秋水仙素浓度和处理时间对茉莉腋芽生长发育的影响

为了解秋水仙素处理对茉莉〔 Jasminum sambac （Linn .） Aiton〕 腋芽生长发育的影响,以长度为0 （未萌发）、3-5 和 8-10 mm 腋芽为实验材料, 对5 0 0 、1 0 0 0和2 000 mg·L^-1秋水仙素溶液分别处理2 4 和48 h 后腋芽的生长状况以及萌发枝条和叶片的生长和发育状况进行分析, 同时, 对各处理组花粉母细胞的减数分裂行为进行观察;在此基础上, 对秋水仙素处理后茉莉腋芽及萌发枝条的各生物学效应指标进行相关性分析.结果显示：经秋水仙素处理后, 各处理组腋芽的生长率和处理指数, 以及萌发枝条的长度、 最大节间长、 最大叶长、 最大叶宽、 现蕾数、 现蕾率、 最大蕾长、 最大蕾宽和开花率总体上显著（ P 〈 0 . 0 5 ）低于对照组（用清水处理未萌发腋芽4 8 h ） , 而腋芽的抑制率和死亡率显著高于对照组.总体上看, 随秋水仙素质量浓度提高, 腋芽的生长率和处理指数降低, 而抑制率和死亡率升高, 萌发枝条的长度和最大节间长缩短, 开花率升高, 其他指标呈波动变化; 随处理时间延长, 腋芽的生长率、 死亡率和处理指数降低, 但抑制率升高, 萌发枝条仅现蕾数和开花率降低, 其他指标均逐渐提高;随腋芽长度增加, 腋芽的抑制率和处理指数降低, 但死亡率升高, 萌发枝条的现蕾率、 现蕾数、 最大蕾长和开花率均呈波动变化,其他指标均降低.经秋水仙素处理后, 茉莉花粉母细胞在减数分裂过程中存在落后染色体、 染色体桥和微核等异 常现象, 且随秋水仙素质量浓度和腋芽长度增加及处理时间延长, 减数分裂后期的细胞异常率逐渐升高.相关性分析结果显示：细胞异常率与腋芽生长率呈显著负相关, 与腋芽死亡率呈极显著正相关;腋芽生长率与腋芽抑制率和开花率分别呈显著和极显著（ P〈0 . 0 1 ）负相关;腋芽抑制率与现蕾率呈显著正相关;处理指数与细胞异常率呈极显著负相关.研究结果表明：秋水仙素浓度和处理时间对茉莉腋芽的生长发育有一定影响;综合考虑各生物学效 应指标, 茉莉腋芽适宜的诱导条件为用500mg·L^-1秋水仙素溶液处理3 - 5 m m腋芽2 4h .此外, 建议将处理指数作为秋水仙素对茉莉腋芽细胞减数分裂影响效应的评价指标之一.

茉莉花ISSR-PCR反应体系的建立

以茉莉花为材料，研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对茉莉花ISSR扩增结果的影响。结果表明：在20μL的反应体中，Mg^2＋的用量为1．2～1．6mmol／L，dNTPs浓度为0．15mmol／L，引物的浓度为0．5μmol／L，TaqDNA聚合酶的用量为1U，模板DNA的用量为40-70ng，在48-50℃的退火温度下40个循环，能得到清晰、多态性高的ISSR带谱。

刺葡萄DFR基因植物表达载体构建及转化茉莉花愈伤组织的研究

本研究以从刺葡萄克隆获得的DFR基因为目的基因,同时从质粒p CAMBIA1302中扩增获得Ca MV35S启动子和NOS终止子,并利用双酶切法构建由Ca MV35S启动子驱动DFR基因且带有NOS终止子的表达载体,验证测序结果显示成功构建了p CAMBIA1302-35S-DFR-NOS植物表达载体,并将该载体转化到农杆菌EHA105中。采用农杆菌注射渗透法转化烟草叶片进行瞬时表达,经鉴定,转化后的烟草叶片中能检测到GFP基因的表达。采用农杆菌介导法将该植物表达载体转化受体茉莉花愈伤组织,经多轮抗性筛选获得了转基因抗性愈伤组织,经PCR鉴定,茉莉花转基因抗性愈伤组织中检测到GFP、Hyg和DFR基因等的存在,初步证明目的基因DFR已成功整合到宿主的基因组中。茉莉花愈伤组织遗传转化体系的建立,验证了花色苷合成相关基因转化茉莉花愈伤组织的可行性,为今后通过植物转基因技术丰富茉莉花的花色奠定基础。