传统“热补”针法对实验性关节炎家兔的镇痛效应及脑脊液中-βEP、CCK-8含量的影响

目的:观察传统“热补”针法对实验性关节炎家兔的镇痛效应和探求其中枢作用机制。方法:以卵蛋白诱导的关节炎家兔为疼痛模型,连续治疗6 d后比较药物组、捻针组、电针组和热补组关节炎家兔关节局部痛阈和脑脊液中-βEP和CCK-8的含量。结果:治疗后各治疗组痛阈和-βEP含量均升高,热补组-βEP含量明显高于药物组和捻针组(P<0.01),但不及电针明显(P<0.05);各治疗组CCK-8含量均向正常水平恢复,热补组CCK-8含量比药物组和捻针组恢复明显(P<0.01),但不及电针组恢复显著(P<0.01)。结论:“热补”针法的镇痛效应和捻转针法、药物(痹冲剂)相同,但不及电针的镇痛效应;升高脑脊液中-βEP含量和促使CCK-8含量向正常水平恢复,可能是其镇痛的中枢机制之一。

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As_2O_3细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法，并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203，体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％，其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20，剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低，As20，的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时，用CCK-8法优于M11’法，均比台盼蓝法更为灵敏。

CCK-8法检测九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

为了明确九香虫血淋巴对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,本文利用Bradford法检测九香虫血淋巴浓度,用不同浓度的九香虫血淋巴处理体外培养的MCF-7细胞,采用CCK-8法检测九香虫血淋巴对MCF-7细胞的抑制作用。结果表明:九香虫血淋巴能显著抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长,且对MCF-7的抑制率呈时间、剂量依赖关系。

CCK-8法评价口腔粘结材料的体外细胞毒性研究

目的:CCK-8法评价口腔粘结材料的体外细胞毒性研究。方法:应用CCK-8比色法比较体外4种粘结材料(普通型玻璃离子、加强型玻璃离子、SuperBond C&B及SE BOND)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontalligament cell,HPDLC)的细胞毒性,初步探讨4种粘结材料的生物学性能。结果:4种粘结材料对HPDLC的生物相容性影响结果相似,其中普通型玻璃离子及SuperBond C&B无细胞毒性,加强型玻璃离子具极轻微细胞毒性,SE BOND具轻微细胞毒性。结论:4种粘结材料均满足口腔材料临床应用的生物相容性要求。

CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干预BMSCs增殖条件的比较

目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×10^(4)/孔和0.25×10^(4)/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×10^(4)/孔和0.5×10^(4)/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×10^(4)/孔和0.1×10^(4)/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×10^(4)/孔或高于2×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×10^(4)/孔至1×10^(4)/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。

CCK-8法检测阿糖胞苷对白血病细胞株增殖抑制作用

目的探索阿糖胞苷(Ara-C)治疗急性白血病的剂量、时间与效应的相关性。方法采用CCK-8法,检测不同剂量梯度范围内(0.1～200μmol/L)、Ara-C作用不同时间(4～48 h),对白血病细胞株Jurkat(ALL)和NB4(AML)增殖抑制作用的差异与特征规律。结果 Jurkat细胞和NB4细胞在一定的Ara-C作用浓度范围内,均存在着随作用时间延长,增殖抑制逐渐提升的效应。在4 h和8 h 2个作用时间组中,随着Ara-C剂量递增,Jurkat细胞的增殖抑制率明显增加;而NB4细胞仅在0.5～50μmol/L浓度梯度范围内呈现剂量与效应的相关性。结论 Ara-C作为细胞周期特异性药物(CCSA),对肿瘤细胞的增殖抑制效应存在明显的时间-剂量相关性,Jurkat对Ara-C的敏感性高于NB4。[临床儿科杂志,2012,30(5):460-463]

CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性之最佳测试条件研究

目的研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞(RFFBs)增殖活性的最佳测试条件。方法以兔筋膜作为成纤维细胞原代培养组织,利用传代至P3的成纤维细胞,对比CCK-8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异,研究CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间及最佳检测波长。结果 CCK-8法检测兔筋膜成纤维细胞增殖活性的最佳检测时间为加入CCK-8试剂孵育后的4 h,最佳检测波长为450 nm。结论 CCK-8法在孵育4 h后及酶标仪450 nm波长下检测兔筋膜成纤维细胞的灵敏度最高。

CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。方法以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响。结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个。结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

CCK-8法检测药物影响肿瘤细胞增殖的优化研究

目的通过优化CCK-8的实验条件,提高检测药物影响肿瘤细胞增殖的敏感性和可靠性。方法以人肺癌A549细胞和白血病Molt-4细胞为研究对象,CCK-8法和MTT法分别检测细胞增殖的变化,并与Coulter细胞计数法和克隆形成率法进行比较。结果在相同的细胞数下,CCK-8法的检测灵敏度明显高于MTT法。以细胞密度1 000个/孔接种,抗肿瘤药物多柔比星处理96 h后,CCK-8法检测到的变化与克隆形成率法相当。分析Molt-4悬浮细胞发现:CCK-8法与Coulter细胞计数法的检测灵敏度无明显差异(P>0.05)。结论优化实验条件后,CCK-8法是一种灵敏度高、可靠性良好的细胞增殖检测方法。

热补针法对关节炎兔的镇痛后效应及其脑脊液中β-EP和CCK-8含量的影响

目的:观察热补针法的镇痛后效应,以探讨其镇痛的中枢机制。方法:将60只青紫蓝兔随机分为正常组(n=6)、模型组(n=6)、捻转组(n=24)和热补组(n=24),后2组又随机分为针后即时(0 h),针后0.5 h、1 h、2 h亚组,每组各6只。以卵蛋白诱导建立关节炎疼痛模型。针刺双侧合谷和足三里1次,留针30 min,捻转组用捻转针法,热补组用热补针法。以K+导入法引起家兔腿收缩的最小电流强度作为痛阈;抽取脑脊液1 mL,用放射免疫法测定β-内啡肽(β-EP)及八肽胆囊收缩素(CCK-8)含量。结果:模型组痛阈和CCK-8含量显著低于正常组(P<0.01);与模型组对比,捻转组和热补组针后各时刻痛阈和CCK-8含量均显著升高(P<0.01或P<0.05);热补组即时痛阈和即时、0.5 h时CCK-8含量与捻转组同一时刻对比,差别无统计学意义(P>0.05),但热补组针后0.5 h、1 h、2 h的痛阈显著高于捻转组(P<0.01或P<0.05)。模型组β-EP含量高于正常组(P<0.01);与模型组对比,捻针组和热补组各时刻β-EP含量均显著升高(P<0.01);热补组即时β-EP含量与捻转组对比差别无统计学意义(P>0.05),其余时刻β-EP含量热补组均明显高于捻转组(P<0.05或P<0.01)。结论:热补针法镇痛后效应优于捻转针法,脑脊液中β-EP和CCK-8含量变化与两种针法后效应不同有明显相关性。

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素 ( CCK-8)的 1个四肽片段 ( Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt) .该四肽片段是依次通过 Phac-Met-OEt与 Gly-OMe· HCl,Trp-OMe和 Met-OEt偶合得到的 ,这 3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂 ,并对影响反应的因素进行了研究 ,反应中间体和产物均经质谱 ( FAB-MS)

基础医学专业《Cell Counting Kit-8法测定贴壁细胞数》实验课程设计

《细胞生物学研究方法与实验技术》是首都医科大学面向基础医学专业本科生开设的一门理论与实验相结合的课程,《Cell Counting Kit-8法测定贴壁细胞数》是其中的实验课程之一。在本次实验中,针对肝癌细胞系BEL-7402设计不同接种密度、CCK-8孵育浓度和作用时间,通过酶标分析仪检测450 nm处吸光度,然后以细胞密度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制BEL-7402细胞的生长曲线从而明确细胞的增殖情况。笔者在多年的教学实践中通过不断尝试和探索,对本次实验的课程设计,包括实验基本原理、教学目标、实验内容和教学程序等做出归纳和总结,旨在为相关教育工作者的教学实践提供参考。

中风星蒌通腑胶囊介导CCK-8调控IL-10/STAT3信号通路改善脑出血小鼠的炎症损伤

目的探讨中风星蒌通腑胶囊介导胆囊收缩素八肽(CCK-8)对白细胞介素10(IL-10)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对脑出血小鼠的脑部炎症反应的调控作用及机制。方法将110只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、脑出血组及中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组,每组22只。采用胶原酶法建立脑出血模型,模型复制2 h后进行中风星蒌通腑胶囊混悬液灌胃(10 mL·kg^(-1)),假手术组与脑出血组灌以等量的生理盐水。记录小鼠的神经功能学评分及左转率;于术后72 h采用干湿质量法检测脑含水量;于术后72 h采用Western Blot法检测小鼠血肿周围肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及Janus激酶1(JAK-1)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)通路蛋白的相对表达水平;于术后第3、5天采用Elisa法检测小鼠CCK-8的相对表达水平;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测IL-10、STAT3的mRNA的表达水平。结果与脑出血组比较,中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组干预治疗后,第3天及第5天小鼠改良神经功能缺陷(NDS)评分明显降低(P<0.01),低剂量组第3天及第5天左转率降低(P<0.05),中剂量组第3天(P<0.05)及第5天(P<0.01)左转率降低,高剂量组第3天及第5天左转率明显降低(P<0.01)。低剂量组小鼠脑含水量减少(P<0.05),中、高剂量组小鼠脑含水量明显减少(P<0.01)。低剂量组促炎因子TNF-α、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),IL-1β表达减少(P<0.05),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01);中、高剂量组促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01)。低剂量组CCK-8的含量在用药后第3天增加(P<0.05),第5天含量明显增加(P<0.01);中、高剂量组CCK-8的含量在用药后第3天及第5天明显增加(P<0.01)。IL-10的mRNA相对表达水平在用药后均明显增高(P<0.01),STAT3 mRNA相对表达水平在用药后均明显降低(P<0.01)。结论中风星蒌通腑胶囊可以增加脑肠肽CCK-8的表达,调控IL-10/STAT3信号通路,从而减轻小鼠脑出血后的继发性炎症反应及细胞毒性脑水肿。

CCK-8法定量检测亚甲蓝对人髓核细胞的毒性

背景:前期细胞实验研究发现亚甲蓝确实对人髓核细胞具有毒性作用,且与药物浓度呈正相关,但是其毒性的临界范围未进行研究。目的:使用CCK-8法定量测定亚甲蓝对髓核细胞毒性作用的临界范围值。方法:选取1例椎间盘突出症患者的术后废弃髓核组织,提取髓核细胞,培养1代后制作细胞悬液,分9组接种到96孔板,空白对照只有培养基、CCK-8溶液而没有细胞;0加药对照组只有培养基、细胞和CCK-8溶液;其余7个加药组分别加入1%,0.5%,0.1%,0.05%,0.01%,0.005%,0.001%浓度的亚甲蓝干预细胞生长繁殖。在培养24,48,72,96 h后使用CCK-8法测定吸光度,计算细胞活力并观察每一组颜色变化。结果与结论:(1)颜色变化:0加药对照组颜色最深,加药组颜色与药物浓度负相关,且0.05%、0.01%、0.005%、0.001%组颜色较深并与0加药组颜色接近;(2)各组吸光度值均数及细胞活力:与0加药组相比,1%组吸光度减小(P<0.05),1%与0.5%组比较差异均无显著性意义(P>0.05),0.1%组吸光度及细胞活力显著高于0.5%组,0.05%组显著高于0.1%组;(3)结论:亚甲蓝对人髓核细胞具有细胞毒性,毒性临界值在0.1%-0.05%之间且靠近0.05%,确切值还有待于进一步研究。

CCK-8法测定纤维蛋白胶对人脂肪干细胞的细胞毒性

目的探讨CCK-8法测定纤维蛋白胶对人脂肪干细胞的细胞毒性。方法选取2018年11月12日来我院进行成人吸脂术的某位28岁健康女性的术后废弃脂肪组织,并从中得到人脂肪干细胞,分别制成50%浸提液组、100%浸提液组、阴性对照组、阳性对照组,采用CCK-8检测试剂盒测定各组纤维蛋白培养液中的吸光值。结果原代脂肪干细胞(ASCs)生长缓慢,传代后生长加速,且脂肪干细胞呈成纤维样细胞形态;阴性对照组的吸光值与50%、100%形态放置24h和72h的纤维蛋白胶浸提液组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。50%及100%纤维蛋白胶浸提液组、阴性对照组的吸光值均小于阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论纤维蛋白胶在与脂肪干细胞相混合的情况下无显著细胞毒性,能够为探索基于纤维蛋白胶作为支架材料的有关脂肪结构提供参考。

MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的对比研究

目的对比分析MTT法和CCK-8法检测人肝癌细胞活性的准确性。方法:同时采用MTT法和CCK-8法检测顺铂浓度在0.05、0.5、5umol/L时,肝癌细胞的致死率。结果:MTT法检测的偏大较大,而CCK-8法始终保持较小的偏差,CCK-8法要比MTT法更为准确,且存在统计学差异显著(P<0.05)。结论:CCK-8法检测肝癌细胞优越于MTT法,可以在检测其他细胞增殖上推广应用。

实时无标记细胞分析（RTCA）与CCK-8方法条件下LPS对奶牛乳腺上皮细胞增殖的比较分析

无标记细胞分析法(RTCA)与CCK-8法,可用于奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)活性监测。本研究选择RTCA和CCK-8两种方法,在0、5、10、20ng/μL4种不同浓度LPS条件下,研究LPS对MAC-T增殖的影响。结果表明,RTCA和CCK-8法均在不同浓度LPS条件下使MAC-T活力下降,均在浓度20ng/μL、时间6h时,下降最为明显。但相比之下,CCK-8法在定点测定时有局限性,而RTCA方法可以不间断、无标记和实时监测细胞贴壁、迁移和增殖的动态等生物反应过程,观察效果更加直观、准确,可较好地弥补CCK-8法的缺点,是较理想的研究奶牛乳腺上皮细胞增殖的方法。

应用CCK8法检测鸡淋巴细胞活性的检测最佳条件研究

为了研究应用CCK-8法检测鸡淋巴细胞增殖的体外培养最佳条件,试验设置了不同种板细胞数、血清浓度、培养时间、孵育时间和检测波长等条件对其进行比较研究。结果表明:1 750 r/min转速的改良鸡外周血淋巴细胞分离方法效果最佳;在体外增殖培养试验中,CCK-8加样4 h后在450 nm波长处检测OD值最理想,培养时间以44 h为最佳;在细胞数量一致的情况下,胎牛血清浓度为5%或者为10%差异不显著(P>0.05)。当细胞悬液浓度为1×10~6个/m L时,加入100,50,25,12.5μL不同细胞数,4组间比较均差异显著(P<0.05),并且随着细胞悬液浓度的增加OD值增加;最佳铺板细胞的细胞悬液浓度为2.0×10~6~3.0×10~6个/m L,取50~100μL为宜,即最佳细胞铺板数量控制在每孔1.5×10~5~2.0×10~5个/100μL。说明应用CCK-8法检测鸡外周血淋巴细胞活性的最佳条件除种板细胞数不同外,在检测波长、血清浓度、加样后孵化时间等方面与其他动物试验差别不大。

CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞最佳检测条件的实验研究

目的：研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）最佳检测条件。方法：以兔BMSCs分离、培养及扩增，经多次传代扩增，并取第4代细胞用于实验。对比CCK－8法在不同孵育时间及不同检测波长条件下吸光光度值的差异，研究CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳检测时间及检测波长。结果：牛膝醇提物能明显诱导兔骨髓间充质干细胞增生，对诱导兔BMSCs软骨分化具有较强的可行性。 CCK－8法检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs最佳测试时间为加入CCK－8试剂孵育后的2小时，最佳检测波长为450nm。适宜检测的细胞数量范围为2．5×103／ml～4×104／ml个。结论：CCK－8法在孵育2小时后及酶标仪450 nm波长下检测牛膝醇提物诱导兔BMSCs灵敏度最高。

八肽胆囊收缩素(CCK_8)的人工合成

本文报道了用液相法合成八肽胆囊收缩素(H-Asp-Tyr(SO_3H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH_2,ccK_8)。先分别合成C-端四肽和N-端四肽,然后缩合成八肽,并用温和的乙酰硫酸吡啶盐(PAS)法使其酪氨酸的酚羟基硫酯化。根据其氨基酸组成,层析行为和生物活性等证实产物为纯品。