猕猴桃溃疡病拮抗菌的抑菌物质分离及鉴定

对前期筛选得到的猕猴桃溃疡病病原菌丁香假单胞菌亚种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,PSA)拮抗菌进行了鉴定和抗菌物质分离及分析。用革兰氏染色鉴别菌株;将硫酸铵沉淀溶液进行牛津杯抑菌试验,观察抑菌圈的大小;利用Tricine-SDS-PAGE电泳分析硫酸铵沉淀的抑菌物质;然后溶解沉淀进行去离子水透析脱盐,超滤浓缩后用葡聚糖凝胶柱进行分子筛凝胶过滤层析,最后采用高效液相色谱分析其分子量大小。结果发现:可判断有效抑制PSA生长的假单胞菌菌落形态特征为圆形菌落、乳白色、光滑、凸起、边缘整齐、不透明、不运动,为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;其抑菌物质为细菌素,在40%和60%硫酸铵饱和度下提取效果最明显,抑菌作用最好,细菌素分子量大小为7 k Da左右。为研发细菌素产品提供了新思路,为防治猕猴桃溃疡病提供了理论基础和应用指导。

猕猴桃溃疡病菌拮抗菌的筛选、鉴定及其对植物病原真菌的抗性

从野生银杏中分离、筛选抗猕猴桃溃疡病内生细菌,并明确其对常见植物真菌病害的抑菌谱。采用“三步法”分离银杏内生细菌,并以猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)作为指标菌筛选拮抗菌;结合菌落形态特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列对拮抗菌进行鉴定;开展盆栽防治实验研究其对猕猴桃溃疡病的防治效率,并应用平板对峙法研究其对多种植物病原真菌的拮抗作用。结果共得到7株对Psa具有拮抗活性的内生细菌,其中,以菌株MA23的拮抗活性最为显著,鉴定为蜡样芽孢杆菌。MA23发酵液上清对猕猴桃溃疡病的盆栽防治效率为93.6%,同时其对多种病原真菌也具有拮抗活性。从银杏中筛选到一株对Psa具有较好拮抗活性的内生蜡样芽孢杆菌MA23,其对多种植物病原真菌也具有拮抗活性。

奉新县猕猴桃溃疡病病原菌鉴定

为明确江西省奉新县猕猴桃溃疡病病原菌种类。从该县7个猕猴桃生产基地采集呈典型症状的发病枝条和叶片,采用稀释分离法对其进行病菌分离并作致病性测定,共获得27个致病性细菌菌株。对各菌株进行培养性状、形态特征观察和生理生化测定,结果与文献中对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)的描述相吻合。提取各菌株基因组DNA,分别对其16S rDNA和16S-23S rDNA基因片段进行PCR扩增、测序、序列分析和构建系统发育树,结果各菌株16S rDNA和16S-23S rDNA序列长度均为1 500 bp和280 bp,且菌株间序列完全一致。将获得的两段序列利用Blast程序分别在GenBank中进行同源性搜索,发现其与丁香假单胞菌猕猴桃致病变种同源性均为100%。待鉴定菌株在系统发育树上与该变种处于同一分支。根据实验结果,将奉新县猕猴桃溃疡病的病原鉴定为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种。

一株生防菌处理条件下对猕猴桃溃疡病抗病相关酶活性的影响

以寻找新型高效的生物防治制剂达到控制引起猕猴桃溃疡病的致病菌为目的,通过研究生防菌XB-16对猕猴桃抗病相关酶(SOD,POD,CAT,PPO,PAL)的影响,发现经过生防菌XB-16处理过后的猕猴桃盆栽苗,其SOD、POD、CAT、PPO、PAL酶活性显著高于未接种生防菌盆栽苗(p<0.05),且最大峰值明显高于没有接种生防菌XB-16盆栽苗。研究结果表明该生防菌XB-16能够有效提高猕猴桃植株的抗病性,而在研究生防菌对猕猴桃抗病相关酶的影响方面的研究几乎没有,从可持续发展的角度来看生物防治法将是猕猴桃溃疡病的防治趋势,具有良好的开发应用前景。