siRNA抑制HMGA1基因表达对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响

目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌K1细胞。采用CCK-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对K1细胞增殖的影响;RT-PCR法检测正常组、HMGA1-siRNA组和阴性对照组的HMGA1-mRNA表达;Western blot法检测三组的HMGA1蛋白表达;Transwell侵袭实验检测三组HMGA1-siRNA基因转染后K1细胞的侵袭能力。结果 HMGA1-siRNA基因对K1细胞的抑制增殖作用明显,呈现时间-剂量依赖关系;HMGA1-siRNA基因在K1细胞中mRNA和蛋白的表达显著低于正常组和阴性对照组;HMGA1-siRNA组K1细胞侵袭能力显著低于正常组和阴性对照组。结论 siRNA可以沉默HMGA1基因,减缓甲状腺乳头状癌K1细胞增殖。

RNAi介导ObR基因沉默对人乳头状甲状腺癌K1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的探讨用RNAi介导瘦素受体基因(ObR)沉默人乳头状甲状腺癌K1细胞(K1细胞)增殖与侵袭能力的影响。方法使用siRNA干扰技术瞬时转染构建siRNA-ObR。瞬时转染后,Real-time PCR和Western blotting在mRNA水平和蛋白水平检测siRNA-ObR是否有效抑制K1细胞内靶基因的表达;MTT实验研究ObR沉默后K1细胞的增殖能力;Transwell实验检测ObR沉默后K1细胞的侵袭能力。结果 Realtime PCR实验结果显示,ObR基因沉默后K1细胞ObR mRNA表达显著降低;Western blotting实验结果显示,ObR基因沉默后K1细胞ObR蛋白表达显著降低;MTT实验结果显示ObR对K1细胞的增殖没有意义;Transwell实验结果显示ObR沉默后K1细胞侵袭能力显著下降。结论 ObR基因沉默能有效抑制K1细胞ObR基因的表达,降低K1细胞的侵袭能力。

1,4-二氢吡啶类化合物对CHO-K1细胞的辐射防护作用

为探究1,4-二氢吡啶类化合物对于CHO-K1细胞的体外防护活性,实验分为DHP(2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-l,4-二氢吡啶)给药照射组(DHP)、单纯照射组(Rad)和对照组(Con)。采用中性红法测定DHP对CHO-K1细胞的细胞毒性和照射后细胞的存活率;DCFH-DA法检测活性氧(Radical oxidative spices,ROS)水平;彗星实验测定DNA损伤情况。通过以上指标来评价DHP的辐射防护活性。结果显示,与Con相比,Rad的ROS水平、DNA百分含量和尾距等指标均上升,并且ROS探针荧光强度达到1 800,尾部DNA含量和尾距分别达到3.5%和1.7%,其差异具有统计学意义(p<0.05),提示照射后CHO-K1细胞中产生了过多的ROS和DNA链断裂损伤。与Rad相比,DHP的ROS探针荧光强度降为945、尾部DNA含量和尾距分别降为0.83%和0.7%,3个指标均明显降低,其差异均具有统计学意义(p<0.05),提示DHP给药能显著降低照射引起的CHO-K1细胞ROS水平升高,通过清除照射产生的过多ROS,减轻照射所致的DNA损伤,发挥细胞保护作用。这说明DHP具有良好的辐射防护作用。

生长分化因子11对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响

目的探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF1)对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响。方法将人甲状腺乳头状癌K1细胞分为3组:对照组(Vehicle)、高糖组(HG)和GDF11组(HG+GDF11;GDF11)。各组细胞培养3 d后,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的蛋白水平,实时荧光定量逆转录PCR检测核转录因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)的转录表达,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的ROS水平。结果与对照组相比,高糖环境中K1细胞的凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白表达比升高,Nrf2基因表达上调,细胞内ROS水平下降;而GDF11干预显著提高高糖环境中K1细胞的凋亡率,降低Bcl-2/Bax蛋白表达比,下调Nrf2基因转录表达,并提高细胞内的ROS水平。结论GDF11可能通过提高高糖环境中K1细胞内的氧化应激反应促进细胞凋亡。

牛pAcGFP-FADD融合蛋白真核表达载体构建及在CHO-K1细胞中的表达

FADD是Fas/FasL系统的一个信号连接蛋白,通过传递凋亡信号,介导细胞凋亡。为了揭示FADD在牛卵泡发育过程中的调控作用,采用RT-PCR从牛卵巢组织中扩增FADD基因,将其cDNA终止密码子删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,构建融合蛋白重组质粒,经BglⅡ/EcoRⅠ酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染CHO-K1细胞,观察有无荧光的表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、表达情况。结果表明,成功克隆牛FADD基因,通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-bFADD融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染CHO-K1 24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,转染效率可达65%,通过RT-PCR扩增出654 bp的转录产物,并用Western blotting检测到51.4 kD目的蛋白的表达。

人凝血因子Ⅶ基因在CHO-K1细胞中的瞬时表达与鉴定

目的在CHO-K1细胞中瞬时表达所克隆的人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的cDNA序列并表达其产物。方法首先从HepG2细胞中克隆人FⅦcDNA序列,将克隆得到的序列连接到pMD18-T载体上经测序验证后,将其与pcDNA3.1载体连接,构建得到重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ。将构建得到的表达质粒瞬时转染CHO-K1细胞,72 h取样,采用ELISA、Western blotting等方法对细胞上清液和细胞裂解物作鉴定。结果克隆得到的序列经NCBI比对后为FⅦ转录突变体Ⅱ基因序列,克隆得到的基因未见氨基酸突变,重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ经PCR、双酶切、测序验证正确。ELISA法未在上清中检测到目的蛋白,而在细胞裂解液中检测到了目的蛋白;Western blotting检测到表达产物有与FⅦ标准品类似的分子量为50 kD左右的特异性条带。结论在转染后的CHO-K1细胞裂解液上清中成功表达了hFⅦ蛋白。

全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达

目的利用两种不同真核表达载体构建全人源抗白细胞介素33单链抗体c片段(IL-33 sc Fv-Fc)重组载体,转染中国仓鼠卵巢(CHO)k1细胞,筛选稳定高表达单细胞株以提高融合蛋白产量。方法双酶切前期构建的重组质粒pc DNA3.1/SPsc Fv-Fc,回收SP-sc Fv-Fc片段,插入载体PMH3EN中,构建PMH3EN/SP-sc Fv-Fc重组载体并与重组质粒pc DNA3.1/SP-sc Fv-Fc分别转染CHO k1细胞;反转录PCR、Western blot法检测目的基因sc Fv-Fc的转录及表达;Dot blot法筛选稳定高表达细胞株;ELISA检测sc Fv-Fc的水平及生物学活性。结果重组质粒测序结果表明成功构建了真核表达载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc,插入目的基因SP-sc Fv-Fc大小为1560 bp左右。反转录PCR检测重组质粒表达情况显示两组重组质粒的目的基因在CHO k1细胞中均成功转录。sc Fv-Fc不仅可分泌到细胞培养基中,还可与人IL-33以及抗人Ig G1 Fc特异性结合。重组载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc组融合蛋白表达水平相对较高。经过4轮筛选,选出了稳定高表达细胞株,初步测其sc Fv-Fc表达产量为10 mg/L;竞争ELISA检测结果显示sc Fv-Fc可显著抑制IL-33与其受体ST2的结合。结论在CHO k1细胞成功高表达IL-33 sc Fv-Fc。

微小RNA-145通过靶向锌指蛋白转录因子5抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖及侵袭

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-145通过调节锌指蛋白转录因子5(KLF5)对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用TargetScan和PicTar对人甲状腺乳头状癌K1细胞株的miR-145靶基因进行预测,采用双荧光素酶报告基因验证miR-145对靶基因的直接调控。应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞在4 d的吸光度(A450)值以判断其增殖能力。应用平板克隆形成实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞孵育2周后克隆细胞的数量以判断其克隆能力。应用Transwell侵袭实验检测转染miR-145模拟物及miR-145模拟物同时过表达KLF5的甲状腺乳头状癌K1细胞孵育48 h后穿膜细胞数以判断其侵袭能力。结果TargetScan和PicTar软件预测显示KLF5基因是miR-145的潜在靶基因。双荧光报告基因的相对荧光值显示,与共转染miR-145模拟物和KLF5-mt组比较,共转染miR-145模拟物和KLF5-wt组荧光素酶活性显著下降(t=14.907,P<0.01)。CCK-8实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞在4 d检测到的A450 nm值(0.433±0.003)明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组(0.534±0.004、0.522±0.005),差异有统计学意义(t=29.954、22.816,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=3.035,P>0.05)。平板克隆实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞克隆的形成数[(67.00±3.52)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组[(113.00±4.16)、(109.00±2.52)个],差异有统计学意义(t=10.281、12.124,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=2.774,P>0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,miR-145模拟物转染组K1细胞穿过基底膜细胞数[(54.00±1.15)个]明显低于阴性对照组及共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组[(127.00±4.58)、(119.00±4.51)个],差异有统计学意义(t=35.839、23.579,P<0.01)。而阴性对照组与共转染miR-145模拟物和过表达KLF5组比较,差异无统计学意义(t=1.906,P>0.05)。结论miR-145通过靶向调节KLF5抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖及侵袭。

姜黄素对甲状腺癌K1细胞生长及侵袭的影响

目的:探讨姜黄素对甲状腺癌乳头状癌K1细胞生长及侵袭的影响,探讨其作用机制。方法:将K1细胞按随机数字表法分为对照组、溶剂对照组及10、30、50 μmol/L姜黄素组,其中对照组仅加新鲜培养基,溶剂对照组加入含二甲基亚砜的培养基,10、30、50 μmol/L姜黄素组分别加入10、30、50 μmol/L姜黄素。采用MTT法检测K1细胞生长情况,采用PI和Hochest3342双染检测细胞死亡情况,采用Transwell小室法检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞波形蛋白、E-钙黏蛋白表达。结果:与对照组和溶剂对照组比较,10、30、50 μmol/L姜黄素组细胞存活能力降低( P<0.05),死亡率增高( P<0.05),细胞侵袭能力[(80.12±3.43)%、(65.59±4.11)%、(30.32±4.67)%比(100.00±2.81)%、(98.82±2.18)%]降低( P<0.05),E-钙黏蛋白[(0.41±0.12)、(0.63±0.14)、(0.70±0.13)比(0.34±0.10)、(0.35±0.11)]表达升高( P<0.05),30、50 μmol/L姜黄素组波形蛋白[(0.70±0.11)、(0.22±0.10)比(0.87±0.12)、(0.87±0.13)]表达降低( P<0.05)。 结论:姜黄素可抑制甲状腺癌乳头状癌K1细胞增殖及侵袭能力,促进细胞死亡。

CHO-K1细胞中基因瞬时转染的条件优化

目的:以CHO-K1细胞为宿主基因瞬时转染条件的优化。方法:以GFP(Green Fluorescence Protein)为报告基因,考察了DNA:PEI比例、DNA用量及血清的加入对CHO-K1细胞的转染效率和细胞数目的影响。结果:DNA:PEI=1:2(w/w)、2gDNA/106cells时,转染结果最优;血清的加入可降低细胞转染效率。结论:在CHO-K1细胞中进行瞬时转染的最佳条件为DNA:PEI=1:2(w/w)、2gDNA/106cells,及血清的加入抑制细胞转染。

TGF-β_1和ERK_1/ERK_2的相互作用及对人胰腺癌细胞生长的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF β1)和细胞外信号调节激酶K1/细胞外信号调节激酶K2 (ERK1/ERK2)对胰腺癌生长的影响及其相互关系,并探讨它们对胰腺癌作用的可能机制。方法:应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者病理组织中TGF β1和ERK1/ERK2 蛋白表达情况;MTT法观察不同剂量TGF β1对人胰腺癌Panc 1细胞生长的影响;Western印迹法观察不同剂量TGF β1对ERK1/ERK2 蛋白表达的影响。结果:胰腺癌患者组织TGF β1、ERK1 和ERK2 蛋白均呈显著性高表达,其阳性表达率分别为66.67%(30/45)、86.70%(39/45)和84.44%(38/45),而在对照组织的阳性表达率分别为30%(6/20)、30%(6/20)和20%(4/20),两者间存在显著差异(P<0.05);TGF β1抑制Panc 1细胞生长,随着剂量的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强,到第4 天抑制作用达高峰,随后抑制作用不同程度的减弱,细胞生长速度加快;外源TGF β1不能改变ERK1/ERK2 蛋白的高表达状态。结论:胰腺癌患者病理组织强表达TGF β1 和ERK1/ERK2 蛋白;外源TGF β1在一定阶段抑制胰腺癌细胞系生长,但不改变ERK1/ERK2 的表达;胰腺癌细胞逃避TGF β1 抑制作用的机制之一可能是高水平ERK1/ERK2 的表达。

人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体在CHO K1细胞中的表达及鉴定

目的 CHO K1细胞中表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体,并进行鉴定。方法采用电穿孔转染法将含编码人源化抗VEGF单克隆抗体轻、重链全基因的真核表达质粒DGV-K11转染至CHO K1细胞,经L-蛋氨酸亚砜(methionine sulfoxide,MSX)加压筛选和有限稀释克隆筛选,获得分泌表达人源化抗VEGF单克隆抗体的K11细胞株。利用生物反应器培养K11细胞,采用MabSelect SuRe、DEAE Sepharose FF和Eshmuno S凝胶色谱纯化培养液,以贝伐珠单抗(Bevacizumab)作为阳性对照,分析人源化抗VEGF单克隆抗体的纯度、电荷异质性、相对分子质量、N-末端序列、等电点及生物学活性。结果人源化抗VEGF单克隆抗体还原和非还原型CE-SDS分析图谱峰形及电荷异质性与阳性对照相似,轻、重链N-末端氨基酸序列一致;人源化抗VEGF单克隆抗体及阳性对照的SEC-HPLC单体纯度分别为97.46%和97.08%,完整相对分子质量分别为149 201.76和149 201.81,主峰等电点分别为7.31和7.32,生物学活性分别为0.993×10~4和0.960×10~4 U/mg。结论于CHO细胞中成功表达了人源化抗VEGF单克隆抗体,与贝伐珠单抗(Bevacizumab)具有相似的纯度、电荷异质性及生物学活性,本实验为CHO细胞大规模表达人源化抗VEGF单克隆抗体奠定了基础。

AAV-HGFK1抑制EGFR磷酸化拮抗大肠癌细胞生长

目的研究腺相关病毒-肝细胞生长因子K1(AAV-HGFK1)对KRAS、BRAF野生型和突变型大肠癌细胞株的生长影响。方法选择人源的细胞株KRAS和BRAF野生的SW48,KRAS突变的Lovo,KRAS突变且不表达表皮生长因子受体(EGFR)的SW620,BRAF突变的HT29,实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定EGFR基因转录水平,分别用5×104 vg/细胞的腺相关病毒(AAV)感染以上细胞株,荧光显微镜和流式细胞仪测定AAV-EGFP感染率。加入或不加表皮生长因子(EGF)的情况下,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EGFR、磷酸化EGFR(p-EGFR)和β-actin,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测细胞增殖。结果Lovo和HT29高表达EGFR,而SW48表达EGFR较低,加入EGF促进了以上3种细胞的EGFR磷酸化,AAV-HGFK1抑制EGFR磷酸化,从而显著降低其增殖。EGF对SW620增殖无显著影响,但AAV-HGFK1感染抑制了胎牛血清培养的SW620细胞。结论 AAV-HGFK1可能直接作用于EGFR,抑制其磷酸化从而阻断EGF促进细胞增殖,并可能通过其他通路对KRAS或BRAF基因野生或突变的大肠癌细胞都有抑制作用。

大黄素及联合阿帕替尼对人甲状腺癌细胞K1抑制作用的实验研究

目的:探讨大黄素及联合阿帕替尼对人甲状腺癌细胞K1的抑制作用及其机制。方法:细胞分组:空白组(PBS)、大黄素组(100μmol/L)、阿帕替尼组(10μmol/L)、联合组(100μmol/L大黄素+10μmol/L阿帕替尼),不同给药时间后,CCK-8法检测细胞增殖活性,划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax(促凋亡蛋白)、Bcl-2(抗凋亡蛋白)、Caspase-3(半胱氨酸蛋白酶-3)及VEGFR-2(血管内皮生长因子受体-2)蛋白表达。建立人甲状腺癌细胞K1裸鼠移植模型,分为模型组、大黄素组(10 mg/kg)、阿帕替尼组(100 mg/kg)、联合组(10 mg/kg大黄素+100 mg/kg阿帕替尼),分组给药,每日2次,连续给药28 d,观察对肿瘤生长的影响。结果:大黄素组、阿帕替尼组和联合组的细胞存活率、凋亡率、细胞迁移和侵袭个数及Bcl-2及VEGFR-2蛋白表达均低于空白组,大黄素组、阿帕替尼组和联合组的Bax、Caspase-3表达均高于空白组;均有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。大黄素组、阿帕替尼组和联合组对瘤体的抑制率均显著高于模型组,均有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。联合组上述变化最为显著。结论:大黄素和阿帕替尼对人甲状腺癌细胞K1细胞的生长均具有明显的抑制作用,大黄素联合阿帕替尼后效果更为显著,可能与调节Bax/Bcl-2平衡,激活Caspase-3表达和抑制VEGFR-2的表达并诱导凋亡有关。

睾丸特异蛋白GGN1稳定表达细胞株的建立

GGN1是1种功能未知的睾丸特异表达蛋白,它是睾丸特异性基因Ggn的表达产物。Ggn 基因的原初转录产物有多种剪接方式,并最终翻译产生3种蛋白,GGN1就是其中的1种。研究 发现Ggn的表达与精子的生成过程紧密相关。GGN1还可以与多种蛋白相互作用,其中包括 FANCL,GGNBP1,GGNBP2和OAZ3。为了能够在体外更方便的研究Ggn及其相关基因的功能,通 过脂质体转染和G418加压法筛选获得了能稳定表达pEGFP-N2／GGN1的CHO-K1细胞株。

渗透性K.lactis细胞内乳糖酶水解牛乳中乳糖的研究

应用填充床细胞反应器,以渗透性K．lactis细胞内乳糖酶连续催化牛乳中乳糖的水解。渗透性K．lactis细胞内乳糖酶的热失活遵循一级反应动力学,40℃时酶的半衰期为9．5h,表观米氏常数为0．39mmol/ml,最大反应速率V_(max)为0．188mmol/min。在2．6cm×50cm填充床生物反应器上,渗透性K．lactis细胞内乳糖酶催化牛乳中乳糖水解的适宜体积流速为1．0ml/min,酶反应的适宜温度40℃,反应速率达到动态平衡后生成的葡萄糖的质量浓度为45．2mg/ml,牛乳中乳糖的水解率为91．3%。

EGF及其受体在丹参酮ⅡA抑制甲状腺癌细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨中药小分子单体化合物丹参酮ⅡA对人甲状腺乳头状癌细胞系K1细胞表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(EGF receptor,EGFR)表达的影响。方法不同剂量丹参酮ⅡA分别干预体外培养的K1细胞,采用CCK8法检测丹参酮ⅡA对K1细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测丹参酮ⅡA对K1细胞凋亡以及细胞周期时相的影响;Western blotting法检测丹参酮ⅡA对K1细胞EGF及其受体表达的影响。结果丹参酮ⅡA能够显著抑制K1细胞的体外增殖活性,且这种抑制作用具有一定的剂量和时间依赖性;流式细胞术检测结果提示,随着丹参酮ⅡA作用浓度的提高,K1细胞逐渐被阻滞于G0/G1期;5μg/ml、10μg/ml丹参酮ⅡA分别干预K1细胞72 h后,各处理组的细胞凋亡率分别为(21.73±4.41)%及(53.49±7.49)%,显著高于对照组细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P<0.05);Western-blotting结果提示:随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,EGF及其受体EGFR的表达逐渐下调。结论丹参酮ⅡA可抑制人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖,并诱导其发生凋亡和细胞周期阻滞。进一步研究证实,丹参酮ⅡA的抗肿瘤机制可能与影响EGF及其受体的表达有关。

人源受体hGPCRc工程细胞株的建立及其应用

目的建立孤儿G蛋白偶联受体(OrphanGproteincoupledreceptors,oGPCRs)配基筛选体系并应用于化合物的筛选。方法利用RTPCR从人结肠组织获得oGPCR成员hGPCRc的氨基酸编码序列,在利用相关软件对hGPCRc的结构特点进行分析的基础上,构建hGPCRc之表达载体pcDNA3.1(+)hGPCRc,转染CHOK1细胞获得CHOhGPCR工程细胞株,将不同化合物作用于细胞株,用Fluo3为分子探针检测细胞内钙离子浓度变化,以分析化合物中是否为该受体的特异性配基。结果生物信息学分析得到:hGPCR定位于人染色体13q32.2,对应的氨基酸序列组成了7个跨膜区段的结构域,在进化树上与人源P2Y1受体最亲近,应属于人类GPCR成员;成功得到CHOhGPCRc工程细胞株;所检测化合物作用于细胞株并没有引起胞内钙离子的波动,很可能没有活化hGPCRc。结论hGPCRc是一个与已知人P2Y1最近的成员,但基于CHOhGPCRc工程细胞株的第二信使筛选结果表明,hGPCRc并不被P2Y1的已知配基活化因此很可能属于不同于P2Y1的嘌呤类受体新亚型。

过量表达CHO细胞内源性糖基化酶对抗体五聚甘露糖修饰的影响

目的研究CHO K1细胞内源性糖基化酶对细胞的生长代谢以及抗体中五聚甘露糖(Man5)水平的影响。方法构建含有抗体基因、糖基化酶基因共转染的CHO K1稳定细胞株以及空载细胞株,检测细胞群和克隆阶段的抗体滴度、Man5水平,使用RT-qPCR的方法检测过表达基因的转录水平,并分析单克隆细胞基因转录水平与Man5含量的相关性。结果研究显示,过表达糖基化酶基因后对细胞生长代谢的影响相对较小,糖基化酶基因单独过表达对降低蛋白中的Man5含量没有效果。将基因Man2a2和Mgat2组合过表达之后,可以将Man5的水平降低70%~80%,两个基因的转录水平都较高的情况下对降低Man5含量可以起到更加显著的作用。结论糖基化酶基因Man2a2和Mgat2组合过表达可以显著降低抗体蛋白中的Man5水平。

黄芪含药血清对NK细胞活性及KLRK1表达的影响

目的:探讨黄芪含药血清对自然杀伤(NK)细胞活性及杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1)表达的影响。方法:SD大鼠灌胃不同剂量的黄芪水煎剂制备黄芪含药血清。NK92MI细胞与不同剂量黄芪含药血清及对照血清孵育12 h后,采用乳酸脱氢酶释放测定法检测NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤活性,采用qPCR和western blot检测KLRK1 mRNA和蛋白表达。结果:不同浓度黄芪含药血清刺激12 h后NK细胞杀伤活性明显增强,KLRK1表达显著升高。结论:黄芪含药血清能活化NK细胞,其机制可能与其激活KLRK1有关。