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UPEC双组分信号系统KguS/KguR调控基因缺失株的构建及其生长特性研究
1
作者
李国强
朱丽萍
+2 位作者
朱丽臻
陈蕾蕾
颜世敢
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1113-1117,共5页
[目的]构建尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC) CFT073株的双组分信号系统Kgu S/KguR调控的c5032—c5037基因的缺失株,并研究基因缺失株在有氧和厌氧条件下的生长特性。[方法]运用Red重组系统将带有c5032—c5037...
[目的]构建尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC) CFT073株的双组分信号系统Kgu S/KguR调控的c5032—c5037基因的缺失株,并研究基因缺失株在有氧和厌氧条件下的生长特性。[方法]运用Red重组系统将带有c5032—c5037基因同源臂的氯霉素抗性基因取代c5032—c5037基因,在温度敏感型质粒p CP20作用下消除氯霉素抗性基因,构建基因缺失株CFT073Δc5032—c5037,用PCR和基因测序验证基因敲除是否成功,测定有氧和厌氧条件下CFT073Δc5032—c5037在以α-酮戊二酸为唯一碳源的M9培养基中培养不同时间的菌液D600值。[结果]构建了CFT073Δc5032—c5037,PCR验证及基因测序结果均表明已成功敲除c5032—c5037基因;厌氧条件下CFT073Δc5032—c5037在以α-酮戊二酸为唯一碳源的M9培养基中生长比野生型菌株CFT073缓慢,且差异极显著(P<0.01),但在有氧条件下二者的生长无显著差异。[结论]成功构建了基因缺失株CFT073Δc5032—c5037,并试验证实Kgu S/KguR调控的c5032—c5037基因在厌氧条件下参与α-酮戊二酸的利用,为进一步研究Kgu S/KguR在UPEC中的代谢适应机制奠定了基础。
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关键词
尿道致病性大肠杆菌
kgu
S/
kgu
R
c5032-c5037基因
RED重组系统
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职称材料
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
被引量:
2
2
作者
孙文敬
杨荔
+5 位作者
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期66-72,共7页
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,...
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。
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关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸差向异构酶
kgu
E基因
克隆
表达
生物信息学
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职称材料
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因的克隆与分析
被引量:
4
3
作者
孙文敬
栾方
+3 位作者
王大明
张晓飞
崔凤杰
李运哲
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2016年第6期50-55,共6页
该研究旨在克隆变形假单胞菌JUIM01的2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因kgu T,并明确其基本的生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组信息及其2-酮基葡萄糖酸操纵子的物理图谱设计简并引物,采用TD-PCR技术从变形假单胞菌中克隆到全长为1278...
该研究旨在克隆变形假单胞菌JUIM01的2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因kgu T,并明确其基本的生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组信息及其2-酮基葡萄糖酸操纵子的物理图谱设计简并引物,采用TD-PCR技术从变形假单胞菌中克隆到全长为1278 bp的kgu T,其核苷酸序列与Pseudomonas sp.CCOS191的编码2-酮基葡萄糖酸转运蛋白(Kgu T)的核苷酸序列的一致性为87%,编码一个由425个氨基酸残基组成的蛋白。该蛋白与Pseudomonas sp.M1的Kgu T在氨基酸序列上的一致性达90%,定位于细胞膜,是一个具有12个跨膜结构的疏水性的跨膜蛋白,无信号肽,其二级结构中α螺旋、延伸链和无规卷曲所占的比例分别为75.76%、2.12%和22.12%。本研究首次从2-酮基葡萄糖酸的工业生产用菌中克隆到基因kgu T,并对其进行了生物信息学分析,为变形假单胞菌的Kgu T的功能研究奠定了基础。
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关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸转运蛋白
kgu
T基因
克隆
生物信息学
原文传递
题名
UPEC双组分信号系统KguS/KguR调控基因缺失株的构建及其生长特性研究
1
作者
李国强
朱丽萍
朱丽臻
陈蕾蕾
颜世敢
机构
齐鲁工业大学(山东省科学院)生物工程学院/山东省微生物工程重点实验室
山东省临沂市相公中心医院
山东省农业科学院农产品研究所
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1113-1117,共5页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFC1601404)
山东省自然科学基金项目(ZR2018LC003)
+2 种基金
国家自然科学基金项目(31470243)
山东省重点研发计划项目(2014GSF120006)
山东省研究生教育创新计划项目(SDYY14024)
文摘
[目的]构建尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC) CFT073株的双组分信号系统Kgu S/KguR调控的c5032—c5037基因的缺失株,并研究基因缺失株在有氧和厌氧条件下的生长特性。[方法]运用Red重组系统将带有c5032—c5037基因同源臂的氯霉素抗性基因取代c5032—c5037基因,在温度敏感型质粒p CP20作用下消除氯霉素抗性基因,构建基因缺失株CFT073Δc5032—c5037,用PCR和基因测序验证基因敲除是否成功,测定有氧和厌氧条件下CFT073Δc5032—c5037在以α-酮戊二酸为唯一碳源的M9培养基中培养不同时间的菌液D600值。[结果]构建了CFT073Δc5032—c5037,PCR验证及基因测序结果均表明已成功敲除c5032—c5037基因;厌氧条件下CFT073Δc5032—c5037在以α-酮戊二酸为唯一碳源的M9培养基中生长比野生型菌株CFT073缓慢,且差异极显著(P<0.01),但在有氧条件下二者的生长无显著差异。[结论]成功构建了基因缺失株CFT073Δc5032—c5037,并试验证实Kgu S/KguR调控的c5032—c5037基因在厌氧条件下参与α-酮戊二酸的利用,为进一步研究Kgu S/KguR在UPEC中的代谢适应机制奠定了基础。
关键词
尿道致病性大肠杆菌
kgu
S/
kgu
R
c5032-c5037基因
RED重组系统
Keywords
uropathogenic Escherichia coli
kgu
S/
kgu
R
c5032-c5037 genes
Red recombination system
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
被引量:
2
2
作者
孙文敬
杨荔
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
机构
江苏大学食品与生物工程学院
百勤异VC钠有限公司
江南大学生物工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期66-72,共7页
基金
国家自然科学基金面上项目(31571885)
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2012AA022103)
+3 种基金
江西省科技计划项目(赣知发[2015]64号)
江西省创新团队建设计划项目(20142BCB24024)
江西省科技平台建设计划项目(2010DTZ01900)
德兴市科技计划项目(德科发[2015]44号)
文摘
采用降落聚合酶链式反应(touchdown polymerase chain reaction,TD-PCR)技术,从2-酮基葡萄糖酸工业生产菌株变形假单胞菌JUIM01中克隆了编码2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的基因kgu E。将目的基因与质粒pET-28a(+)重组后转入宿主表达菌中,获得了重组菌株大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-kgu E。在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的诱导下,该重组菌株表达了一个分子质量约为30.5 ku的融合蛋白,且该蛋白的Western-blot鉴定结果显示为阳性。生物信息学分析结果表明,该蛋白是一种由256个氨基酸残基组成的分子质量为28.5 ku的亲水性蛋白,与恶臭假单胞菌的2-酮基葡萄糖酸差向异构酶在氨基酸序列上的一致性达78%,定位于细胞质中,其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲所占的比例分别为40.62%、17.19%和42.19%。本研究结果为变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶的功能研究提供了一定理论支持。
关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸差向异构酶
kgu
E基因
克隆
表达
生物信息学
Keywords
Pseudomonas plecoglossicide
2-ketegluconate epimerase (
kgu
E)
kgu
E gene
cloning
expression
bioinformatics
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因的克隆与分析
被引量:
4
3
作者
孙文敬
栾方
王大明
张晓飞
崔凤杰
李运哲
机构
江苏大学食品与生物工程学院
百勤异VC钠有限公司
江南大学生物工程学院
出处
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2016年第6期50-55,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31571885)
国家高技术研究发展计划项目(2012AA022103)
+3 种基金
江西省科技计划项目(赣知发[2015]64号)
江苏大学研究生科研创新计划项目(KYXX_0046)
江苏大学大学生科研立项项目(13A083)
德兴市科技计划项目(德科发[2015]44号)
文摘
该研究旨在克隆变形假单胞菌JUIM01的2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因kgu T,并明确其基本的生物学信息。根据已报道的假单胞菌的基因组信息及其2-酮基葡萄糖酸操纵子的物理图谱设计简并引物,采用TD-PCR技术从变形假单胞菌中克隆到全长为1278 bp的kgu T,其核苷酸序列与Pseudomonas sp.CCOS191的编码2-酮基葡萄糖酸转运蛋白(Kgu T)的核苷酸序列的一致性为87%,编码一个由425个氨基酸残基组成的蛋白。该蛋白与Pseudomonas sp.M1的Kgu T在氨基酸序列上的一致性达90%,定位于细胞膜,是一个具有12个跨膜结构的疏水性的跨膜蛋白,无信号肽,其二级结构中α螺旋、延伸链和无规卷曲所占的比例分别为75.76%、2.12%和22.12%。本研究首次从2-酮基葡萄糖酸的工业生产用菌中克隆到基因kgu T,并对其进行了生物信息学分析,为变形假单胞菌的Kgu T的功能研究奠定了基础。
关键词
变形假单胞菌
2-酮基葡萄糖酸转运蛋白
kgu
T基因
克隆
生物信息学
Keywords
Pseudomonas plecoglossicida
2-ketogluconate transporter
kgu
T gene
cloning
bioinformatics
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
UPEC双组分信号系统KguS/KguR调控基因缺失株的构建及其生长特性研究
李国强
朱丽萍
朱丽臻
陈蕾蕾
颜世敢
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
下载PDF
职称材料
2
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸差向异构酶基因的原核表达
孙文敬
杨荔
栾方
何小用
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
下载PDF
职称材料
3
变形假单胞菌2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因的克隆与分析
孙文敬
栾方
王大明
张晓飞
崔凤杰
李运哲
《现代食品科技》
EI
CAS
北大核心
2016
4
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