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紫花苜蓿MsJMT基因的克隆及其与育性的关联分析
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作者 徐小博 王鑫尧 +2 位作者 郁伟杰 苗一凡 徐博 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2306-2314,共9页
以实验室前期对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)不育系BSA-Seq分析为背景,为探究茉莉酸类对其育性的影响,本试验采用PCR法,成功从紫花苜蓿基因组中克隆了一个全长1047bp,功能为控制茉莉酸O-甲基转移酶合成的基因,命名为MsJMT。分析表达模... 以实验室前期对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)不育系BSA-Seq分析为背景,为探究茉莉酸类对其育性的影响,本试验采用PCR法,成功从紫花苜蓿基因组中克隆了一个全长1047bp,功能为控制茉莉酸O-甲基转移酶合成的基因,命名为MsJMT。分析表达模式后发现,该基因编码氨基酸348个,编码蛋白为不稳定非分泌亲水蛋白。亚细胞定位结果为核质表达。构建基因进化树后,验证其氨基酸序列与5种豆科植物相似度达99%以上。利用qPCR技术分析其对紫花苜蓿花苞育性的时空表达差异,结果显示不育系全时期表达量比保持系高且在Ⅲ时期两者差异极显著(P<0.01)。而茉莉酸含量测定结果则相反,为不育系全时期低于保持系,且保持系Ⅲ时期含量最高。利用外源茉莉酸甲酯喷施处理Ⅲ时期花苞,结果为在0.5mmol·L^(-1),1mmol·L^(-1)水平下花药提前开裂。研究结果表明MsJMT可能通过茉莉酸通路影响紫花苜蓿育性。 展开更多
关键词 茉莉酸甲基转移酶 紫花苜蓿 基因克隆 序列分析 不育系
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茉莉酸羧基甲基转移酶基因的克隆及其高效表达载体的构建 被引量:3
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作者 张婷婷 杨春贤 +1 位作者 王宏哲 廖志华 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期68-72,共5页
以拟南芥花为材料,应用RT-PCR方法克隆拟南芥茉莉酸甲酯合成途径中重要的限速酶——茉莉酸羧基甲基转移酶基因,并进行生物信息学分析,以pCAMBIA1304+为基本载体构建其植物高效表达载体pCAM-BIA1304+-AtJMT.克隆到的AtJMT编码区序列为1 1... 以拟南芥花为材料,应用RT-PCR方法克隆拟南芥茉莉酸甲酯合成途径中重要的限速酶——茉莉酸羧基甲基转移酶基因,并进行生物信息学分析,以pCAMBIA1304+为基本载体构建其植物高效表达载体pCAM-BIA1304+-AtJMT.克隆到的AtJMT编码区序列为1 170 bp,编码389个氨基酸的多肽.生物信息学分析该蛋白理论分子量为43.37 kD,等电点为5.18.三级结构预测表明其具有典型的羧基甲基转移酶蛋白功能域甲基供体的结合位点,蛋白质三维模型具有典型的甲基转移酶的蛋白立体结构.获得的工程菌可用于遗传转化长春花等,为萜类吲哚生物碱代谢工程新型策略奠定基础. 展开更多
关键词 茉莉酸甲基转移酶 克隆 生物信息学
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月季茉莉酸羧基甲基转移酶基因RhJMT对花瓣衰老的调控
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作者 刘嘉琦 公菲菲 +5 位作者 张颢 景维坤 瞿素萍 马男 高俊平 孙小明 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1025-1036,共12页
为了解茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)在花瓣衰老中的作用机制,以月季‘Samantha’为材料,在花瓣中克隆了MeJA生物合成关键酶茉莉酸羧基甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)基因RhJMT。同源蛋白序列比对和系... 为了解茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)在花瓣衰老中的作用机制,以月季‘Samantha’为材料,在花瓣中克隆了MeJA生物合成关键酶茉莉酸羧基甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)基因RhJMT。同源蛋白序列比对和系统进化树分析表明,RhJMT具有保守的Methylyransf_7超家族结构域,属于SABATH蛋白家族。实时荧光定量PCR结果表明,RhJMT的表达量在花瓣进入衰老期后显著升高。通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术对RhJMT进行功能验证,结果表明沉默RhJMT显著延缓花瓣衰老,外源施加MeJA能够抵消沉默RhJMT对花瓣衰老的延缓作用。以上结果说明RhJMT能够促进花瓣衰老,可能是通过控制MeJA的含量来发挥作用。 展开更多
关键词 月季 花瓣衰老 茉莉酸甲酯(MeJA) 茉莉酸甲基转移酶(jmt) VIGS
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白花虎眼万年青QtJMT基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:3
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作者 姜福星 赵婕 +2 位作者 孙晓兰 宋贤 陈其兵 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3267-3273,共7页
茉莉酸及其甲基化的衍生产物茉莉酸甲酯,后者具有较高生物活性,在植物的生命活动过程中发挥重要作用。茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase, JMT)作为甲基转移酶类家族中的重要成员,是将茉莉酸甲基化衍生为茉莉... 茉莉酸及其甲基化的衍生产物茉莉酸甲酯,后者具有较高生物活性,在植物的生命活动过程中发挥重要作用。茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase, JMT)作为甲基转移酶类家族中的重要成员,是将茉莉酸甲基化衍生为茉莉酸甲酯过程中发挥催化作用的关键酶,过表达能够使得植物内源茉莉酸甲酯的生物合成能力增强,内源茉莉酸甲酯的含量提高,进而增强植物抗逆性及提高植物次生代谢物质含量,以及调控植物生长发育。白花虎眼万年青具有抗逆性强、次生代谢物质丰富、以及器官再生方式独特等特点,可能具有较高生物活性的茉莉酸甲基转移酶及其分子机制,但是尚未见到报道。本研究根据白花虎眼万年青叶上珠芽转录组分析数据,设计引物,克隆分离出茉莉酸甲基转移酶基因完整编码区,进而对其进行了三维立体结构、蛋白质保守序列及系统发育等生物信息学分析,将其命名为QtJMT基因,并成功将其连接到泛素启动子(pUB)驱动的植物表达载体上。本研究结果为QtJMT基因的深入分析其功能及在花卉分子育种中的应用提供了一定的依据。 展开更多
关键词 白花虎眼万年青(Ornithogalum thyroides) 茉莉酸甲基转移酶(jmt) 基因克隆 植物表达载体构建
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茶树茉莉酸羧基甲基转移酶基因(CsJMT1)的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 曹克梅 杨春 +6 位作者 郭燕 陈娟 李燕 梁思慧 林开勤 乔大河 陈正武 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第8期2437-2449,共13页
茉莉酸羧基甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase, JMT)在茉莉酸类介导的植物生长发育以及防御调控中发挥着重要作用。本研究以茶树品种‘黔茶1号’为材料,利用RT-PCR方法克隆了一个JMT基因并将其命名为CsJMT1。该基因... 茉莉酸羧基甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase, JMT)在茉莉酸类介导的植物生长发育以及防御调控中发挥着重要作用。本研究以茶树品种‘黔茶1号’为材料,利用RT-PCR方法克隆了一个JMT基因并将其命名为CsJMT1。该基因编码区全长1 077 bp,编码358个氨基酸,含有一个Methyltransf7功能结构域,属于SABATH家族成员。进化树分析显示其与柑橘和雷公藤的JMT序列亲缘关系最近,序列相似性分别为73.7%和72.7%。以CsJMT1的全长开放阅读框(ORF)序列构建GFP融合蛋白表达载体,基于拟南芥原生质体的亚细胞定位分析显示其定位在细胞质。原核表达和蛋白纯化显示在破碎的细胞上清中可以检测到目的蛋白的表达。对外源JA、SA和Me SA处理以及茶尺蠖取食后‘黔茶1号’叶片中CsJMT1的表达进行荧光定量PCR分析,结果显示外源JA、SA处理后其表达均显著下调,但在JA处理后48 h其表达量又明显上调;而MeSA处理后2 h CsJMT1的表达量达到峰值,随后又显著下调,在处理后24 h又恢复到处理前水平;茶尺蠖取食则能够显著诱导其表达。对3个品种的茶叶鲜叶摊放(萎凋)处理不同时间后检测CsJMT1的表达情况则显示摊放(萎凋)处理诱导了其表达,但不同品种的诱导程度存在差异。本研究结果初步明确了CsJMT1能够参与茶树防御响应以及香气形成调控。 展开更多
关键词 茶树 茉莉酸羧基甲基转移酶 亚细胞定位 原核表达 茶尺蠖
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Jasmonic acid carboxyl methyltransferase regulates development and herbivory-induced defense response in rice 被引量:11
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作者 Jinfeng Qi Jiancai Li +7 位作者 Xiu Han Ran Li Jianqiang Wu Haixin Yu Lingfei Hu Yutao Xiao Jing Lu Yonggen Lou 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期564-576,共13页
Jasmonic acid(JA) and related metabolites play a key role in plant defense and growth. JA carboxyl methyltransferase(JMT) may be involved in plant defense and development by methylating JA to methyl jasmonate(Me... Jasmonic acid(JA) and related metabolites play a key role in plant defense and growth. JA carboxyl methyltransferase(JMT) may be involved in plant defense and development by methylating JA to methyl jasmonate(Me JA) and thus influencing the concentrations of JA and related metabolites. However, no JMT gene has been well characterized in monocotyledon defense and development at the molecular level. After we cloned a rice JMT gene,Os JMT1, whose encoding protein was localized in the cytosol, we found that the recombinant Os JMT1 protein catalyzed JA to Me JA. Os JMT1 is up-regulated in response to infestation with the brown planthopper(BPH; Nilaparvata lugens). Plants in which Os JMT1 had been overexpressed(oeJMT plants) showed reduced height and yield. These oe-JMT plants also exhibited increased Me JA levels but reduced levels of herbivore-induced JA and jasmonoyl-isoleucine(JAIle). The oe-JMT plants were more attractive to BPH female adults but showed increased resistance to BPH nymphs,probably owing to the different responses of BPH female adults and nymphs to the changes in levels of H_2O_2 and Me JA in oe-JMT plants. These results indicate that Os JMT1,by altering levels of JA and related metabolites, plays a role in regulating plant development and herbivore-induced defense responses in rice. 展开更多
关键词 Herbivore-induced plant defense jasmonic acid jasmonic acid carboxyl methyltransferase jasmonoyl-isoleucine methyl jasmonate Nilaparvata lugens rice
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丹参茉莉酸羧甲基转移酶的原核蛋白表达分析 被引量:1
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作者 王斌 李敏 +2 位作者 王剑锋 陈传红 刘少芳 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5222-5227,共6页
茉莉酸羧甲基转移酶基因(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是植物茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)生物合成过程中的关键酶基因,在植物体内可依赖S-腺苷-蛋氨酸(S-adenosyladenylL-methionine,SAM)作为甲基供体,催化茉... 茉莉酸羧甲基转移酶基因(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是植物茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)生物合成过程中的关键酶基因,在植物体内可依赖S-腺苷-蛋氨酸(S-adenosyladenylL-methionine,SAM)作为甲基供体,催化茉莉酸(jasmonic acid,JA)形成茉莉酸甲酯。本研究将丹参茉莉酸羧甲基转移酶基因cDNA构建到原核表达载体PET-28a(+)上后转化到大肠杆菌BL21(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。SDS-PAGE凝胶电泳检测结果表明该蛋白的分子量大小约44 kD,与预测的蛋白分子质量大小一致,从而证实丹参JMT基因在大肠杆菌中表达成功。丹参JMT基因在原核细胞表达将对此酶基因的蛋白纯化、体外酶活力检测以及基因功能等研究奠定一定的基础。 展开更多
关键词 丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge) 茉莉酸羧甲基转移酶(jmt) 茉莉酸甲酯 原核表达
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丹参茉莉酸甲基转移酶蛋白表达和纯化的研究 被引量:2
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作者 姚娜 郑汉 +3 位作者 荆礼 马利刚 申业 陈敏 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1643-1650,共8页
茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是茉莉酸生物合成途径中的关键酶,能够催化茉莉酸甲基化形成茉莉酸甲酯。本研究将丹参茉莉酸甲基转移酶基因(SmJMT1)c DNA构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌B... 茉莉酸甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是茉莉酸生物合成途径中的关键酶,能够催化茉莉酸甲基化形成茉莉酸甲酯。本研究将丹参茉莉酸甲基转移酶基因(SmJMT1)c DNA构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明该蛋白的大小约66 kDa,与预测的蛋白分子质量相同;同时对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明当诱导前菌液的A600在0.8左右时,加入0.4 mmol·L^(-1)IPTG,20℃诱导培养8 h后SmJMT1蛋白的表达量较高。蛋白质印迹检测显示,anti-GST抗体可以特异性地识别SmJMT1蛋白,证实丹参SmJMT1蛋白在大肠杆菌中表达成功;Q-TOF检测数据检索分析表明,SmJMT1蛋白属于甲基转移酶亚家族。丹参中茉莉酸甲基转移酶SmJMT1的成功表达和纯化对研究茉莉酸生物合成途径及茉莉酸对药用植物次生代谢调控奠定了一定基础。 展开更多
关键词 丹参 茉莉酸甲基转移酶 蛋白表达纯化 蛋白质印迹 Q-TOF
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