Kidd血型相关SLC14A1基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨Kidd血型溶质载体家族14基因(solute carrier family 14,SLC14A1)在肾透明细胞(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)中的表达及临床意义。方法运用生物信息学分析方法,联合SANGERBOX、GEPIA、UALCAN、STRING等数据库分析和评估SLC 14A1在KIRC中的表达和临床预后价值。结果Kidd血型SLC 14A1基因在4种肿瘤中观察到了显著上调(P<0.05),在22种肿瘤中观察到了显著下调(P<0.05),其中SLC 14A 1在KIRC组织中mRNA表达水平显著低于正常组织(1.35±1.69 vs 3.90±2.47,P=4.7e-36)。生存分析表明,SLC 14A1表达水平与KIRC总体生存率呈显著正相关(P<0.05)。基于单因素Cox和多因素Cox回归结果分析低表达SLC 14A1是KIRC预后危险因素。KEGG富集分析代谢途径通路占主导地位,GO富集分析吞噬体酸化、三价铁运输、转铁蛋白转运占主导地位。结论Kidd血型SLC 14A1基因在多数KIRC中呈现低表达,与KIRC的发生、发展和预后不良相关,有望作为KIRC诊断、预后判断和治疗靶点。

某地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的筛选

目的筛选深圳地区儿童Kidd血型中JK(a-b-)表型。方法采用96孔微量板法尿素溶血实验从20 453例样本中筛选溶血阴性样本,血清学实验确认JK(a-b-)表型。结果 20 453例样本中筛选出4例JK(a-b-)表型,检出率为4∶20 453,频率为0.019 6。结论深圳地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的检出率略低于广东番禺地区,但明显高于广东韶关、上海、中国台湾、中国澳门、日本等其他地区。

深圳地区儿童Kidd血型Jk(a-b-)表型筛选及分子机理研究

目的调查深圳地区人群中Jk(a-b-)表型检出率;探讨深圳地区Jk(a-b-)表型产生的分子机理。方法用尿素溶血实验筛选出Jk(a-b-)表型,采用微柱凝胶法进行Jk(a-b-)表型血清学确认试验,并对Jk(a-b-)表型标本进行DNA提取扩增及纯化测序。结果从20 453儿童标本中筛选出4例Jk(a-b-)表型,检出率为4∶20 453,分布频率为0.019 6。在对其中4名先证者基因分型中,共发现了2种基因型,纯合IVS5-1G>A,杂合IVS5-1G>A合并杂合896G>A。结论深圳地区人群中Jk(a-b-)表型分布频率明显高于国内其它地区,检测到的基因型IVS5-1G>A、杂合IVS5-1G>A合并杂合896G>A是中国人群中最常见的基因变异。

利用红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法监测个体嵌合状态

本研究建立红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术以监测个体嵌合状态。根据红细胞Kidd血型等位基因的差异设计TaqMan MGB探针和特异性引物,进行实时荧光定量PCR检测个体嵌合状态,利用倍比稀释的方法模拟个体DNA嵌合状态并进行敏感性分析。结果表明,实时荧光定量PCR法可有效区分JK*A和JK*B等位基因。人工嵌合JK*A和JK*B的DNA标本实测值与理论值无显著差异(P>0.05)。在104个嵌合型细胞中存在156个供者型细胞时,该方法可有效检出供者型细胞。结论:建立的红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法检测嵌合体具有可行性,可以在一定范围内用于定量监测嵌合样本。

2012—2017年某三甲医院患者Kidd血型系统特异性抗体回顾调查

目的回顾性调查2012—2017年Kidd血型系统特异性抗体在本院患者人群中分布情况。方法抗体筛选技术应用微柱凝胶法进行,抗体筛选阳性标本做抗体鉴定,确定为抗-Jk^a,抗-Jk^b。调查患者的性别、年龄、诊断、妊娠史、输血史分析抗体产生原因。患者输血采用经交叉配血确定为阴性的血液。结果 2012年1月—2017年12月,共进行了325 091人次抗体筛选试验,共检出2 288人(0.70%)不规则抗体,其中Kidd血型系统抗体25人(0.008 0%),占红细胞不规则抗体1.09%。25例抗体中包括15例抗-Jk^a,10例抗-Jk^b,并且有6例合并其它血型系统的抗体。25例抗体22例进行了抗体性质鉴定,19例为IgG性质的抗体,2例为IgG合并IgM性质的抗体,1例为IgM性质的抗体。体内存在抗-Jk^a、Jk^b的阳性患者中7例只有输血史,7例只有妊娠史,6例既有输血史也有妊娠史,5例不详。15例患者输注了相应抗原阴性且交叉配血为阴性的血液,输注后无急性和迟发型溶血反应发生。结论 Kidd血型系统抗体并不常见,均为免疫抗体,绝大部分是IgG,少部分是IgM,常合并其它血型抗体。Kidd系统的抗体在体内及体外均容易减弱,在对输入的红细胞抗原的回忆反应中,抗体能迅速产生,并破坏在循环系统中的红细胞,有导致严重溶血性输血反应的风险,应引起临床输血相容性检测和新生儿溶血病的重视。

温州地区献血者Kidd血型基因频率调查与输血风险评估

目的调查温州地区献血者Kidd血型基因频率的分布,对Kidd血型不配合的输血风险进行评估。方法采用尿素溶血试验,对36 235例献血者进行Jk(a-b-)稀有血型进行筛选,随机抽取672例献血者的标本采用微量板法进行Kidd血型抗原的鉴定,再用血清学方法对JK(a-b-)表型和可疑的Kidd血型抗原的确认。结果在36 235例献血者中筛选出5例Jk(a-b-)表型,分布频率为0.014%,基因频率为0.012。672例献血者中,Jka和Jkb的基因频率分别为0.44和0.56。Jka和Jkb不配合的概率分别为0 21和0.16,Jka和Jkb不配合的概率合计为0.37。结论Kidd血型系统基因频率符合Hardy-weinberg群体遗传平衡法则;若怀疑为Kidd血型系统抗体时,应采用多种配血方法,以确保输血的安全。

流式细胞术应用于Kidd血型Jka抗原检测的建立

目的:建立流式细胞术鉴定Kidd血型Jka抗原的实验方法,并验证其准确性。方法:随机选取96(人)份无偿献血者血液样本,将红细胞与IgG性质抗-Jka混合孵育,随后结合荧光素Alexa Fluor 647标记的羊抗人IgG二抗,采用流式细胞术检测样本红细胞表面Jka抗原。通过流式细胞术获得每个样品的荧光直方图。利用血清学凝集试验比较衡量流式细胞术检测Jka抗原强度的准确性,利用PCR-SSP与基因测序分型验证流式细胞术检测Jka抗原阴阳性的正确性。结果:流式细胞术对于红细胞Jka抗原强度的检测与血清学鉴定结果相一致,血清学凝集强度越高,流式细胞术检测荧光强度也越高,Jka抗原强度也越高。流式细胞术检测灵敏度优于血清学方法,Jka抗原阳性包括弱阳性样本与阴性样本的荧光强度差别很大,极易区分。全部样本流式细胞术检测结果与基因分型结果完全一致,证实了流式细胞术的准确性。结论:成功建立了流式细胞术鉴定红细胞Kidd血型Jka抗原的方法,灵敏度优于传统的血清学方法,可以准确区分不同强度的Jka血型抗原。

广东惠州地区献血者Kidd血型基因频率分布与输血风险评估

目的通过对惠州地区无偿献血者Kidd血型抗原进行检测,了解其在人群中的分布特点及Jk(a-b-)分子遗传背景,对其在临床输血中的风险进行评估。方法采用微板法尿素溶血试验对惠州市中心血站2016年12月—2017年12月的30 475例献血者进行Kidd血型抗原筛查,筛出的Jk(a-b-)型用血清学试管法进行确认,并提取其DNA用PCR方法扩增JK基因第4—11外显子及部分内含子片段,对扩增产物进行直接测序分析。随机抽取献血者标本426例,采用试管法对其Kidd血型抗原进行鉴定,并计算输血不合风险。结果在30 475例献血者中筛选出7例Jk(a-b-)表型,分布频率为0.023%。对其中5名Jk(a-b-)献血者进行基因测序,发现2种基因变异:4名为纯合IVS5-1G>A,1名为纯合896G>A。Jk^(a )和Jk^(b )的基因频率分别为0.434 3和0.565 7。Jk^a不配合输血的风险为0.217 6,Jk^(b )不配合的风险为0.153 0,Jk^(a )和Jk^(b )不配合的风险合计为0.370 6。抗-Jk^(a )随机输血不配合的概率为69.0%,抗-Jk^(b )随机输血不配合的概率为82.2%。结论惠州地区Kidd血型基因频率分布符合Hardy-weinberg群体遗传平衡法则;IVS5-1G>A基因变异是本地区人群中最常见的变异。建立Jk(a-b-)稀有表型资料库,储备一定数量的该类血液制品,对于该类表型的稀有血型患者的安全输血具有重要意义。

凝聚胺检测Kidd血型系统抗原抗体效果评价

目的对凝聚胺试剂检测红细胞Kidd系统抗原抗体效果进行综合评价。方法随机选取40名献血者的血液,同时采用凝聚胺法、抗球蛋白法、盐水法进行红细胞Kidd系统抗原检测,比较3种方法的检测结果及凝集强度。结果40名献血者中,Jk(a+b-)9例,占22.5%,Jk(a-b+)14例,占35%,Jk(a+b+)16例,占42.5%。抗球蛋白与试管法的结果一致率100%,凝聚胺法共漏检了16例,其中Jk(a+b-)4例,Jk(a-b+)2例,Jk(a+b+)10例。结论凝聚胺法检出Kidd系统的抗原抗体能力有限,难以避免Kidd系统不规则抗体导致的输血不良反应。

Kidd血型基因多态性位点连锁突变及作为快速分型分子标记的探讨

目的研究中国人群Jk基因单核苷酸多态性与Jk^a、Jk^b抗原表型的关系,寻找其规律性,作为Kidd血型快速分子分型的标记。方法选取183份血液标本,其中174来自于中国深圳地区汉族健康无偿献血者,另外还包括3例Jk（a^w＋b-）以及6例Jk（a-b-）标本。首先,采用尿素溶解试验与血清学方法鉴定Kidd表现型。然后,扩增Jk基因第4—11外显子及部分内含子片段,进行DNA测序,比对测序结果寻找SNPs,并分析其与表型的关联。结果1）经DNA序列分析与表型比对,发现在183例标本中,无论何种Kidd表型,intron 7—68与exon 9 838两个位点的单核苷酸置换始终一致,表现出明显的连锁突变特征。2）在这183例标本中同时发现,Kidd血型的Jk^a和Jk^b抗原多态性与这两个位点的多态性之间也具有明显规律：80例Jk（a＋b＋）标本全部检测出Jk基因intron 7（-68C/T）与exon 9（838G/A）基因型; 40例Jk（a＋b-）则是intron 7 （-68C/C）与exon 9 （838G/G）纯合突变;相反,所有的Jk（a^（w/-））标本,包括54例Jk（a-b＋）、3例Jk（a^w＋b-）与6例Jk（a-b-）,则表现为intron 7 （-68T/T）与exon 9 （838A/A）纯合突变。结论我们使用DNA测序技术对Jk基因的分子背景进行研究,发现了intron 7—68与exon 9 838两个位点单核苷酸多态性的连锁突变特征,及其与Kidd表型的一致性规律。我们提出了1种血型分型的新思路：通过对大量筛查,找出与表型呈现出明确规律性的SNPs作为分子标记,通过对其进行单一性检测从而达到对血型快速分型的目的。

Kidd血型基因启动子区域单核苷酸多态性及其等位基因频率与分布特征研究

目的:分析中国汉族人群Jk基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)及其等位基因频率与组合分布特征。方法:选取127例血液标本,包括8例Jk(a-b-)标本与119例随机选择的中国深圳地区汉族健康无偿献血者血样,利用血清学方法与尿素溶血试验鉴定Kidd血型表型,并对Jk基因启动子与外显子1-11及其侧翼的区域扩增后测序,分析序列信息。结果:8例Jk(a-b-)标本全部携带JkB/JkB等位基因,并且分属于2种中国汉族人群常见的Jknull基因型:6例为IVS5-1g>a,2例为896G>A。另外,对于Jk(a-b-)标本启动子区域的序列分析发现3个SNP:-110(rs900974)、-160(rs1484877)、-258(rs1484878)。统计不同Kidd表型中3个SNP的基因型频率显示符合Hardy-Weinberg平衡。这表明,本研究所选择标本对中国汉族人群具有代表性。结论:Kidd血型的Jk基因在启动子区域具有多态性。本研究对其启动子区域3个SNP的等位基因频率的统计分析揭示了其在不同Kidd表型中的组合分布特征,为进一步进行群体遗传学研究奠定基础。

江西地区不规则抗体致新生儿溶血病回顾性分析

目的:分析ABO以外不规则血型抗体导致的新生儿溶血病(ABO-HDFN)的抗体特异性分布特征、实验室检测情况及其与临床的相关性。方法:选取2012年10月至2021年12月本院送检的非ABO-HDFN病例为研究对象,随机选取同期确诊为ABO-HDFN的病例作为对照组,对引起HDFN抗体特异性分布、总胆红素、直抗、母亲孕产史、患儿日龄、有无合并ABO-HDFN、是否换/输血等资料进行回顾性分析,分析江西地区非ABO-HDFN患者的特征。结果:江西地区非ABO-HDFN的检出率逐年升高,187例非ABO-HDFN病例中,检出Rh-HDFN比例最高,为94.6%;与对照组ABO-HDFN相比,非ABO-HDFN的直抗平均积分值更高、总胆红素峰值更高、持续时间长;抗M-HDFN可能出现病情严重但直抗弱阳性/阴性的情况,临床上易被漏检而延误治疗;不规则抗体的特异性、患儿性别、母亲既往生育史、有无合并ABO-HDFN等指标与是否需要换/输血治疗之间均无相关性(P>0.05)。结论:江西地区引起非ABO-HDFN的不规则抗体以Rh血型系统为主,MNS血型系统次之。了解HDFN疾病的特征、血清学特点及与临床指标的相关性,将有助于及时发现、治疗非ABO-HDFN,降低并发症危害。

冠心病患者ABO、Rh、Kidd、Kell血型特点调查分析

目的探讨ABO、Rh、Kidd、Kell血型系统抗原在冠心病患者中的分布特点。方法收集新疆维吾尔自治区人民医院就诊符合纳入排除标准的冠心病患者样本2000例,进行ABO、Rh、Kidd、Kell血型主要抗原鉴定,并对RhD血型阴性表型的基因外显子测序,对不同民族冠心病患者血型分布情况进行统计分析。结果冠心病患者ABO血型中O型占比为28.87%;维吾尔族为A>B>O>AB,哈萨克族趋势同维吾尔族。检出RhD阴性样本59例(3.32%),频率依次为维吾尔族>哈萨克族>柯尔克孜族>回族>其他民族>蒙古族;检测出13种Rh分型,频率最高的是柯尔克孜族的CcDEe,为38.81%,各民族表型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);而Rh血型基因型分布,e基因频率仅次于D基因,而基因组合体频率中CDe基因型最常见;D阴性样本基因测序发现了新的突变位点5号外显子g.712G>A,另发现1例RhD 1227A杂合型Del样本。Jk^(a)、Jk^(b)抗原分布哈萨克族最高达83.33%、78.57%,对Jk^(a)/Jk^(b)表型统计发现哈萨克族Jk(a+b+)频率达61.90%,未检出Jk(a-b-)表型。K抗原检测得到阳性样本30例,占比1.69%,柯尔克孜族阳性率最高,为2.24%。结论ABO、Rh、Kidd、Kell血型系统抗原在不同民族冠心病患者中分布有各自的特点,为冠心病患者输血前检测、临床输血治疗及后期疾病相关性研究提供了依据。

基于分子倒置探针和二代测序技术的高通量Kidd血型基因分型

目的:开发一种基于分子倒置探针(molecular inversion probe,MIP)捕获技术的靶向二代测序(next generation sequencing,NGS)血型分型方法,以允许在一次运行中同时鉴定大量患者的Kidd血型。方法:提取基因组DNA后,使用MIP探针捕获靶标。然后,使用带有样品条形码和Illumina衔接子的引物通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产物,之后使用Illumina MiSeq对样品进行测序。用序列特异引物引导的聚合酶链反应(PCR-SSP)和新建方法同时检测10例献血者样品的Kidd血型以确定新建立的方法是否能够有效检测JKA、JKB等位基因。然后用基于MIP的NGS方法和血清学方法检测100例样本并比较结果的一致性。结果:基于MIP的NGS血型分型方法检测10例样本的结果均与PCR-SSP所得结果相同,表明新建方法能够有效检测JKA、JKB等位基因。建立的基于MIP的NGS分型方法检测100例样本的基因分型结果与血清学方法检测结果一致率为100%。在100例随机样本中,Jka和Jkb的频率分别为0.39和0.61,抗原频率符合其在东方人群中的分布规律。结论:基于MIP的NGS方法是一种可行的血型分析策略,允许进行大规模的Kidd血型检测。此外,将这种MIP方法扩展到新的血型系统只需要加入新的捕获探针。

广州地区无偿献血者人群中Jk(a-b-)表型筛选及分子遗传学研究

目的了解广州地区无偿献血者人群中,Kidd血型系统中Jk(a-b-)稀有血型个体的分布频率及分子遗传背景。方法用2 mol/L尿素溶解法,对50 000名广州血液中心无偿献血者中的Jk(a-b-)血型个体进行筛选。用传统的血型血清学方法对筛选到的Jk(a-b-)表型进行确证。随后从静脉血中提取DNA,PCR方法扩增Kidd血型系统编码基因Jk的所有编码外显子,并直接进行测序分析。结果在50 000名无偿献血者中共筛选到10名Jk(a-b-)血型个体,在广州地区无偿献血者人群中其分布频率约为0.02%。在对其中8名先证者基因分型中,共发现了2种基因型,纯合IVS5-1G>A(n=6),杂合IVS5-1G>A/杂合896G>A(299Gly>Glu)(n=2)。结论广州地区无偿献血者人群中,Jk(a-b-)的分布频率高于已报道的北方人群。高频率分布于太平洋波利尼西亚群岛的变异IVS5-1G>A,也是本人群中最常见的基因变异。

Jk(a-b-)表型分子机理的初步研究

目的 研究Jk(a-b - )表型的分子机理。方法 在标准血清学鉴定的基础上 ,对Jk(a -b - )表型进行第 4～ 11外显子及部分内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接进行测序分析。结果 Jk(a -b - )表型在第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A ;第 3内含子 3’端第 78位A→G ;第 8内含子 5’端第 84位C→T ;外显子第 5 88位A→G(第 7外显子内 ) ;第 838位G→A(第 9外显子内 )。其中第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A导致转录后外显子 6的缺失。结论 第 5内含子 3’端拼接接受位点的碱基G突变为A可能是Jk(a -b - )表型的分子遗传机理之一。

Jk(a-b-)表型和基因多态性分析方法的建立及其应用

目的建立筛检Jk(a-b-)表型及其基因分型的方法,探讨Jk(a-b-)形成的分子机制。方法采用红细胞在2mol/L尿素中溶血试验筛选20000名无偿献血者的Jk(a-b-)表型;以IgM型单克隆抗-Jka和-Jkb确认Jk(a-b-);PCR-SSP对Kidd血型做基因分型;PCR扩增JK基因4-11外显子及侧翼内含子,并对扩增产物进行测序。结果在2mol/L尿素溶血试验中,除1例红细胞未发生溶血,初步认定为Jk(a-b-)型外,其他19999例标本均发生溶血。该例不溶血的Jk(a-b-)型与单克隆抗-Jka和-Jkb不发生凝集反应,该Jk(a-b-)表型个体的JK基因在第5内含子3'端拼接接受位点g突变为a,携带纯合子的IVS5-1g>a基因突变,第7外显子499A>G杂合,588A>G突变。结论尿素溶血初筛、单克隆抗体确认、基因分型和测序方法可以用于Kidd系统Jk(a-b-)血型的表型和分子机制研究。

IgG-Jk^a联合IgG-cE、IgG-Fy^b抗体鉴定及输血策略分析

目的鉴定1例有复杂不规则抗体的标本,并探讨鉴定此类复杂不规则抗体的思路和方法及输血方案。方法对标本鉴定ABO、Rh、Duffy和Kidd等血型,采用盐水方法和间接抗球蛋白方法进行抗体筛选及鉴定抗体类型,采用盐水法、凝聚胺法和间接抗球蛋白方法进行交叉配血。结果患者血型血清学结果为O,CCDee,Jk(a±b+), Fy(a+b-);基因型结果为Jk(a-b+)和Fy(a+b-)。抗体鉴定结合交叉配血试验共检出血清中存在IgG-c、IgG-E、IgG-Fyb、IgG-Jk^a抗体,筛选以上4种抗原均为阴性的供血者与患者进行交叉配血相合后输注。结论对于复杂不规则抗体的鉴定,应当明确鉴定的思路,将多种实验技术和方法进行组合和分析,有效提高实验室解决疑难问题的能力,为临床提供相合血液,保障输血安全。

福建地区稀有血型JK(a-b-)表型筛选及分子遗传学分析

目的了解福建地区无偿献血者Kidd血型系统中JK(a-b-)表型的分布频率并分析其遗传学特征。方法用尿素溶解试验筛查福建地区180 626例无偿献血者JK(a-b-)表型;用经典血清学方法确证其表型;对JK基因的启动子、11个外显子及其侧翼区域(50~150 bp)扩增后测序并分析序列信息;用SNa Pshot技术分析福建地区200例献血者JK基因的单核苷酸多态性(SNP)。结果 180 626例无偿献血者中检出15例JK(a-b-)表型个体。分析15例JK(a-b-)表型个体JK基因,检测出的4种隐性基因分别为JK*B(IVS5-1G>A)、JK*B(896G>A)、JK*A(130G>A,220A>G)和JK*B(130G>A,956C>T),这4种隐性基因分别占检出无效基因的66.67%、23.33%、6.67%和3.33%。分析上述200例献血者JK基因SNP发现,JK*B(IVS5-1G>A)为0.75%,JK基因的G130A是一种常见的多态性,未检测到A220G、C222T、C956T、G896A变异。结论福建地区无偿献血人群中JK(a-b-)表型频率估计约为0.008%,JK*B(IVS5-1G>A)和JK*B(896G>A)是该地区JK(a-b-)表型的主要流行基因,发现1个新的引起JK(a-b-)表型的JK-null基因,即SLC14A1 130A,220G。

国内首次发现两例JK(a—b—)及其在不同人种中的分布

在河南汉族中发现了国内首例稀有的JK(a-b-)红细胞血型。家系调查未发现第二例。先证者父母及同胞均为Jk(a+b-)型,丈夫及儿子均为Jk(a-b+)型。四个月后在广东梅县客家人中又发现一例JK(a-b-)型,先证者为一未婚女子。两位先证者血清中均无抗体。到目前为止,JK(a-b-)型在中国人群中的分布频率为2/6391(0.03％)Jk基因频率为0.0202。