华良姜素对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

[目的]探讨华良姜素对PDGF-BB诱导下血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及可能的机制。[方法]利用25μg/L的PDGF-BB处理人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移。实验分为正常对照组、PDGF-BB组(模型组)、PDGF-BB+华良姜素(10、20、40μmol/L)组和DMSO组。采用CCK-8实验检测HA-VSMC增殖活力,Transwell实验检测HA-VSMC迁移能力,Western blot检测自噬效应蛋白p62、LC3、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平的变化。[结果]PDGF-BB处理后,HA-VSMC增殖和迁移能力显著上调(P<0.01),华良姜素显著抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,且随浓度的上升抑制能力越明显(P<0.05)。与模型组比较,40μmol/L华良姜素处理后,LC3Ⅰ以及mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62与p-mTOR蛋白表达水平显著升高(P<0.05),同时发现40μmol/L华良姜素与AMPK抑制剂Compound C,对PDGF-BB诱导的HA-VSMC AMPK/mTOR信号通路的影响一致。[结论]华良姜素可抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,其作用机制可能是通过上调AMPK/mTOR信号通路,抑制自噬实现。

基于网络药理学和分子对接的玉屏风散预防新型冠状病毒肺炎(COVID-19)活性化合物的研究

目的采用网络药理学和分子对接技术探寻玉屏风散预防新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的活性化合物,以期将其更好地应用于临床。方法在中药系统药理学分析平台(TCMSP)网站检索玉屏风散中黄芪、白术、防风3味中药的全部有效成分及作用靶点,通过String数据库生成玉屏风散的蛋白与蛋白相互作用(PPI)网络,用Cytoscape3.6.1软件进行数据分析提取PPI网络中的Hub网络,通过String数据库的analysis功能进行KEGG通路分析,用ChemOffice、PyMOL、Auto Dock软件进行分子对接。结果限定筛选条件为口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18共得到45个活性成分,筛选得到玉屏风散的潜在靶点345个,关键靶点共15个,通过KEGG通路分析得到50条通路,筛选得到25条主要通路,包含PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路和T细胞受体信号通路等。结论玉屏风散中的活性化合物能通过抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)蛋白与血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)结合,作用于PIK3R1、IGF1R等靶点,调节多条信号通路,起到预防COVID-19的作用。

基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华良姜素(0、5、10、25、50、100、150、300μmol·L^(-1))对HepG2细胞不同时间(24、48、72 h)的增殖抑制作用;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测华良姜素(0、3、15、75μmol·L^(-1))对HepG2细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响;转录组学分析华良姜素(15μmol·L^(-1))对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证差异基因[TEK、血小板源性生长因子α受体(PDGFRA)、脾酪氨酸激酶(SYK)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽(PIK3CG)、Janus激酶3(JAK3)、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2(MAGI2)]mRNA相对表达。结果:与空白组比较,华良姜素组HepG2细胞的增殖降低(P<0.05,P<0.01);凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.01);转录测序得到59000个受调控的表达基因,受调控显著差异表达基因125个,其中表达上调差异基因47个,表达下调差异基因74个,京都基因和基因组数据库(KEGG)分析显示,加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较,华良姜素组(15μmol·L^(-1))TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖,初步验证其凋亡,可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础,同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。