红麻下胚轴原生质体的分离与培养

采用暗培养3日龄的红麻无菌苗下胚轴,在0.45mol.L-1甘露醇的渗透压条件下,以5.0mg.L-1纤维素酶(CelluloseR-10)和5.0mg.L-1果胶酶(Pectinase)酶解12h,原生质体的产率最高,活力较强。以5.0×104个.mL-1的密度,在改良的KM8P培养基中,附加0.5mg.L-12,4-D和0.5mg.L-16-BA,用微滴法培养,对原生质体的分裂和愈伤组织的形成极为有利。

红麻Ms5基因的克隆及多转录本分析

为研究Ms5基因在红麻(Hibiscus canabius L.)花药中的转录特征,以L23A不育系为试材,基于已知的红麻Ms5基因5′端cDNA序列,采用3′RACE和RT-PCR技术对该基因全长cDNA序列进行克隆。序列比对分析结果表明,红麻花药组织中同时存在Ms5基因2种不同的转录本,其长度分别为972和1 105bp,依次命名为HcMs5-α和HcMs5-β。这2种转录本均包含了完整且一致的编码序列,其编码序列(CDS)全长为858bp,预测编码的蛋白质含有285个氨基酸残基,分子质量为32.4ku,理论等电点为7.62;两者5′端前972bp序列完全一致,但3′端的非编码区(UTR)长度有所不同,HcMs5-β在第972bp以后比HcMs5-α多出133bp的序列,具有选择性转录终止的特征。这种转录终止信号的可选择性可能与该基因转录后水平的调控有关。