外源性一氧化碳释放分子3抑制肾脏固有树突状细胞活化的作用机制

目的观察外源性一氧化碳释放分子3(carbon monoxide-releasing molecule 3,CORM-3)对肾固有树突状细胞(renal dendritic cells,rDCs)活化的影响,并探讨其可能的作用机制。方法选取C57BL/6J(H-2kb)小鼠制备肾脏单细胞悬液,采用磁珠分选CD11c+rDCs,并用流式细胞术鉴定rDCs纯度。用CORM-3或无活性的CORM(inactive CO-releasing mol-ecule,iCORM)处理新鲜肾脏分离的rDCs,实时定量RT-PCR检测TLR4基因表达,ELISA法检测rDCs培养液上清中TNF-α蛋白水平。建立TLR4-/-(C3H/HeJ)和TLR4+/+(C3H/HeN)小鼠肾脏热缺血30 min+冷保存24 h模型,在冷保存期间经CORM-3处理之后分选rDCs,抽提RNA,行实时定量RT-PCR检测TNF-α基因表达。结果 CORM-3呈剂量依赖性地抑制小鼠未成熟rDCs的TLR4 mRNA表达(P<0.05)。与iCORM比较,CORM-3能够抑制LPS刺激后的rDCs表达TNF-α(P<0.01)。当TLR4缺陷之后,CORM-3不再抑制rDCs表达TNF-α。结论 CORM-3可显著抑制肾脏未成熟rDCs表达TLR4,也可抑制LPS刺激和缺血损伤时炎症因子的表达,但对于TLR4缺陷小鼠这一抑制作用消失,提示CORM-3对内源性配体介导的rDCs活化过程的抑制作用由TLR4信号通路介导。