Dynamic expression of several grow factors in process of osteoblasts grafts to promote healing of osteoporotic fracuture

AIM:To study the biological function of transforming growth factor a1(TGF-a 1),vascular endothelial growth factor(VEGF),basic fibroblast growth factor(bFGF) during the process of osteoblasts allografts to accelerate fracture healing of osteoporosis rats.METHODS: Set up the fracture models of osteoporosis rats and do osteoblasts grafts; during different periods in the process of fracture heal ing by using immunnohistochemistry to detect the expression of TGF-a1,VEGF,bFG F and in situ hybridization to study the expression of bFGFmRNA,VEGFmRNA,TGF-a 1 mRNA,also using image analysis to deal with it.RESULTS:In experimental group, Osteoblasts can survive, even proliferate in fracture areas;VEGF,bFGF could be s een positive after 7 days of after osteoblast grafts,and there have the highest quantities about 14 days of post-transplantation.TGF-a1 could be seen positiv e after 3 days of post-transplantation,and there have the highest quantities ab out 7-10 days of post-transplantation.However there are not obviously high qua ntities in control.CONCLUSION:Osteoblasts grafts enhance bone fracture healing of osteoporosis rats.TGF-a1, VEGF and bFGF play very important roles in accel erating fracture healing of osteoporosis rats.

党参多糖通过PI3K/AKT信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和诱导细胞周期阻滞的实验研究

目的:探讨党参多糖对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期进程的影响及其分子机制。方法:四唑盐比色测定法[3-(4,5-Dimethylthazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测党参多糖对细胞存活率的影响,筛选党参多糖加药浓度,采用平板克隆实验检测瘢痕疙瘩成纤维细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期比例和细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和丝苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,AKT)蛋白磷酸化水平。结果:当党参多糖浓度小于80μmol/L时对瘢痕疙瘩成纤维细胞无明显毒性作用,本实验选择浓度为10、20、40μmol/L的党参多糖作为后续实验加药标准浓度;与0μmol/L组相比,10、20和40μmol/L组瘢痕疙瘩成纤维细胞克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,PCNA、Cyclin D1、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达下调,细胞凋亡率升高,PI3K和AKT磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:党参多糖能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期进程,其分子机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。

中性粒细胞胞外诱捕网浸润促进尿道创伤后尿道成纤维细胞活化和增生性瘢痕形成

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对创伤后尿道瘢痕形成的影响。方法:(1)2021年6月至2022年12月,收集福建医科大学附属第一医院泌尿外科患者的临床样本,比较尿道创伤患者(n=20)与健康志愿者(n=20)血液和尿液NETs水平的差异,并分析其与尿道瘢痕形成的关系。(2)从尿道瘢痕组织中提取原代尿道成纤维细胞,体外诱导中性粒细胞以获得NETs,分别以生理盐水、0.5 mg/L NETs和1.5 mg/L NETs处理尿道成纤维细胞,探索NETs对尿道成纤维细胞活化和胶原合成的影响。(3)构建尿道创伤新西兰兔模型,将动物分为非手术组、手术+转化生长因子β1(TGF-β1)注射(阳性对照)组、手术+生理盐水注射组和手术+脱氧核糖核酸酶I(DNase I)溶液注射组,探索NETs降解剂DNase I对尿道瘢痕形成的治疗作用。结果:尿道创伤后,患者尿液NETs水平显著升高(P<0.05),而血液NETs水平无显著差异(P>0.05)。尿道创伤新西兰兔模型中,创伤后尿液NETs水平越高,形成的尿道瘢痕纤维化程度越高(P<0.05);在细胞层面上,NETs促进尿道成纤维细胞活力、迁移与胶原合成(P<0.05)。在新西兰兔尿道创伤模型中,创伤后尿道注射DNase I可降低局部NETs水平,抑制尿道瘢痕形成(P<0.05)。结论:NETs浸润促进尿道创伤后尿道成纤维细胞活化和增生性瘢痕形成。

透骨血竭散对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的作用机制

目的探讨透骨血竭散(TGXJS)对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(Synovial fibroblasts,SFs)增殖、凋亡和炎症因子的影响及可能的作用机制。方法培养大鼠SFs,并设置细胞分组,细胞分为5组,分别为对照组(正常培养不做处理,Control),模型组(IL-1β处理24 h,Model),透骨血竭散组(IL-1β和透骨血竭散共处理24 h,TGXJS)、透骨血竭散+sh-ALX3组(转染ALX3基因敲降质粒24 h后,加IL-1β和透骨血竭散共处理24 h,TGXJS+sh-ALX3),透骨血竭散+sh-ALX3+OE-ITGB1组(转染ALX3基因敲降质粒和ITGB1基因过表达质粒24 h后,加IL-1β和透骨血竭散共处理24 h,TGXJS+sh-ALX3+OE-ITGB1)。Western-blot检测各组细胞ALX3和ITGB1蛋白表达情况;CCK8细胞增殖实验检测各组细胞72 h后细胞增殖率;ELISA法检测各组细胞炎症因子IL-6、IL-10和TNF-α水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果与对照组比较,模型组ALX3和ITGB1蛋白表达降低,细胞增殖率增高,IL-6、IL-10和TNF-α水平提升,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,透骨血竭散组ALX3和ITGB1蛋白表达增高,细胞增殖率降低、IL-6和TNF-α水平降低,IL-10水平增加,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05);与透骨血竭散组比较,透骨血竭散+sh-ALX3组,ALX3和ITGB1蛋白表达降低,细胞增殖率增高,IL-6和TNF-α水平水平上升,IL-10水平下降,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),透骨血竭散+sh-ALX3+OE-ITGB1组ALX3蛋白表达降低,ITGB1蛋白表达上升,细胞增殖率降低,IL-6和TNF-α水平降低,IL-10水平上升,细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论透骨血竭散通过激活ALX3基因,上调ITGB1表达,抑制RA大鼠SFs增殖、凋亡和炎症反应。

脑缺血-再灌注后BDNF和bFGF表达与神经元凋亡的关系及脑脉康的干预作用

目的 :观察脑缺血再灌注损伤后脑源性神经营养因子 (BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)蛋白表达与神经元凋亡的关系 ,探讨脑脉康的干预作用及机制。方法 :建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型 ,应用脑脉康进行干预。采用免疫组化方法和凋亡原位末端标记技术 (TUNEL) ,观察脑缺血 3h及再灌注7、2 4、96和 16 8h的 BDNF、b FGF蛋白分布、表达的动态变化与凋亡细胞分布与时相关系以及脑脉康的干预作用。结果 :模型组大鼠缺血 3h、再灌注 7h半暗区皮质及新纹状体区 BDNF、b FGF表达即明显升高 ,再灌注2 4 h达到高峰 ;缺血侧海马 CA1～ CA3区及丘脑则于再灌注 96 h达到高峰。缺血侧半暗区神经元凋亡于2 4～ 96 h达到高峰 ;海马 CA1～ CA3区及丘脑、纹状体区于再灌注 16 8h仍有相当数量的凋亡细胞。与对照组比较 ,中药组于再灌注 2 4～ 16 8h BDNF、b FGF表达显著升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,凋亡细胞数则明显减少(P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。结论 :脑缺血再灌注损伤后 BDNF、b FGF的表达升高 ,在一定程度上可抑制神经元凋亡 ,促进神经功能状态的恢复 ,对脑缺血损伤有重要的保护作用。脑脉康可能通过促进脑缺血再灌注损伤后BDNF、b FGF表达 ,激活内源性神经保护机制 。

滑膜间充质干细胞软骨分化能力的实验研究

目的探讨滑膜间充质干细胞软骨分化能力。方法无菌状态下获取兔颞下颌关节滑膜组织,酶消化法进行滑膜间充质干细胞原代培养,并进行传代扩增。第3代细胞消化后离心成为细胞团块,用软骨诱导液培养,并以鸡尾酒法添加生长因子人重组转化生长因子β1(recombined human transforming growth factorβ1,rhTGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),即前3天2种生长因子共同使用,之后只用rhTGF-β1继续培养18d。细胞团块培养21d后,免疫组织化学染色检测Ⅱ型胶原的表达。细胞团块培养在普通培养基中不添加rhTGF-β1和bFGF作为对照组。结果滑膜间充质干细胞经过传代培养后,成为形态一致的梭形细胞;细胞团块经软骨诱导液、rhTGF-β1和bFGF培养后,免疫组织化学染色可见Ⅱ型胶原在细胞之间的细胞外基质中明显显色,并且细胞团块的周边要比中央浓染;原本二维培养状态下的梭形滑膜间充质干细胞变为球形的软骨样细胞形态。结论滑膜间充质干细胞具有很强的成软骨能力,可以作为髁突软骨组织工程的种子细胞。

阿托伐他汀对醛固酮诱导心脏成纤维细胞内皮素表达的影响

目的:研究阿托伐他汀对醛固酮诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)内皮素(ET)表达的影响.方法:以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,放免法检测CFs培养液中ET水平,流式细胞术测定CFs中的ET-1含量,RT-PCR测定内皮素-1前体(ppET-1) mRNA的表达.结果:醛固酮(1×10-7mol/L)组CFs培养液中ET水平和CFs中的ET-1含量及ppET-1 mRNA的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);醛固酮(1×10-7mol/L)+阿托伐他汀(1×10-6,1×10-5,1×10-4mol/L)组明显低于醛固酮(1×10-7mol/L)组,差异有统计学意义(P<0.01);醛固酮(1×10-7mol/L)+阿托伐他汀(1×10-4mol/L)+甲羟戊酸(1×10-3mol/L)组明显高于醛固酮(1×10-7mol/L)+阿托伐他汀(1×10-4mol/L)组,差异有统计学意义(P<0.01),但和醛固酮(1×10-7mol/L)组接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论:阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的CFsppET-1 mRNA表达以及ET-1的合成和分泌,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关.

survivin、FHIT及bFGF在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:研究凋亡抑制基因survivin、抑癌基因FHIT及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织(CIN)及宫颈鳞癌组织中的表达及其与宫颈鳞癌临床分期、病理分级及淋巴结转移的关系,探讨其在宫颈鳞癌发生、发展中的作用。方法:分析郑州大学第二附属医院病理科2008年1月至2009年11月手术切除、病理检查证实为宫颈鳞癌的组织标本45例,另取CIN45例、正常宫颈组织15例(子宫肌瘤行子宫全切除术的宫颈组织)作为对照,应用免疫组化SP法检测survivin、FHIT及bFGF在3组宫颈组织中的表达情况。结果:sur-vivin在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈上升趋势(χ2=11.429,P<0.05),survivin的表达在宫颈鳞癌不同临床分期、病理分级间比较,差异有统计学意义(P<0.05);FHIT在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达呈下降趋势(χ2=24.640,P<0.05),FHIT的表达与宫颈鳞癌病理特征的关系中,仅在淋巴结有无转移方面比较差异有统计学意义(P<0.05);bFGF在正常宫颈组织、CIN及宫颈鳞癌组织中的阳性表达依次呈上升趋势(χ2=17.552,P<0.05),bFGF的表达在宫颈鳞癌不同临床分期、病理分级及淋巴结有无转移方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:survivin、FHIT、bFGF的表达与宫颈病变的进展有一定的关系,并且可能与宫颈鳞癌的发生、发展及浸润和转移有关。

磁性附着体模拟静磁场对人牙周膜成纤维细胞致突变性的研究

目的:探讨磁性附着体静磁场是否对人牙周膜成纤维细胞具有致突变作用。方法:对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别进行12.5、125、250mT静磁场持续加载4d,另设无外加静磁场作用的阴性和阳性对照组,采用微核试验和彗星试验对各组细胞分别进行染色体和DNA损伤检测。结果:各磁场剂量组细胞微核发生率与阴性对照组比较未见明显差异(P>0.05),其彗星细胞拖尾率和尾长亦与阴性对照组无显著差异(P>0.05)。结论:在现设定条件下,磁性附着体静磁场对人牙周膜成纤维细胞染色体和DNA无明显损伤作用。

硝酸异山梨酯对大鼠缺血心肌血管新生的影响

目的观察硝酸异山梨酯对急性心肌梗死(AMI)大鼠缺血心肌组织形态、梗死面积及毛细血管新生的影响。方法Wistar大鼠90只建立AMI模型后,随机分为5组,分别为正常组,假手术组,模型组,硝酸异山梨酯低剂量组(IDL组)和硝酸异山梨酯高剂量组(IDH组),每组18只。大鼠饲养7、14天后各随机处死9只,截取心肌组织,进行光镜、电镜观察,利用NBT染色法测定心肌梗死面积,应用免疫组织化学法测定Ⅷ因子,进而计算缺血心肌微血管密度(MVD),通过RT-PCR技术检测血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果光镜下观察,缺血区可见炎细胞浸润、心肌肿胀、梗死区纤维化。与模型组比较,IDL组和IDH组7、14天心肌梗死面积明显缩小,MVD明显增加(P<0.05);正常组、假手术组VEGF mRNA、bFGF mRNA表达有所减少,而IDH组则有所增加。结论硝酸异山梨酯可明显缩小AMI大鼠梗死面积,促进缺血心肌的毛细血管新生,对心肌缺血损伤具有保护作用。

当归对大鼠肺纤维化间质成纤维细胞的干预作用

目的:观察浓当归对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化程度的影响及对肺间质成纤维细胞的影响。方法:45只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和当归组,经气管内灌注博来霉素后,当归组大鼠腹腔内注射浓当归注射液10 ml/(kg.d),空白组、模型组给予等量生理盐水处理,分别于第7,14和28天各处死5只大鼠。免疫组化法分析各组α-平滑肌动蛋白(-αSMA)、胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)表达水平,用原位杂交的方法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平。结果:当归组大鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ沉积较模型组明显降低(P<0.05);当归组间质中-αSMA阳性表达水平较模型组明显减低(P<0.05),当归组大鼠肺组织CTGF mRNA水平较模型组降低(P<0.05)。结论:当归可能通过降低纤维化肺组织中CTGF mRNA水平,间接抑制成纤维细胞增殖、分化作用,减轻纤维化程度。

白藜芦醇对人胚肺成纤维细胞株MRC-5生长的抑制作用

目的探讨白藜芦醇(Res)对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及相关机制。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,分别予20μL二甲基亚砜(DMSO)及0、12.5、25、50、100、200μmol·L-1Res处理细胞24、48、72 h,通过MTT法分析细胞增殖抑制率。另外,以20μL DMSO(溶媒组)及50、100μmol·L-1Res孵育细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,行原位缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡指数(AI),应用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)mRNA与蛋白表达,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果随着Res浓度的升高和处理时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加(P<0.01)。在共同培养48h后,50、100μmol·L-1Res处理组S、G2/M期DNA比例及Cyclin D1、CDK4 mRNA与蛋白表达水平、Bcl-2蛋白表达水平降低,而G0/G1期DNA比例、AI、凋亡率及Bax蛋白表达水平增加,与溶媒组比较,差异均有显著性(P<0.01),并且100μmol·L-1Res效果强于50μmol·L-1(P<0.01)。结论Res能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与阻碍细胞周期进展及促进细胞凋亡有关。

抑制Sonic Hedgehog信号能抑制脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成且不利于神经功能恢复

目的探讨抑制Sonic Hedgehog(Shh)信号对脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成及神经功能的影响。方法构建体内成年SD大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型和体外新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞氧糖剥夺/再复氧(OGD/R)模型。成年SD大鼠随机分成假手术组、缺血/再灌注组(I/R)、缺血再灌注腺病毒空载(rAd-NC)组和缺血再灌注腺病毒敲低Shh(rAd-ShShh)组。SD大鼠脑膜原代成纤维细胞随机分成正常组、缺血对照组、肿瘤生长因子-β1预处理组(TGF-β1)、TGF-β1预处理加环王巴明组(TGF-β1+CYC)。每组细胞被预处理24 h经OGD/R 150 min后复氧72 h。采用改良神经严重程度评分(mNSS)、改良Bederson评分评估神经功能缺损。CCK-8法测定细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫荧光法检测缺血中心纤维连接蛋白(Fn)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Shh的表达,TUNEL染色检测缺血中心细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测缺血中心Fn、α-SMA及Shh mRNA的表达,WB法检测OGD/R后成纤维细胞Shh、α-SMA蛋白的表达。结果体内实验中免疫荧光法及qPCR法结果显示与假手术组相比SD大鼠MCAO/R后可诱导缺血侧大脑半球Shh、α-SMA、Fn蛋白和mRNA的表达升高(P<0.05)。而与MCAO/R组相比,rAd-Shshh组缺血侧大脑半球Shh、α-SMA、Fn蛋白和mRNA的表达降低(P<0.05),缺血侧组织细胞的凋亡增加(P<0.05),改良神经严重程度评分(mNSS)、改良Bederson评分增高(P<0.05)。体外研究中CCK-8实验显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组A值升高(P<0.05),而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比A值没有明显差异(P>0.05)。细胞划痕实验结果显示与正常组和缺血对照组相比在24 h内TGF-β1组成纤维细胞的迁移距离增加(P<0.05),而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比成纤维细胞的迁移距离减少(P<0.05)。免疫荧光实验、Westernblot及qPCR显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组细胞Shh、α-SMA和Fn的表达升高(P<0.05),而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比Shh、α-SMA和Fn的表达降低(P<0.05)。结论抑制Shh信号能抑制脑缺血性损伤早期纤维瘢痕的形成且不利于神经功能的恢复。

三种口腔溃疡中药制剂对小鼠成纤维细胞生长增殖和胶原合成的影响

目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影响。结果西瓜霜在促进成纤维细胞的增殖及胶原合成,抑制MMP-2,促进TIMP-1方面有较显著的作用。云南白药促进能够HYP的分泌和抑制MMP-2的分泌。甘草泻心汤对成纤维细胞有一定的抑制作用。结论提示临床上治疗复发性口腔溃疡时应联合用药或分期用药。

环杷明对急性脑梗死大鼠血管再生的影响

目的探索Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对脑梗死大鼠血管再生的影响。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑梗死模型(MCAO)并分组:脑梗死模型组、环杷明处理组(Shh信号通路的特异性抑制剂,造模后立即以0.18mg/kg的剂量腹腔注射),另设假手术组(只分离血管不插线栓,与环杷明处理组同样的方法注射等量的溶剂乙醇)。在大鼠永久性缺血24h后应用RT-PCR检测脑梗死大鼠缺血半暗带区域Shh信号通路下游因子GLI1mRNA的表达;免疫组化染色法检测血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果在缺血半暗带区域的血管内皮细胞及神经细胞中均可检测到有GLI1mRNA、VEGF和bFGF的表达;模型组与环杷明组GLI1mRNA、VEGF和bFGF的表达均明显高于假手术组(P<0.05);但环杷明处理组GLI1mRNA、VEGF和bFGF的表达明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论环杷明可造成急性脑梗死后血管再生相关因子表达下降,可能影响缺血后半暗带区域血管再生,为进一步研究Shh信号通路在急性脑梗死大鼠血管再生中的作用提供了实验基础。

一种新的培养人胚胎干细胞的包被基质

目的：开发一种新的培养人胚胎干细胞（ hESCs）的包被基质，使hESCs的培养更加简便。方法用甲醇固定的小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF）作为包被基质，人胚胎干细胞系X-01在该基质上生长，每隔5～6 d传代一次，培养10代后，对人胚胎干细胞特性进行检测，包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达和分化能力。结果 hESCs在新的基质上生长良好，经10次传代后仍能保持典型的hESCs克隆形态。碱性磷酸酶染色阳性，免疫荧光染色 Oct4、SSEA4、Tra-1-60为阳性，体外分化可形成拟胚体。结论此种固定的基质可以大量制备，长期保存，并可以长期维持hESCs的未分化状态，为人胚胎干细胞的体外扩增探索出了一个新的途径。

基于VEGF/FGF血管生成因子及TNF因子表达研究鹤草茶束胎的功效与机制

目的:验证鹤草茶在小鼠孕期的束胎功效,研究鹤草茶发挥束胎功效过程中的抗炎与调控血管新生的机制。方法:将ICR孕鼠随机分为高、中、低剂量试验组与对照组,试验组自受孕8.5dpc起分别给予60、80、100 mg/mL鹤草茶制备的浸提物,于13.5dpc时处死一半孕鼠,取小鼠全胚制作石蜡切片,以免疫组化方法检测鼠胚中血管生长相关因子VEGF与FGF的表达水平,雌激素受体ER以及抗炎因子TNF的表达水平。剩余孕鼠统计产仔时间、平均胎仔数、平均胎仔体重、胎仔平均离乳体重、胎仔发育异常等指标。结果:与对照组相比,60~100 mg/mL鹤草茶组孕鼠的产仔时间、平均胎仔数、胎仔存活率指标均未见明显差异,80 mg/mL鹤草茶组与100 mg/mL鹤草茶组出生胎仔出现平均体重明显降低(P<0.05)。孕鼠摄入鹤草茶浸提物后,其胎鼠体内ER的表达水平与对照组胎鼠相比无明显差异,但VEGF(P<0.01)与FGF(P<0.05)的表达水平显著增高,TNF的表达水平提高但无统计学意义(P>0.05)。结论:以60~100 mg/mL仙鹤草制备的浸提物对ICR孕鼠具有明确的束胎功效,其发挥束胎功效的作用机制与调控胚胎血管新生、提高抗炎因子表达有关,60~80 mg/mL鹤草茶为相对安全的动物束胎实验剂量。

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中CK15表达水平的影响

目的通过检测大鼠慢性难愈合创面组织中细胞角蛋白(cytokeratin,CK)15的动态表达水平,探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)促进慢性难愈合创面愈合的部分作用机制。方法选取SPF级健康成年雄性Wistar大鼠90只适应性喂养7 d后,按照随机数表法随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组与rb-bFGF组,每组18只,其中空白组大鼠只做背部备皮处理,对照组大鼠于背部建立急性创面模型,模型组、MEBO组和rb-bFGF组大鼠于背部建立慢性难愈合创面模型;模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以0.9%氯化钠注射液纱布湿敷,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱换药治疗,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rb-bFGF)药纱换药治疗。分别于治疗第3、7、14天,采用Western blotting技术及Real-time PCR技术检测各组大鼠皮肤或创面组织中CK15蛋白及CK15mRNA的表达水平。结果空白组大鼠皮肤组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平无明显变化(F=0.054、1.333,P=0.948、0.293),其他各组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均呈先降低后升高的趋势(CK15蛋白:F=192.766、58.065、126.888、118.244,P均=0.000;CK15 mRNA:F=580.869、272.569、569.254、736.054,P均=0.000)。治疗第3、7天,对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著低于模型组(P均<0.05),而治疗第14天对照组、MEBO组、rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均显著高于模型组(P均<0.05);治疗第3、7、14天,MEBO组与rb-bFGF组大鼠创面组织中CK15蛋白及CK15 mRNA表达水平均无明显差异(P均>0.05)。结论通过调控创面组织中CK15的表达水平促进表皮干细胞的增殖可能是MEBT/MEBO加快慢性难愈合创面愈合的部分作用机制,且其治疗效果与rb-bFGF相当,作用机制与rb-bFGF相似。

抗肿瘤坏死因子单抗对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞TRAIL和TNF-α的影响

目的:观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)肿瘤坏死因子(TNF)受体相关凋亡诱导配体(TRAIL)和TNF-α的诱导作用及抗肿瘤坏死因子单抗(抗TNF单抗)对其的影响,探讨TNF超家族参与牙周病的可能作用机制。方法:HPLFs培养至第6代,加入不同浓度的脂多糖(0、0.1、1、10、100μg/m L)培养24 h,分为命名为Z0组、Z0.1组、Z1组、Z10组、Z100组,并取Z1组浓度的脂多糖,在加药的同时加抗TNF单抗75μg/m L(Z1+75组)。分别采用实时荧光定量PCR法或Western blot法测定TRAIL和TNF-αm RNA或蛋白的表达。结果:Z1组、Z10组HPLFs TRAIL m RNA的表达水平显著高于Z0组或Z0.1组(均P<0.05),Z1组与Z10组之间差异无统计学意义(P>0.05);Z100组显著高于Z0组(P<0.05)且与Z0.1组、Z1组和Z10组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。Z1组或Z10组TNF-αm RNA的表达水平显著高于Z0组或Z100组(均P<0.05);Z1组与Z10组之间,Z0组、Z0.1组和Z100组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。HPLFs TRAIL蛋白的表达水平在Z100组<Z0组<Z0.1组<Z1组(均P<0.05或<0.01);Z10组显著高于Z0组或Z100组(均P<0.01),但与Z0.1组或Z1组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。抗TNF单抗治疗后TRAIL m RNA及蛋白和TNF-αm RNA的表达水平显著低于Z1组(P<0.05和P<0.01)。TRAIL和TNF-αm RNA的表达水平呈显著直线正相关(r=0.819,n=30,P<0.01)。结论:HPLFs经脂多糖诱导后,其TRAIL和TNF-α的表达呈现先升高后下降,且随脂多糖的浓度变化而相应地变化,这种诱导作用能被抗TNF单抗所抑制。

卵巢子宫内膜异位囊肿中PTTG、bFGF和c-myc的表达及意义

目的:探讨PTTG、bFGF和c-myc在卵巢子宫内膜异位囊肿的表达及意义。方法:用免疫组化法检测60例卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位内膜、在位内膜及34例正常子宫内膜组织中PTTG、bFGF及c-myc的表达水平。结果:在卵巢子宫内膜异位囊肿患者异位内膜中,PTTG、bFGF及c-myc的阳性表达率分别是80%、76.7%及66.7%,其阳性率明显高于在位内膜(P<0.05)及正常子宫内膜组织,在位内膜亦高于正常对照组内膜(P<0.05)。等级相关分析PTTG、bFGF及c-myc呈正相关关系。结论:卵巢子宫内膜异位囊肿中PTTG表达明显高于正常子宫内膜组织,可能是通过上调bFGF和c-myc蛋白表达在卵巢子宫内膜异位囊肿的发生发展中发挥了作用。