血清KLK1、SOX6水平与急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后预后的关系

目的探讨组织激肽释放酶1(KLK1)、性别决定区Y框相关高迁移率族蛋白6(SOX6)与急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后预后的关系。方法选择2019年1月至2020年11月期间河北大学附属医院收治的ACS患者122例作为研究对象,根据1年内是否发生主要不良心血管事件(MACE)分为预后良好组(96例)和预后不良组(26例)。采用酶联免疫吸附法检测血清KLK1、SOX6水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估KLK1、SOX6对ACS患者PCI后MACE的预测价值;Kaplan-Meier法比较不同KLK1、SOX6水平ACS患者的预后情况;Cox多因素回归分析ACS患者预后的影响因素。结果预后不良组血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平高于预后良好组(t=13.311,P<0.05),血清KLK1、SOX6水平均低于预后良好组(t=5.855、6.205,P<0.05)。预后良好组植入支架数低于预后不良组(t=2.369,P<0.05)。ROC曲线显示,KLK1、SOX6对预后预测的AUC为0.798、0.760,两者联合对预后预测的AUC为0.909,高于单独预测(Z=2.925、3.639,P<0.05),敏感度、特异度分别为90.62%、76.92%。Kaplan-Meier分析显示,KLK1低表达ACS患者MACE的发生率高于KLK1高表达者(Log rankχ^(2)=8.674,P<0.01),SOX6低表达ACS患者MACE的发生率高于SOX6高表达者(Log rankχ^(2)=23.539,P<0.01)。Cox回归分析显示,KLK1、SOX6均是ACS患者PCI治疗后发生MACE的保护因素(HR=0.725、0.618,P<0.05)。结论KLK1、SOX6在预后不良的PCI后ACS患者血清中表达均降低,两者联合对MACE的发生具有一定的预测价值,临床可用于ACS患者PCI术后是否发生MACE的早期评估。

老年急性心力衰竭患者血清Clusterin、KLK1水平及对病情和预后的评估价值

目的探究血清簇集蛋白(Clusterin)、组织激肽释放酶1(KLK1)与老年急性心力衰竭(AHF)病情关系及对患者预后的评估价值。方法选取2019年7月-2021年10月河北医科大学第二医院心血管内四科收治老年AHF患者80例为研究对象(AHF组),另选取同期在医院行健康体检者80例为健康对照组。根据心功能将AHF患者分为轻度亚组(n=37)和重度亚组(n=43),依据患者是否发生终点事件分为终点事件亚组(n=36)和非终点事件亚组(n=44)。比较各组间的基本资料及血清Clusterin、KLK1水平;Spearman相关性分析AHF患者血清Clusterin、KLK1水平与病情程度之间的关系;Logistic回归分析AHF患者发生终点事件的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Clusterin、KLK1对AHF患者预后的评估价值。结果AHF组SCr、TnI、CK-MB、NT-proBNP、LVEDD、BNP、Clusterin水平显著高于健康对照组(t/P=8.439/<0.001、31.607/<0.001、5.212/<0.001、15.676/<0.001、11.106/<0.001、17.847/<0.001、12.792/<0.001),LVEF、KLK1水平显著低于健康对照组(t/P=3.900/<0.001、8.963/<0.001);终点事件亚组TnI、CK-MB、NT-proBNP、BNP、Clusterin水平均显著高于非终点事件亚组(t/P=8.389/<0.001、3.517/0.001、10.993/<0.001、5.626/<0.001、7.303/<0.001),LVEF、KLK1水平显著低于非终点事件亚组(t/P=2.749/0.007、6.225/<0.001);与轻度亚组患者比较,重度亚组患者血清Clusterin水平显著升高,KLK1水平显著降低(t/P=8.236/<0.001、12.703/<0.001);Spearman相关性分析结果显示,AHF患者血清Clusterin水平与病情程度呈显著正相关(r=0.613,P<0.01),而血清KLK1水平与病情程度呈显著负相关(r=-0.680,P<0.01);Logistic回归分析结果显示,BNP高、Clusterin高、KLK1低是影响AHF患者发展为不良终点事件的危险因素[OR(95%CI)=1.401(1.132~1.735)、1.545(1.219~1.959)、1.624(1.246~2.116)];ROC曲线结果显示,血清Clusterin、KLK1及二者联合评估AHF患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.879、0.834、0.964,二者联合评估AHF患者预后的AUC大于单项预测(Z/P=2.001/0.045、2.712/0.007)。结论血清Clusterin、KLK1对老年AHF病情及预后具有良好的评估价值。

血清Kal、TREM-1对高血压性脑出血患者病情严重程度及预后的影响

目的探讨血清人源性激肽释放酶结合蛋白(Kal)、髓系细胞触发受体-1(TREM-1)对高血压性脑出血(HICH)患者病情严重程度及预后的影响。方法选取该院2020年1月至2023年3月该院收治的180例HICH患者作为HICH组,另选取同期在该院体检的180例健康体检者作为对照组。根据HICH患者的病情严重程度分为轻度组、中度组、重度组,根据患者的预后情况分为预后良好组和预后不良组。收集HICH患者基本资料并检测所有研究对象的Kal、TREM-1水平。采用多因素Logistic回归分析HICH患者预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Kal、TREM-1对HICH患者预后不良的预测价值。结果HICH组血清Kal水平低于对照组,TREM-1水平高于对照组(P<0.05)。轻度组有56例患者,中度组有82例患者,重度组有42例患者。重度组血清Kal水平低于轻度组和中度组,且中度组低于轻度组(P<0.05)。重度组血清TREM-1水平高于轻度组和中度组,且中度组高于轻度组(P<0.05)。预后良好组有122例患者,预后不良组有58例患者。预后不良组有高血压史患者的比例、TREM-1水平、出血量均高于预后良好组,Kal水平低于预后良好组(P<0.05);预后良好组和预后不良组年龄、男性比例、体质量指数、糖尿病史情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,有高血压史、TREM-1水平升高、出血量大、Kal水平降低是HICH患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,2项指标联合检测预测HICH患者预后不良的曲线下面积为0.920,高于Kal、TREM-1单独预测的0.857和0.860(Z=2.765、2.324,P=0.006、0.020)。结论HICH患者血清Kal水平降低,TREM-1水平升高,与患者病情严重程度及预后密切相关,2项指标联合检测对HICH患者预后不良具有较高预测价值。

不同治疗方法对冠心病患者心率变异性血清KLK1 TIMP-1水平及近期预后的影响研究

目的:探究国产雷帕霉素药物洗脱支架和紫杉醇药物洗脱球囊对冠心病患者心率变异性、血清激肽释放酶1(KLK1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平及近期预后的影响。方法:回顾2019年11月至2021年5月间在我院接受经皮冠状动脉介入治疗的105例冠心病患者资料,根据治疗方式不同将其分为观察组(56例,使用国产雷帕霉素药物洗脱支架)和对照组(49例,使用国产紫杉醇药物洗脱球囊)。比较两组术前、术后1周、随访1年时的心率变异性相关指标[5min内正常窦性RR间期标准差(SDNN)、5min内正常RR间期均值标准差(SDANN)、相邻NN间期之间差大于50ms数占比(pNN50)],术前、术后1周时的KLK1、TIMP-1、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平,随访1年的近期预后[血管再狭窄、血管再血栓、主要心血管不良事件(MACE)]。结果:两组SDNN、SDANN、pNN50重复测量方差分析时间比较差异有统计学意义(P<0.017),均随术后时间延长呈上升趋势;两组患者手术前后血清KLK1、TIMP-1、NO及血浆ET-1水平差值绝对值比较差异有统计学意义(P<0.05),观察组变化幅度大于对照组;随访1年时,观察组血管再狭窄发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组血管再血栓发生率、MACE发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:国产雷帕霉素药物洗脱支架可有效调节冠心病患者心率变异性,对改善血清KLK1、TIMP-1水平有积极作用,有助于保护、修复患者内皮功能,降低支架内狭窄风险,获得良好近期预后。

Ksp-Gpx1-klk1载体的构建及鉴定

目的构建含有肾组织特异性启动子(Ksp-cadherin)的Gpx1与klk1载体质粒,为下一步构建转基因动物、研究在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。方法以KLK1cDNA、GPX1cDNA、Ksp-cadherinBAC为模板,PCR扩增获得人源Gpx1、KLK1、Ksp-cadherincDNA。PCR产物大小与预期结果一致,序列分析完全正确。选择多个相应酶切位点,分步将Ksp-cadherin、Gpx1、KLK1插入至pIRES-EGFP质粒中,构建pKSP-GPX1-IRES-KLK1重组质粒。应用酶切鉴定和序列分析方法验证所构建载体的正确性。结果成功构建了含有Ksp-cadherin的Gpx1与klk1载体质粒。结论该重组载体的构建为下一步构建转基因动物,研究其在哺乳动物肾组织内过表达及在移植肾缺血再灌注损伤的基因治疗中的作用奠定了基础。

血清kallistatin、Netrin-4与早发型子痫前期患者外周血HMGB1-RAGE信号通路的关系及对妊娠结局的影响

目的探讨血清人激肽释放酶抑制剂(kallistatin)、轴突导向因子4(Netrin-4)水平与早发型子痫前期(EOPE)患者外周血高迁移率族蛋白1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路的关系及对妊娠结局的影响。方法选取2019年9月至2021年8月该院产科收治的EOPE患者(EOPE组,182例)及健康孕妇(对照组,91例)。比较两组血清kallistatin、Netrin-4、HMGB1、RAGE、核因子-κB p65(NF-κB p65)水平并进行相关性分析。根据EOPE患者的妊娠结局分为不良组(52例)和良好组(130例),并对不良妊娠结局的危险因素进行Logistic回归分析法。结果EOPE组患者血清kallistatin、Netrin-4水平低于对照组,HMGB1、RAGE、NF-κB p65水平高于对照组(P<0.05);血清HMGB1、RAGE、NF-κB p65水平与kallistatin、Netrin-4水平呈负相关(P<0.05)。EOPE组不良妊娠结局发生率为28.57%,单因素及多因素Logistic回归分析法结果显示,孕前高体质量指数(BMI)、24 h尿蛋白定量高水平、血肌酐高水平、D-二聚体高水平、血清kallistatin低水平、Netrin-4低水平均是EOPE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。结论EOPE患者血清kallistatin、Netrin-4与HMGB1-RAGE信号通路蛋白表达呈负相关,孕前高BMI、24 h尿蛋白定量高水平、血肌酐高水平、D-二聚体高水平、血清kallistatin低水平、Netrin-4低水平是导致EOPE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素。

贝那普利和厄贝沙坦对糖尿病肾病肾组织表达KLK1的影响

目的探讨贝那普利和厄贝沙坦阻断肾素-血管紧张肽系统(RAS)对糖尿病肾病(DN)肾组织表达激肽释放酶1(KLK1)的影响。方法将10只雄性SD大鼠以普通饲料喂养,作为正常对照组(A组)。将雄性SD大鼠以高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导DN模型,造模成功后随机分为4组,每组10只:DN组(B组)、贝那普利干预组(C组)、厄贝沙坦干预组(D组)、贝那普利联用厄贝沙坦干预组(E组)。干预8周后测定肾质量/体质量、24 h尿蛋白与血肌酐、尿素氮等评估肾功能情况,免疫组化半定量测定肾组织KLK1蛋白表达水平。结果 B、C、D、E组大鼠肾组织表达KLK1蛋白水平显著高于A组(P<0.01);C、D、E组大鼠肾组织表达KLK1蛋白水平显著高于B组(P<0.05);E组表达KLK1高于C组和D组(P<0.01);C组和D组差异无统计学意义。结论 DN大鼠肾组织表达KLK1蛋白高于正常大鼠,贝那普利和厄贝沙坦通过阻断RAS上调肾脏KLK1蛋白表达。

血清sTWEAK、KLK1水平预测老年急性非ST段抬高型心肌梗死病人急诊PCI预后的研究

目的分析血清可溶性肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子(sTWEAK)、组织激肽释放酶1(KLK1)水平预测老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)病人急诊行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)预后的价值。方法回顾性分析本院接受急诊PCI治疗的117例老年NSTEMI病人资料,观察并比较病人入院时和PCI术后1 d血清sTWEAK、KLK1、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;根据随访1年的结果分为预后良好组和预后不良组,比较2组血清sTWEAK、KLK1水平,并分析血清sTWEAK、KLK1水平预测病人预后的价值。结果117例老年NSTEMI病人术后1 d sTWEAK、cTnT、CK-MB水平均较入院时降低,KLK1水平较入院时升高,差异有统计学意义(P<0.01)。随访1年时,117例病人中32例(27.35%)预后不良,预后不良组NSTEMI病人入院时sTWEAK水平高于预后良好组,KLK1水平低于预后良好组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,高sTWEAK水平(OR=1.167,95%CI 1.095~1.243)、低KLK1水平(OR=0.526,95%CI 0.402~0.688)是老年NSTEMI病人急诊PCI预后不良的风险因子(P<0.05)。ROC曲线显示入院时血清sTWEAK、KLK1单一及联合预测老年NSTEMI病人急诊PCI预后不良的AUC分别为0.814、0.895、0.907。结论老年NSTEMI病人急诊PCI预后不良可能与sTWEAK过表达、KLK1低表达有关,尽早检测病人入院时sTWEAK、KLK1水平,对病人预后风险有一定预测价值。

血清KLK1、RBP4及SYNTAX-11评分预测血运重建后STEMI患者预后的临床价值

目的探讨血清激肽释放酶(KLK1)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)及冠状动脉病变SYNTAX-11评分体系预测血运重建后ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者预后的临床价值。方法选取2016年3月—2019年6月收入万宁市人民医院的STEMI患者108例为研究对象。记录患者术前及术后1 d血清KLK1和RBP4水平及SYNTAX-11评分,并随访患者半年,观察不良心血管事件(MACE)发生情况。结果随着患者病变支数增多,KLK1逐渐降低,RBP4水平及SYNTAX-11评分逐渐升高(P<0.05)。单支病变组病变中血清KLK1及RBP4水平与SYNTAX-11评分均无相关性(P>0.05);而双支及三支病变组中,血清KLK1及RBP4水平与SYNTAX-11评分显著相关(P<0.05)。MACE组SYNTAX-11评分、RBP4水平、Hcy及cTnI等指标高于非MACE组(P<0.05),KLK1水平低于非MACE组(P<0.05)。经Logistic回归分析,得到SYNTAX-11评分、血清KLK1和RBP4水平是STEMI患者发生MACE的独立危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,得到SYN⁃TAX-11评分、血清KLK1和RBP4水平均可作为预测MACE的风险因子(P<0.05)。结论血清KLK1、RBP4及SYNTAX-11评分能有效评估STEMI患者血运重建后不良心血管事件。

Construction and identification of recombination expression vector Ksp-Cadherin-Gpx1-Klk1

Objective To construct and identify the Gpx1-Klk1 vector which contains kidney-specific promoter (Ksp-cadherin). Methods Through PCR amplification, the human Gpx1, Klk1, and Ksp-cadherin cDNA were obtained by taking Gpx1 cDNA, Klk1 cDNA, and Ksp-cadherin BAC as templates. After being testified, the PCR products were inserted into the expressive vector pIRES-EGFP step-by-step to produce a recombinant vector Ksp-cadherin-Gpx1-Klk1. This vector was examined by restriction enzyme digestion and sequence analysis. Results The recombinant expressive vector Ksp-cadherin-Gpx1-Klk1 was successfully constructed. Conclusion The construction of the recombinant vector Ksp-cadherin-Gpx1-Klk1 laid foundations for investigations in establishing transgenic animal models, the over-expression of Gpx1 and Klk1 in mammal kidney, and gene therapy for ischemia-reperfusion injury during kidney transplantation.

ST段抬高型心肌梗死患者血运重建前后血清生成素Ⅱ组织激肽释放酶1水平变化及与预后的关系

目的探讨直接经皮冠状动脉介入(PCI)术前、术后血清血管生成素Ⅱ(AngⅡ)、组织激肽释放酶1(KLK1)水平变化以及对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者6个月内发生主要不良心血管事件(MACE)的预警价值.方法前瞻性选择2018年1月至2019年3月在广州市第一人民医院接受直接PCI术的STEMI患者220例,记录术前5 min和术后24 h血清AngⅡ和KLK1水平,随访6个月,记录MACE发生情况.结果与术前相比,STEMI患者血清AngⅡ总体水平(3.15±0.97)μg/L降低,而血清KLK1总体水平(27.97±12.86)ng/L升高(P<0.05).术前和术后血清AngⅡ水平与Gensini评分均呈正相关性(r=0.578,0.337,P<0.05),且随着心肌梗死面积增加术前血清AngⅡ增加(P<0.05).术前血清KLK1水平与Gensini评分具有负相关性(r=-0.346,P<0.05);且随着心肌梗死范围的扩大血清KLK1水平逐渐降低(P<0.05).随访6个月,MACE组患者术后血清AngⅡ降低率和KLK1升高率分别为(-29.14±17.52)%、(33.46±14.51)%,高于非MACE组患者(P<0.05).术后血清AngⅡ降低率(OR=6.895,95%CI 2.178~13.994)和KLK1升高率(OR=19.165,95%CI 2.469~36.883)是MACE发生的独立影响因子(P<0.05).经受试者工作特征(ROC)曲线分析,术后AngⅡ联合KLK1变化率对术后6个月发生MACE预测的ROC曲线下面积(AUC)为0.913(95%CI0.837~0.990).结论动态观察血清AngⅡ和KLK1水平变化,对于STEMI患者PCI术后6个月MACE的发生风险有一定的预测价值.

卵巢癌患者血清HK10、DJ-1的表达及意义

目的探讨卵巢癌患者血清人激肽释放酶10(HK-10)、DJ-1蛋白的表达及意义。方法选取97例卵巢癌患者(卵巢癌组),并于同期收集85例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)和50例其他良性妇科疾病患者(对照组),采用酶联免疫吸附法检测各组血清HK-10、DJ-1水平,分析其与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估血清HK-10、DJ-1对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌组、良性卵巢肿瘤组血清HK-10、DJ-1水平高于对照组,且卵巢癌组高于良性卵巢肿瘤组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。国际妇产科联盟分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤细胞低分化、有淋巴结转移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平高于Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者(P均<0.05)。Pearson积矩相关分析结果显示,卵巢癌患者血清HK-10与DJ-1呈正相关(r=0.728,P<0.05)。血清HK-10、DJ-1联合检测诊断卵巢癌的AUC为0.944(95%CI:0.889~0.992),灵敏度、特异度分别为0.93、0.97,准确度为0.96。结论卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平升高,并与癌细胞的侵袭转移密切相关;二者联合检测有助于卵巢癌的早期诊断。

糖尿病视网膜病变患者血清VEGF、ES、TKLK、TSP、sICAM-1水平的变化及意义

目的:探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮抑素(ES)、血小板反应蛋白(TSP)、组织激肽释放酶(TKLK)及可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)水平在糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中的变化及其临床意义。方法:选取我院2014-01/2016-12收集的无眼底病变的糖尿病患者60例(DM组)、非增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(NPDR组)、增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(PDR组)和同期健康体检对象60例(对照组),检测四组患者血清VEGF、ES、TSP、TKLK、s ICAM-1水平并进行比较分析。结果:PDR组患者的血清VEGF、TKLK、s ICAM-1水平均显著高于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05);PDR组患者的血清ES水平均显著低于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05)。NPDR组患者的血清VEGF、TKLK、ES水平均显著高于DM组和对照组(P<0.05)。NPDR组患者的血清VEGF与ES、TKLK、s ICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05)。PDR组患者的血清VEGF与TKLK、s ICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05),PDR组患者的血清VEGF与ES、TSP相关性不显著(P>0.05)。结论:DR患者血清ES、TSP、TKLK、s ICAM-1水平均发生显著改变,通过调节VEGF水平影响DR进程。

2型糖尿病患者t-PA、PAI-1水平及胰激肽原酶治疗后的变化

目的测定2型糖尿病患者纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)水平,并观察胰激肽原酶治疗后的变化。方法选取2型糖尿病患者88例,分为无血管并发症组和有血管并发症组,另设正常对照组,测量身高、体质量、血压、血糖、血脂等指标,用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)测定胰激肽原酶治疗前后血浆t-PA、PAI-1水平。结果两组糖尿病患者t-PA水平均低于正常对照组,PAI-1水平均高于正常对照组(P<0.05或0.01);有血管并发症组t-PA水平低于无血管并发症组,PAI-1水平高于无血管并发症组(P均<0.01)。t-PA与TG、LDL-C呈负相关(P<0.01),PAI-1与BMI、SBP、FBG、HbA1c、TG、LDL-c呈正相关(P<0.01),与HDL呈负相关(P<0.01)。两组糖尿病患者用胰激肽原酶治疗后,PAI-1水平下降,t-PA水平升高。结论糖尿病患者血浆t-PA水平降低,PAI-1水平升高,尤其是伴有血管并发症者变化更明显,胰激肽原酶治疗后,可改善t-PA和PAI-1水平的异常变化。

TK-1和TIMP-1过表达对大鼠心肌梗死后心室重塑的影响

【目的】探讨重组腺病毒介导的人TK-1和TIMP-1基因过表达对大鼠心肌梗死后的左室(LV)功能、炎症因子表达的影响及其机制。【方法】通过结扎Sprague-Dawley雄性大鼠冠脉左前降支诱导心肌梗死模型。观察假手术组(10只)、生理盐水组(13只)、对照病毒组(13只)、TK-1组(13只)、TIMP-1组(13只)、联合基因组(13只)的大鼠术后的心功能参数改变、心肌梗死面积、及各组大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、核因子-κB(NF-κB)和巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的表达水平。【结果】与假手术组相比,对照病毒组大鼠的各项心功能参数(左室舒张期内径LVIDd、左室收缩期内径LVIDs、短轴缩短率FS、射血分数EF)差(P<0.01),心肌梗死面积大(P<0.01),心肌细胞凋亡指数高(P<0.01),各炎症因子(NF-κB、MIF、MMP-2、MMP-9)的表达水平上升(P<0.01)。与对照病毒组相比,单基因组或联合基因组的心功能改善明显;心肌梗死的面积明显减少;心肌细胞凋亡指数显著下降;炎症因子的表达明显下降。相比于单基因组,联合基因组各项指标改善更显著。【结论】hTK-1或hTIMP-1单基因过表达可改善大鼠心肌梗死后的心功能,抑制炎症因子表达与心肌细胞凋亡,联合基因过表达(hTK-1和hTIMP-1)呈协同效应、改善更显著,可能的机制为hTK-1或hTIMP-1均可部分抑制MIF/NF-κB/MMP-2/9炎症信号通路。

TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达。

lncRNA HOTTIP通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA HOTTIP对肺癌细胞增殖、凋亡及EMT的影响及其作用机制。方法:利用qPCR检测lncRNA HOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTTIP和miR-637之间的靶向关系,RNA pull-down实验检测lncRNA HOTTIP和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析miR-637与KLK4的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-637与KLK4 mRNA之间的相互作用;检测miR-637通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与BEAS-2B细胞比,在SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP呈高表达(P<0.01),miR-637呈低表达(P<0.01),KLK4呈高表达(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升(P<0.01);lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。miR-637与KLK43’UTR特异性结合。miR-637通过KLK4显著促进了SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT,细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP使KLK4表达显著降低,而下调miR-637可促进KLK4表达(P<0.05)。结论:上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。

硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗重度子痫前期疗效及对孕妇血清NGAL、sFlt-1和sEng影响

目的:探讨硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗重度子痫前期(SPE)疗效及对孕妇血清中性粒细胞明胶酶相关脂运蛋白酶(NGAL)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)和可溶性内皮因子(sEng)水平的影响。方法:选取2016年12月—2019年12月本院收治的SPE患者85例,随机数字法分为对照组(n=42)和观察组(n=43),对照组给予硫酸镁治疗,观察组给予硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗,比较两组临床疗效、血压水平、子宫动脉和脐动脉血流状态、血清NGAL、sFlt-1、sEng水平、炎症因子[白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及分娩结局。结果:观察组治疗有效率(88.4%)高于对照组(64.3%)(P<0.05);治疗后观察组SBP、DBP、MAP,以及脐动脉和子宫动脉的PI、S/D均低于对照组,血清NGAL、sFlt-1、sEng水平低于对照组,血清IL-6、TNF-α水平低于对照组,IL-10高于对照组,分娩结局优于对照组(均P<0.05)。结论:硫酸镁联合胰激肽释放酶治疗SPE疗效显著,可稳定血压水平,降低血管阻力和血清NGAL、sFlt-1、sEng、IL-4、IL-6水平,并改善分娩结局。

多发性硬化患者血清激肽释放酶1和6水平分析

目的:测定多发性硬化(MS)初发组与复发组患者血清激肽释放酶1(klk1)与激肽释放酶6(klk6)的水平,研究二者与MS复发的关系。方法:采用ELISA法测定健康对照者、其他神经系统疾病患者、初发MS患者和复发MS患者各50名外周血血清klk1和klk6水平。结果:4组患者血清klk1和klk6水平比较,差异均有统计学意义(F=158.940和61.490,P<0.001);MS初发组与复发组血清klk1和klk6水平均高于其他2组,且MS复发组高于初发组(P<0.05)。MS患者血清klk1、klk6水平分别与MS的复发呈正关联(rP=0.555和0.447,P<0.05)。结论:血清klk1、klk6水平与MS复发相关,可能作为反映MS复发的指标。

超声参数联合血清标志物在卵巢肿瘤良恶性鉴别中的价值

目的探讨超声参数联合血清人附睾蛋白4(HE4)、人激肽释放酶10(hk10)、DJ-1用于卵巢肿瘤良恶性鉴别的价值。方法选取2020年1月-2023年1月我院收治的100例卵巢肿瘤患者,根据病理结果分为卵巢良性肿瘤组80例和卵巢恶性肿瘤组20例。患者术前均行超声检查及血清HE4、hk10、DJ-1检查,并比较2组各项指标差异,通过ROC分析超声参数、HE4、hk10、DJ-1诊断卵巢恶性肿瘤的效果。结果卵巢良性肿瘤组患者阻力指数(RI)、搏动指数(PI)、S/D以及HE4、hk10、DJ-1水平低于卵巢恶性肿瘤组(P<0.05);ROC曲线结果显示RI、PI、S/D、HE4、hk10、DJ-1诊断卵巢恶性肿瘤的敏感度为0.698、0.721、0.744、0.721、0.814、0.814,联合诊断敏感度为0.953,特异性为0.719、0.789、0.491、0.737、0.684、0.877,联合诊断特异性为0.912;Ⅰ~Ⅱ期卵巢恶性肿瘤患者RI、PI、S/D、HE4、hk10、DJ-1低于Ⅲ~Ⅳ期卵巢恶性肿瘤患者(P<0.05)。结论超声参数、HE4、hk10、DJ-1均可作为鉴别卵巢肿瘤良恶性的指标。