军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应([PCR)检测方法,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法对2005—2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KatB的检测。结果显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段。本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法,为军团菌的毒力研究奠定了基础。

福建省嗜肺军团菌KatB基因分布研究

目的了解福建省公共场所中央空调冷却塔水及冷凝水分离的嗜肺军团菌KatB基因携带状况,为该病防控提供基础研究资料。方法采用PCR法对2008—2010年从其水中分离的84株菌株进行KatB基因检测。结果从冷却塔水分离的78株中有25株扩增出了2.7kb的KatB毒力基因片段,阳性率为32.1%;在25株阳性菌株中,LP1、LP6和LP5血清型分别占76.0%(19/25)、20.0%(5/25)和4.0%(1/25);从冷凝水中未检出阳性。结论福建省公共场所中央空调冷却塔水中嗜肺军团菌分离株KatB基因阳性率较高,以LP1血清型所占比重最大。

转铜绿假单胞杆菌KatB基因烟草获得及其抗逆性鉴定

以NC 89烟草(Nicotiana tabacum)为材料,通过农杆菌介导法获得转铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aerugi-nosa)KatB基因植株,利用PCR和RT-PCR对转化烟草进行鉴定,最后通过水分胁迫、盐胁迫、过氧化氢胁迫进行抗逆性分析。结果表明:与野生型植株相比,在缺水条件下的第13 d,300 mmol/L的NaCl胁迫条件下第20 d和0.3mmol/L的H2 O2胁迫条件下第33 d,转KatB基因烟草的叶片相对含水量、伤害率、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MAD)、光系统Ⅱ(PSII)相对量子产率各种生理指标都显著优于野生型(WT)烟草,转KatB基因烟草表现出了较强的抗逆性,说明KatB基因在抗逆基因工程方面具有较好的应用前景。

D.radiodurans kat A和kat B基因的结构分析与功能鉴定

以简并引物PCR获得的Cat酶基因片段为探针 ,结合生物信息学方法 ,探明了耐辐射奇球菌 (D .radiodu rans)基因组中存在两个编码过氧化氢酶 (Catalase,Cat)的基因 :katA和katB .katA和katB基因长 2 2 77bp和 16 11bp,各编码 75 8和 5 36个氨基酸 .用pKK2 2 3 3表达载体连接katB基因 ,转入Cat酶缺陷型大肠杆菌 (E .coliUM2 )进行表达 .katB基因表达产物具有Cat酶活性 ,电泳迁移位置与D .radioduransCatB酶位置相符 ,并可重建E .coliUM2对低浓度H2 O2 损伤的耐受力 .图 4参