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Kluyveromyces fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶的摇瓶培养条件 被引量:5
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作者 刘建福 王璋 许时婴 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2004年第4期82-85,93,共5页
脆壁克鲁维酵母(Kluyveromycesfragilis)LFS 8611合成的β D 半乳糖苷酶具有较高的催化半乳糖基转移反应活力.脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LFS 8611细胞生长和β D 半乳糖苷酶的合成同步.该菌株生长和产酶的最适碳源为半乳糖,乳糖次之;... 脆壁克鲁维酵母(Kluyveromycesfragilis)LFS 8611合成的β D 半乳糖苷酶具有较高的催化半乳糖基转移反应活力.脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LFS 8611细胞生长和β D 半乳糖苷酶的合成同步.该菌株生长和产酶的最适碳源为半乳糖,乳糖次之;最适氮源为蛋白胨F403;最适培养条件为:发酵培养基的初始pH值为7.0,摇床的转速为200r/min.培养基中碳源和氮源质量浓度对菌体生物量和β D 半乳糖苷酶活力有重要影响,以12mg/mL乳糖为碳源,16mg/mL蛋白胨(F403)为氮源,在最适培养条件下培养32h后,菌体生物量和β D 半乳糖苷酶活力分别为7.56g/L和18.83U/mL. 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母(kluyveromyces fragilis) β-D-半乳糖苷酶合成 培养条件
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影响kluyveromyces fragilisβ-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的因素 被引量:2
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作者 刘建福 王璋 许时婴 《南昌大学学报(工科版)》 CAS 2004年第1期76-80,100,共6页
研究了酶反应的温度、pH值、底物浓度和反应时间等对kluyveromycesfragilisβ-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响.结果显示,以乳糖为底物,kluyveromycesfragilisβ-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为60℃,最适pH值为6.0.... 研究了酶反应的温度、pH值、底物浓度和反应时间等对kluyveromycesfragilisβ-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响.结果显示,以乳糖为底物,kluyveromycesfragilisβ-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为60℃,最适pH值为6.0.酶法合成低聚半乳糖的产率随着底物浓度增加而增加.kluyveromycesfragilisβ-D-半乳糖苷酶催化低聚半乳糖合成的初速度较快,随着反应时间延长,反应速率降低,反应20h酶反应达到平衡.以660mg/mL乳糖为底物,在最适酶反应条件下,酶法合成低聚半乳糖的产率为207.12mg/mL. 展开更多
关键词 kluyveromyces fragilis Β-D-半乳糖苷酶 酶法合成 低聚半乳糖
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中压液相色谱快速分离纯化Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶 被引量:4
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作者 刘建福 李素芬 +2 位作者 陈占洲 陈庆森 王璋 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期116-119,共4页
应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺,系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶。K.fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K.fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA e... 应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺,系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶。K.fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K.fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA explorer 100中压液相色谱的HiprepR16/10 Source 30Q强阴离子交换柱和Hioad26/60 Superdex凝胶过滤色谱连续两步纯化,酶的回收率为27%,纯化倍数为42。纯化的K.fragilis β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上,呈现一条染色谱带,表明纯化的酶具有较高的纯度。K.fragilisLFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60000。 展开更多
关键词 中压液相色谱 脆壁克鲁维酵母 Β-D-半乳糖苷酶 分离纯化
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脉冲磁场对Kluyveromyces fragilis生长及菊糖酶合成的影响 被引量:2
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作者 林影 郭勇 宗敏华 《华南理工大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2000年第2期93-98,共6页
研究了脉冲电磁场对Kluyveromycesfragilis细胞生长和菊糖酶生物合成的影响.结果发现:94Hz,14mT,脉宽为1300μs,间歇时间为8700μs,上升和下降时间为200μs的矩形脉冲磁场的作用使菊糖酶活力提高了23%.这种脉冲电磁场对酶的诱导合成作... 研究了脉冲电磁场对Kluyveromycesfragilis细胞生长和菊糖酶生物合成的影响.结果发现:94Hz,14mT,脉宽为1300μs,间歇时间为8700μs,上升和下降时间为200μs的矩形脉冲磁场的作用使菊糖酶活力提高了23%.这种脉冲电磁场对酶的诱导合成作用使菊糖酶的合成总量是对照样的136%.同时发现这种作用使对应菊糖酶mRNA合成量增大,而且菊糖酶mRNA合成量增大与菊糖酶生成量的增加相关.可以认为脉冲电磁场促进了Kluyveromycesfragilis菊糖酶基因的转录与表达. 展开更多
关键词 菊糖酶 脉冲磁场 脆壁克鲁维氏酵母 合成
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Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖 被引量:2
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作者 李素芬 刘建福 陈占洲 《食品科技》 CAS 北大核心 2007年第7期174-177,共4页
低聚半乳糖具有促进肠道有益菌增殖、抗龋齿、低能量等特定的生理功能。研究了酶反应条件对脆壁克鲁维酵母(kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响。以乳糖为底物,k.fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半... 低聚半乳糖具有促进肠道有益菌增殖、抗龋齿、低能量等特定的生理功能。研究了酶反应条件对脆壁克鲁维酵母(kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响。以乳糖为底物,k.fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为40℃,最适pH值为7.0,反应20h低聚半乳糖的产率达到最大。底物初始浓度影响k.fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的产率,乳糖起始浓度由110mg/mL增加到660mg/mL,低聚半乳糖的含量从43mg/mL增加到207mg/mL。 展开更多
关键词 kluyveromyces fragilis B—D一半乳糖苷酶 酶法合成 低聚半乳糖
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Cloning and expression of Kluyveromyces fragilis LAC4 gene 被引量:1
6
作者 霍克克 李育阳 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第11期1332-1340,共9页
The genomic library of Kluyveromyces fragilis was constructed in E.coli TG1,and 5β-galactosidase gene(LAC4)clones have been obtained from the library by complementation of theKluyveromyces lactis lac4-8 mutation.The ... The genomic library of Kluyveromyces fragilis was constructed in E.coli TG1,and 5β-galactosidase gene(LAC4)clones have been obtained from the library by complementation of theKluyveromyces lactis lac4-8 mutation.The studies on the structure and the function of the LAC4 gene revealedthat(i)the gene can also complement E.coli lacZ mutation;(ii)the physical map of the K.fragilis LAC4gene was very similar to that of K.lactis;(iii)the β-galactosidase levels expressed by the clone strains weremuch higher than that expressed by the original strain;(iv)the variation of the β-galactosidase level of differ-ent clone strains induced by lactose or galactose was related to the retained degree of the 5’ flanking region ofLAC4 gene,suggesting that there migth he a lactose specific transcription activating element in the region. 展开更多
关键词 kluyveromyces fragilis GENOMIC LIBRARY Β-GALACTOSIDASE GENE CLONING expression
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微超声波对脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶生产的作用 被引量:20
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作者 林影 高大维 +1 位作者 梁宏 李国基 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第10期110-113,共4页
微超声波在脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶发酵生产中的应用研究表明:在20kHz,10W的微超声波作用下,脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶产量提高1倍以上。发酵条件中最适产酶pH为6.5~7.0,最适温度为32℃,通过显微镜观察及核酸测... 微超声波在脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶发酵生产中的应用研究表明:在20kHz,10W的微超声波作用下,脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶产量提高1倍以上。发酵条件中最适产酶pH为6.5~7.0,最适温度为32℃,通过显微镜观察及核酸测定结果证明:这种微超声波的作用不足以使细胞产生破碎。 展开更多
关键词 超声波 脆壁克鲁维氏酵母 菊糖酶 发酵
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脆壁克鲁维酵母乳糖酶提取物性质研究 被引量:14
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作者 谭树华 Hadeel Amalek A Majid +1 位作者 高向东 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第3期153-156,共4页
研究了脆壁克鲁维酵母菌乳糖酶的性质 ,该酶作用最适 pH在 6 5~ 7 0 ,最适温度为 37℃ ,5 0℃保温 15min残留酶活为 84 0 2 % ,该酶在 pH 5 8~ 7 3范围内比较稳定 ,以ONPG和乳糖为底物的米氏常数为1 16mmol/L和 5 6 3mmol/L ,Mn2 +... 研究了脆壁克鲁维酵母菌乳糖酶的性质 ,该酶作用最适 pH在 6 5~ 7 0 ,最适温度为 37℃ ,5 0℃保温 15min残留酶活为 84 0 2 % ,该酶在 pH 5 8~ 7 3范围内比较稳定 ,以ONPG和乳糖为底物的米氏常数为1 16mmol/L和 5 6 3mmol/L ,Mn2 + ,Mg2 + ,Na+ ,K+ 及微量Ca2 + 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母 乳糖酶 提取物
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菊糖酶发酵生产条件的研究 被引量:6
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作者 林影 郭勇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期19-21,共3页
脆壁克鲁维氏酵母(Kluyveromycesfragilis)在pH5.5的适当培养基中,28℃摇瓶培养30h后,进行分批发酵。结果表明:发酵初始pH为6.0~6.5,菊糖浓度为2%,接种量4%,控制前期发酵温度为28℃,33h后发酵温度为32~34℃。发酵周期为... 脆壁克鲁维氏酵母(Kluyveromycesfragilis)在pH5.5的适当培养基中,28℃摇瓶培养30h后,进行分批发酵。结果表明:发酵初始pH为6.0~6.5,菊糖浓度为2%,接种量4%,控制前期发酵温度为28℃,33h后发酵温度为32~34℃。发酵周期为70h左右,最高产酶达240u/ml。在5L自控发酵罐中,产酶达到同样水平,发酵周期缩短约10h。 展开更多
关键词 菊糖酶 酵母 发酵 生产
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脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立
10
作者 李杰 曹宇婷 +4 位作者 徐欣 张旭 李璐 吕洋 卢松冲 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期53-58,共6页
以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结... 以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV.cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子.μgDNA。在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显著影响。经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术。 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母 电击转化 限制内切酶介导 同源重组 基因置换
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脆壁克鲁维酵母蛋白二硫化物异构酶KfPDI的结构分析
11
作者 赵翔 包卫国 +2 位作者 霍克克 李育阳 FukuharaH 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第8期39-43,共5页
利用DNA限制性内切酶图谱分析将一个带有脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis) 蛋白二硫化物异构酶基因(KfPDI) 的10 kb 初始克隆缩短为4 kb 的亚克隆,并测定了该基因的DNA全序列。经... 利用DNA限制性内切酶图谱分析将一个带有脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis) 蛋白二硫化物异构酶基因(KfPDI) 的10 kb 初始克隆缩短为4 kb 的亚克隆,并测定了该基因的DNA全序列。经分析发现: (1)该基因编码产物由520个氨基酸残基组成。(2) 它与乳酸克鲁维酵母(K. lactis) 蛋白二硫化物异构酶在氨基酸序列上的同源性为78。(3) 它与其他物种的PDI基因在核苷酸和蛋白质水平上的同源性较弱, 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母 PDI KfPDI 序列分析
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以洋姜为原料生产单细胞蛋白的研究
12
作者 顾天成 吕跃钢 《北京轻工业学院学报》 1997年第2期32-35,共4页
对以克鲁维酵母为生产菌,以洋姜为原料生产单细胞蛋白进行了研究,主要包括总糖度、pH值、温度、氮源对蛋白质产量的影响.并对其中某些因素的影响从理论上进行了探讨.
关键词 克鲁维酵母 洋姜 单细胞蛋白 蛋白质 产量
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人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌 被引量:1
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作者 姚笑迪 霍克克 +2 位作者 方季 戈万忠 李育阳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期26-29,共4页
通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒... 通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)的分泌信号序列(Kss)融合,并置于脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下,构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒,得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株,ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200 ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。 展开更多
关键词 凝血因子 脆壁克鲁维酵母 血友病 分泌信号序列 乳酸克鲁维酵母 基因调控型启动子 基因表达盒 IX蛋白
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酵母乳糖酶产生菌的筛选和菌株鉴定 被引量:2
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作者 郭杰炎 周士惠 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期423-430,共8页
从乳制品中分离到两株高产乳糖酶的酵母菌株(Y_(0-1)和Y_(12-1))。经细胞形态、培养特征及子囊孢子的观察和它们对硝酸盐、碳素化合物的同化作用、对各种糖的发酵测定,确定Y_(0-1)。菌株为脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis),Y_(12... 从乳制品中分离到两株高产乳糖酶的酵母菌株(Y_(0-1)和Y_(12-1))。经细胞形态、培养特征及子囊孢子的观察和它们对硝酸盐、碳素化合物的同化作用、对各种糖的发酵测定,确定Y_(0-1)。菌株为脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis),Y_(12-1)菌株为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)。 展开更多
关键词 乳糠酶 酵母 产生菌 筛选 鉴定
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