)为流动相,线性梯度洗脱(0~5 min,30%B→37%B;5~15 min,37%B→52%B;15~22 min,52%B→60%B),流速1.0mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长272 nm,进样量10μL;在37℃条件下,应用平衡透析法测定苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z的牛血清白蛋白结合率。结果:低、中、高3个浓度下,苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z的牛血清白蛋白结合率分别为51.21%、54.72%、52.14%和50.63%、52.82%、50.28%。结论:苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z具有中等强度的蛋白结合率,且无明显的浓度依赖性。

苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的抑制作用

目的探讨苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶活性的抑制作用。方法将大鼠肝微粒体、苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z与探针底物(非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、睾酮和氯唑沙宗)共同孵育,超高效液相色谱质谱联用技术检测各探针底物的代谢物含量,分析苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用。结果苦荬菜内酯Z对CYP2C9和CYP2C19分别有中等抑制作用和弱抑制作用,半数抑制浓度为9.46μmol/L和21.76μmol/L;11,13α-二氢苦荬菜内酯Z对CYP2C9和CYP2C19分别有弱抑制作用和中等抑制作用,半数抑制浓度为92.31μmol/L和4.65μmol/L。结论苦荬菜内酯Z和11,13α-二氢苦荬菜内酯Z对大鼠CYP2C9和CYP2C19均有不同程度的抑制作用,可能与经过CYP2C9和CYP2C19代谢的药物发生相互作用。