贵州剑河白、黑香猪的血液蛋白多态性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定贵州剑河白、黑香猪血清转铁蛋白（Ｔｆ） 、前白蛋白（Ｐａ） 、后白蛋白（Ｐｏ） 、淀粉酶（Ａｍ） ，酯酶（Ｅｓ） 的遗传多态性。并计算它们的基因型频率和基因频率，以及５ 个多态位点的平均杂合度。结果表明，贵州剑河白、黑香猪５ 个多态位点的基因型频率和基因频率差异不显著（Ｐ＞ ０ ．０５） ，平均杂合度均较小，且两者间差异不显著（Ｐ＞ ０ ．０５） 。

贵州从江香猪体成分沉积规律与肉质营养特性

为充分开发、利用贵州从江香猪遗传资源特点,选取7kg、16kg和25kg体重生长肥育猪(公母各1/2)共18头屠宰,对从江香猪体成分沉积规律和肉质营养特性进行了系统研究。结果表明:贵州从江香猪鲜肉的蛋白质含量为(17.04±0.26)%,氨基酸在不同体重间保持一致,随着体重的增加,体成分沉积的变化主要表现在水分的减少和作为贮备物质的脂肪的增加。无脂干物质中蛋白质含量达85.83%～87.10%,含人体所需的全部必需氨基酸,氨基酸组成与人体氨基酸需要模型非常接近;富含风味氨基酸,谷氨酸和天门冬氨酸含量高达240.46mg/g;必需氨基酸与总氨基酸比值(EAA/TAA)为41.19%。高于FAO/WHO理想食物蛋白质中EAA/TAA的推荐比例(约40%),是理想的膳食肉蛋白质来源。

贵州香猪内源氮与内源氨基酸代谢规律研究

选择3.5～4.0月龄、遗传来源相似、体重(12±2)kg的贵州从江香猪、剑白香猪去势公猪各6头,采用无氮饲粮(NFD)法和NFD+5%酶解酪蛋白(EHC)法进行代谢试验,测定贵州香猪内源氮与内源氨基酸的代谢规律,探索贵州香猪的维持蛋白质和氨基酸需要量。研究显示,贵州香猪内源氮排泄量为0.212 g/d W0.75,内源氨基酸排泄量为1.463 g/d W0.75。结果表明,贵州香猪可消化粗蛋白质维持需要量(DCPm)为1.91 g/d W0.75,可消化氨基酸维持需要量为2.10 g/d W0.75,以Lys为100建立贵州香猪维持需要可消化氨基酸模型为:Lys 100、Thr 54、Val 188、Met 40、Ile 79、Leu 126、Phe 101、His 25、Arg 58、Trp 17。

三种小型猪线粒体DNA控制区的比较研究

目的分析五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪线粒体DNA控制区碱基序列,比较研究不同猪种的遗传标志。方法应用PCR技术分别对这三种小型猪的血液总DNA样品中线粒体DNA D-loop区进行扩增,测序比对。结果猪的线粒体DNAD-loop区分三个区域。I区(靠近5′端区域)704 bp,五指山小型猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点中归纳出3个单倍体,而巴马小型猪在此区有9个变异位点,通过9个变异位点归纳出4个单倍体,贵州香猪在此区共有6个变异位点,通过6个变异位点归纳出3个单倍体。Ⅱ区(串联重复序列区),五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪序列相同。Ⅲ区(靠近3′端区域)三种小型猪的序列几乎相同。结论五指山小型猪、巴马小型猪和贵州香猪三种小型猪之间线粒体DNA碱基序列变异位点较少,五指山小型猪和巴马小型猪亲缘关系较近。

贵州从江香猪与中国农大小型猪Ⅰ系的杂交性能

为加快贵州香猪资源的开发利用,培育出高品质的实验用小型猪,以贵州从江香猪为母本、中国农大小型猪Ⅰ系为父本进行杂交,测定杂交猪(农×从杂交猪)的繁殖性能和F1代的生长发育性能指标。结果表明:农×从杂交猪的平均窝产仔数为10.26头,窝断奶仔猪数为8.89头,仔猪初生重为0.68kg/头,与贵州从江香猪差异不显著(P>0.05);农×从杂交猪F1代的生长速度缓慢,6月龄杂交猪平均体重为25.85kg,体高为42.44cm,体长为75.29cm,胸围为69.78cm,均显著低于纯繁贵州从江香猪(P<0.05)。农×从杂交猪F1代体型矮小,生长发育缓慢,是较为理想的实验动物选育群。

从江香猪和大白猪不同组织/器官中GHR、JAK2、STAT3基因的表达分析

为了分析从江香猪和大白猪不同组织中GHR、JAK2、STAT3基因的表达差异,试验取6月龄、体况相近且饲养环境相同的贵州从江香猪和大白猪各4头,分别提取心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脂肪、大肠、小肠和背最长肌组织的总RNA,以猪GAPDH基因为内参,设计GHR、JAK2、STAT3基因的荧光定量引物,以荧光定量PCR法检测GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织中的表达量。结果表明：GHR、JAK2、STAT3基因在两个品种不同组织/器官中均有表达,其中GHR基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著（P〈0. 01）,在脂肪中相对表达量最低; JAK2基因在肝脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著（P〈0. 01）,在背最长肌中相对表达量最低; STAT3基因在肾脏中相对表达量最高,且与其他组织/器官相比差异极显著（P〈0. 01）,在背最长肌中相对表达量最低。说明GHR、JAK2、STAT3基因在动物生长发育过程中发挥重要作用,在不同组织器官中的表达存在差异。

贵州香猪内源钙磷代谢及7～25kg生长阶段的钙磷沉积规律与需要量研究

为研究贵州香猪维持和生长的钙、磷需要量,选择3.5～4.0月龄,遗传来源相似,体重(11.06±2.61)kg的贵州从江香猪和剑白香猪去势公猪各6头,采用无钙无磷纯合饲粮法进行代谢试验,测定贵州香猪内源钙与内源磷的代谢规律。并选择60～75日龄贵州从江香猪34头,采用扣除蛋白质等消化能(DEpf)饲粮设计和比较屠宰试验,测定贵州香猪生长的钙、磷沉积规律。结果表明:1)贵州香猪内源钙、磷排泄量分别为47.2和20.8 mg/kg BW;2)无脂增重的钙、磷沉积量在7～16 kg体重段分别为10.86和4.50 g/kg,在16～25 kg体重段分别为8.02和4.75 g/kg。由结果可得出,贵州香猪维持的净钙、净磷需要量分别为47.2和20.8 mg/kg BW,生长的净钙需要量为(10.03-0.184 BW)g/kg BW、净磷需要量约为3.46 g/kg BW,常规混合饲粮钙和有效磷的真消化率可按60%和67%估计。

贵州香猪7～25kg生长阶段的氨基酸沉积规律与需要量的研究

为研究贵州香猪7~25kg生长阶段的氨基酸沉积规律,本试验选取60~75日龄的贵州香猪34头（公母各占1/2）,采用扣除蛋白质等消化能（protein-free equalized digestible energy,DEpf）饲粮设计,通过比较屠宰试验,旨在建立贵州香猪在此生长阶段的氨基酸需要量模型。结果表明,贵州香猪每千克无脂增重的可消化赖氨酸（DLys）沉积量在7~16kg和16~25kg2个体重生长阶段及相应体重段的蛋白质与氨基酸不同梯度饲粮间基本一致,平均沉积量为15.33g;其他必需氨基酸的沉积量与Lys沉积量间保持稳定的比例关系;摄入DLys扣除与增重相应的维持Lys消耗后,剩余的几乎全部用于体蛋白质沉积,平均沉积率为95.36%。上述结果表明,Lys是贵州香猪的第一限制性氨基酸,每千克自然增重生长的DLys需要量为（13.58-0.075BW）g;以DLys沉积量为100建立的用于生长的可消化必需氨基酸需要量模型为：Lys100、Thr55、Val104、Met23、Ile44、Leu123、Phe15、His44、Arg92和Trp17。

贵州香猪能量代谢与沉积规律研究

为促进贵州香猪的科学饲养和制订《贵州香猪饲养标准》提供技术参数,选用从江香猪,采用扣除蛋白质等消化能（DEpf）日粮设计和比较屠宰试验,对贵州香猪能量沉积代谢规律进行了研究。结果表明,在相同DEpf进食水平下,贵州香猪DE转化为ME的效率为95.84%,维持DE需要为484 W0.75,每1kg增重生长DE需要：7~16kg体重段为21.17 MJ,16~25kg体重段为22.60 MJ。建立了贵州香猪的能量需要模型：DE（MJ/d）=238.0853 W0.75-100.0708 W＋0.0340 We＋473.8475△W-1590.0288△W2＋296395.1748△W2.6733e-398.7895（R2=0.9999,P〈0.01）。

贵州白香猪的遗传检测

选取27个微卫星位点,应用PCR技术对贵州白香猪的2个品系进行遗传质量监测。结果在所选的27个微卫星位点中,共有24个位点获得稳定的扩增结果,其中SW911位点与S0026两个位点在群体内表现为单态纯合。2个品系有效等位基因、平均多态信息含量、平均杂合度、基因纯合率和平均近交系数分别为1.8310、1.7951、0.3436、0.3249、0.4329、0.4188、52.63%、58.55%、0.5377、0.5605。结果表明微卫星标记可用于检测贵州白香猪的遗传质量,也可用于分析封闭群的遗传多态性。是一种有潜力的试验动物遗传学检测标记。

敌百虫急性染毒对贵州白香猪的影响

用10头贵州白香猪分为空白对照组(3头)和试验组(7头),试验组分别按5 000 mg/kg体重(1头)、3 000 mg/kg体重(1头)2、000 mg/kg体重(2头)、1 000 mg/kg体重(3头)经口灌胃一次染毒,从急性毒性效应、临床中毒症状、血液生理生化指标变化3个方面探讨敌百虫对贵州白香猪的急性毒性作用。结果表明:敌百虫对贵州白香猪的最小致死量(Dn)为1 000 mg/kg体重,全致死量(Dm)为2 000 mg/kg体重。同时探讨了大剂量、长期接触敌百虫可能引起动物免疫功能下降及血循状况改变,进而严重危害机体健康。

贵州白香猪两品系微卫星座位的遗传分析

采用24个微卫星标记对贵州白香猪2个品系的遗传变异进行了检测。试验结果表明,2个品系在24个微卫星基因座的平均等位基因、平均期望杂合度、平均多态信息含量和平均近交系数分别为2.1667、2.0417,0.4074、0.4188,0.3436、0.3249和0.5377、0.5605。结果提示贵州白香猪具有一定的遗传稳定性,已成为一个稳定的遗传群体,符合封闭群动物的遗传特征。

剑白香猪种公猪饲养管理及种用现状调查

以贵州黔东南州剑河县南寨、久仰2个乡镇剑白香猪种公猪为研究对象,通过对饲养管理及种用现状的调查,结果显示,剑白香猪种公猪的饲养量相对于繁殖母猪要少得多,远不能满足繁殖母猪的配种需求;在饲养上,初配年龄相对我国其他地方猪种早,使用年限较短;饲养管理较为粗放,以自然交配为唯一的繁育方式。通过对调查结果分析,对剑白香猪的饲养管理及保种工作提出了对策建议。

贵州香猪IGF 1基因的克隆及组织分布

应用RT—PCR技术从香猪肝脏克隆到胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor1，IGF-1）基因，共612bp，包含完整的开放读码框，与已知猪种的核苷酸相似性为99％～100％，编码的153个氨基酸包括信号肽、前体肽、B、C、A、D、E区，成熟肽仅由B到D区组成（70aa）。香猪IGF-1的氨基酸序列与长白猪完全一样，与淞辽黑猪相差一个氨基酸（E区）；与人、犬、牛、马等的差异主要集中在信号肽、前体肽和E区，成熟肽完全相同；与小鼠的差异最大，成熟肽区有4个氨基酸不同，其他区域还有11个氨基酸不同。对香猪IGF—1成熟肽的三维结构分析结果显示，蛋白有3个α-螺旋，3对二硫键分别联系α-螺旋的N端和C端。对香猪IGF-1基因的组织分布研究结果显示，IGF-1基因在肝脏、脾、脂肪、软骨、肌肉、子宫组织中均有表达，其中肝脏的表达量最高；脊髓、肺中未检测到表达，提示IGF—1的旁分泌作用具有组织特异性。

贵州剑河白香猪血液生化指标的测定

试验选择26只6月龄的健康贵州剑河白香猪,测定其常规血液生化指标:血糖Blu、血清谷草转氨酶GOT、血清谷丙转氨酶GPT、血清总胆固醇TC、血清钙、血清无机磷、血清钾、血清总蛋白TP、白蛋白ALB、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白、白/球A/G比。测定结果表明,贵州剑河白香猪的血液生化指标值与人类相近或相似,是理想的医学实验用动物。

贵州剑河香猪头骨测定

用同条件下饲养的６月龄贵州剑河白、黑香猪屠宰，对其头骨采用大体解剖学方法进行解剖，观测其结构和记录数据结果为，白香猪的顶骨、颞骨、额骨均小于黑香猪，两猪的颅骨各骨的面积相近，差异均不显著（Ｐ＞００５）；前颌骨、鼻骨、泪骨、颧骨测定结果白香猪小于黑香猪两猪面骨的种间差异均不显著（Ｐ＞００５）。

贵州香猪蛋白质沉积与代谢规律研究

笔者等选用（7．53±0．56）kg从江香猪34头，采用扣除蛋白质等消化能（DEpf）日粮设计和比较屠宰试验研究了贵州香猪蛋白质沉积代谢规律。结果表明，在相同DEpf进食水平下，贵州香猪DCP转化为维持与增重的综合效率为69．51％；维持的DCP需要为1．91W^075；每1kg增重生长的DCP需要，7～16kg体重段为256g、16-25kg体重段为231g。以此建立贵州香猪的DCP需要模型为：DCP（g／d）=2235．0064W^0.75-938．6982W＋0．3065W^e＋5911．9084△W-18419．6420△W^2＋3250154．5557△W^0.6733e-3815．1850（R^2=0．9925，P〈0．01）。

贵州香猪维持的钙、磷需要研究

选择3.5月龄、遗传来源相似、体重9.83±1.78 kg的贵州从江香猪去势公猪6头,采用NFD+5%EHC无钙无磷纯合饲粮法进行代谢试验,以测定贵州香猪内源钙与内源磷的代谢规律。结果表明,贵州香猪每千克自然体重内源钙、磷排泄量分别为47.31、20.74 mg/d。贵州香猪维持的净钙、净磷需要分别为0.047 3、0.020 7 g/kg BW。

贵州白香猪Gadd45G的cDNA克隆与序列分析

采用试剂盒提取RNA和RT-PCR法获得贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列,构建了贵州白香猪Gadd45G基因的pMD19亚克隆载体,并对该重组质粒进行测序分析,为贵州白香猪作为模式动物提供理论基础,为构建Gadd45G基因真核表达载体和转基因猪研究奠定基础。PCR、双酶切鉴定结果表明,已成功克隆的贵州白香猪Gadd45G基因的cDNA序列长度为480 bp。测序结果显示,贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列与普通猪、人类、家鼠、牛的同源性分别为99.6%、89.6%、90.2%、91.2%,氨基酸同源性分别为98.8%、95.6%、95.0%、96.2%。序列分析表明,贵州白香猪Gadd45G基因编码序列与普通猪相比,有两处发生碱基突变,其中一处为错义突变(第385处的G→A突变)使氨基酸由丙氨酸突变成苏氨酸。

贵州白香猪不同杂交组合后代生长发育指标的测定

试验选用贵州白香猪作为母本,分别以大约克猪、杜洛克猪、长白猪作为父本进行杂交组合试验,测定了3个杂交组合F1代及对照组香猪的初生重、20日龄重及2～6月龄的生长发育指标。结果表明,初生重为杜×香>大×香>长×香>香猪,长×香组与对照组香猪间差异不显著(P>0.05);20日龄重为杜×香>大×香>长×香>香猪。生长发育各指标间差异显著,并且随着月龄增加各试验组间生长发育显著性增大,除2月龄体长为杜×香>大×香>长×香>香猪、3月龄体重,体长、胸围、腹围指标及5月龄体高、体长指标为大×香>长×香>杜×香>香猪外,其余月龄生长发育各指标为大×香>杜×香>长×香>香猪。