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运用Mask Pro和Knock Out进行指纹等痕迹物证图像处理的尝试
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作者 王德江 李福臻 《吉林公安高等专科学校学报》 2002年第4期37-40,共4页
如何滤除复杂背景,以获取清晰的痕迹物证图像,除应用计算机进行图像处理外,还应借用Photo shop作为平台,尝试运用Mask Pro和Knock Out两款特效插件对指纹图像进行处理,效果会更加理想。
关键词 knock 0ut软什 MASK Pro软什 图像处理 计算机应用 指纹 痕迹学
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Effects of SIRT1 Gene Knock-Out via Activation of SREBP2 Protein-Mediated PI3K/AKT Signaling on Osteoarthritis in Mice 被引量:7
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作者 于斐 曾晖 +4 位作者 雷鸣 肖德明 李伟 袁昊 林健静 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2016年第5期683-690,共8页
This study investigated the effects of SIRT1 gene knock-out on osteoarthritis in mice, and the possible roles of SREBP2 protein and the PI3K/AKT signaling pathway in the effects. Mice were randomly divided into a norm... This study investigated the effects of SIRT1 gene knock-out on osteoarthritis in mice, and the possible roles of SREBP2 protein and the PI3K/AKT signaling pathway in the effects. Mice were randomly divided into a normal group and a SIRT1 gene knock-out group(6 mice in each group). In these groups, one side of the knee anterior cruciate ligament was traversed, and the ipsilateral medial meniscus was cut to establish an osteoarthritis model of knee joint. The countralateral synovial bursa was cut out, serving as controls. The knee joint specimens were then divided into four groups: SIRT1^(+/+) control group(group A, n=6); SIRT1^(+/+) osteoarthritis group(group B, n=6); SIRT1^(–/–) control group(group C, n=6); SIRT1^(–/–) osteoarthritis group(group D, n=6). HE staining, Masson staining, Safranin O-Fast Green staining and Van Gieson staining were used to observe the morphological changes in the articular cartilage of the knee. Immunohistochemical staining was employed to detect the expression of SIRT1, SREBP2, VEGF, AKT, HMGCR and type Ⅱ collagen proteins. SA-β-gal staining was utilized to evaluate chondrocyte aging. The results showed clear knee joint cartilage destruction and degeneration in the SIRT1^(–/–) osteoarthritis group. The tidal line was twisted and displaced anteriorly. Type Ⅱ collagen was destroyed and distributed unevenly. Compared with the SIRT1^(+/+) osteoarthritis group and SIRT1^(–/–) control group, SIRT1 protein expression was not obviously changed in the SIRT1^(–/–) osteoarthritis group(P〉0.05), while the expression levels of the SREBP2, VEGF and HMGCR proteins were significantly increased(P〈0.05) and the levels of AKT and type Ⅱ collagen proteins were significantly decreased(P〈0.05). SIRT1 gene knock-out may aggravate cartilage degeneration in osteoarthritis by activating the SREBP2 protein-mediated PI3K/AKT signalling pathway, suggesting that SIRT1 gene may play a protective role against osteoarthritis. 展开更多
关键词 cartilage knock articular degeneration cruciate medial collagen ligament staining aggravate
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Improved Learning and Memory of Pavlovian Context Fear Conditioning in Histidine Decarboxylase Knock- Out Mice
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作者 Liu Luying Shen Dongxia Jin Chunlei Zhuge Zhengbing Gong Yingxia Zhu Yuanyuan Chen Zhong 《中国药理通讯》 2005年第4期30-31,共2页
关键词 巴甫洛夫学说 学习功能 记忆能力 组氨酸脱羧酶 小鼠 动物实验
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Test Research on the Knock of a Common-Rail Diesel Engine Fueled with Diesel-Methanol Dual-Fuel
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作者 Chao Zhu Zhuopei Liu +1 位作者 Hao Chen Yangyang Li 《Energy Engineering》 EI 2023年第5期1081-1105,共25页
Experiments were conducted on a diesel-methanol dual-fuel(DMDF)engine modified by a six-cylinder,turbocharged,inter-cooled diesel engine.According to the number of diesel injection,the experiments are divided to two p... Experiments were conducted on a diesel-methanol dual-fuel(DMDF)engine modified by a six-cylinder,turbocharged,inter-cooled diesel engine.According to the number of diesel injection,the experiments are divided to two parts:the single injectionmode and double injectionmode.The results show that,at the double injectionmode,themaximumof pressure rise rate is small and the engine runs smoothly,however,knock still occurswhen the cocombustion ratio(CCR)is big enough.Under knock status,the power density of the block vibration concentrating at some special frequencies rises dramatically,and the special frequency of single injection mode(about 4.1 kHz)is lower than that of double injection mode(7–9 kHz).The cylinder pressure oscillations of knock status are very different fromthe non-knock status.Under knock status,cylinder pressure oscillations become more concentrated and fiercer at some special frequencies,and the same as the block vibration.The special frequency of single injection mode(3–6 kHz)is lower than that of double injection mode(above 9 kHz). 展开更多
关键词 Common rail diesel engine diesel-methanol dual-fuel knock block vibration pressure oscillation
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论海上拖航合同中的Knock for Knock条款
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作者 刘姝彤 唐青玉 《珠江水运》 2023年第12期33-35,共3页
海上拖航合同中的Knock For Knock条款的效力在实践中一直存在争议。本文通过分析《海商法》第162条,结合Knock For Knock条款的性质进行讨论,得出结论《海商法》第162条可以作为订立Knock For Knock条款的依据,但是不能作为该条款在任... 海上拖航合同中的Knock For Knock条款的效力在实践中一直存在争议。本文通过分析《海商法》第162条,结合Knock For Knock条款的性质进行讨论,得出结论《海商法》第162条可以作为订立Knock For Knock条款的依据,但是不能作为该条款在任何情形下均有效的依据。并且通过对Knock For Knock条款效力的进一步探讨,可知海上拖航中的承拖方不得以该条款对抗被拖方提出的由于承拖方的故意或重大过失行为造成其损失的赔偿请求。除此之外,本文将借鉴国外判例,结合我国国情,提出减少Knock For Knock条款实践纠纷的建议。 展开更多
关键词 海上拖航合同 knock For knock条款 适拖义务
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基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究
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作者 李雪银 吴传新 +3 位作者 刘慧玲 李丽 程莎 孙航 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期87-95,共9页
目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成... 目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株。T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果。CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能。结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高。经PCR产物测序和Western blot验证获得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能。结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 吲哚胺-2 3-双加氧酶1 基因敲除 THP-1细胞 巨噬细胞
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CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
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作者 万苗苗 阳倩 +5 位作者 陈吉璐 陈丹丹 毛林 班谦 陈胜 惠文巧 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,... 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除
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射血分数保留的心力衰竭小鼠端粒缩短的研究
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作者 黄舒影 陈骁楠 +1 位作者 张俊峰 张绘莉 《国际心血管病杂志》 2024年第4期231-236,共6页
目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高... 目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高脂饲料和含0.5 g/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的饮水,造模16周。造模开始后每2周检测小鼠左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期和晚期血流速度峰值的比值(E/A)、舒张早期二尖瓣口血流速度峰值和二尖瓣环运动速度峰值的比值(E/e')、左室整体纵向应变(GLS)、舒张末期左室前壁厚度(LVAWd)和舒张末期左室后壁厚度(LVPWd),评估左室收缩与舒张功能及心室重构情况。造模16周后,评估小鼠收缩期血压(SBP)、舒张期血压(DBP)和血脂水平。结果:高脂饮食和L-NAME饮水诱导造模的16周期间,各组LVEF差异无统计学意义,HFpEF组野生型小鼠在第8周出现了E/e'、E/A、LVAWd和LVPWd上升及GLS的下降(P<0.05),提示舒张功能降低和左室肥厚,即出现HFpEF表型。HFpEF组mTRG2小鼠、mTRG3小鼠分别在第6周和第4周出现了HFpEF表型。造模16周后,HFpEF组各基因型小鼠的血脂、收缩压、舒张压均较对照组同基因型小鼠明显升高(P<0.05)。结论:端粒缩短可以促进由高脂饮食和L-NAME饮水联合诱导的小鼠HFpEF早期发生和形成。 展开更多
关键词 射血分数保留的心力衰竭 端粒缩短 基因敲除
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小白链霉菌中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建与优化
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作者 开朗 杨昊 +1 位作者 朱道君 陈旭升 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-17,共8页
小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为... 小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此,该文以S.albulus GS114为研究对象,以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因,构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统,成功敲除了pls,编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量,对S.albulus GS114结合转移条件进行了系统优化,获得的最优结合转移条件为:供受体比例1∶1,镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min,培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下,结合转移效率达到2.5×10^(-8),较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S.albulus的代谢工程改造提供了重要工具,另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。 展开更多
关键词 放线菌 小白链霉菌 CRISPR-Cas9系统 基因敲除
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基于“敲除策略”筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分
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作者 罗鑫 郑吴殷晓 +6 位作者 詹健婷 杨敬宇 马浩然 干国平 尤朋涛 叶晓川 刘丹 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第9期1387-1392,共6页
目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃... 目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃炎模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8和IL-1β水平。结果总黄酮组分、不含二苯基庚烷的阴性组分、不含5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基)苯基-1-苯基-3-庚酮(DHPA)的阴性组分以及高良姜素(给药浓度8μg·mL^(-1)作用24 h),均能够显著降低幽门螺杆菌胃炎细胞上清液中IL-6水平;总黄酮组分浓度为16μg·mL^(-1)时可显著抑制幽门螺杆菌感染GES-1胃炎细胞IL-6、TNF-α、IL-8和IL-1β的释放。结论总黄酮组分是高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎的主要活性组分,该研究结果为进一步阐释高良姜抗幽门螺杆菌胃炎药效物质基础奠定了基础。 展开更多
关键词 高良姜 幽门螺杆菌胃炎 敲除 活性组分 活性成分
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The Effect of Ignition Parameters on the Combustion Characteristics of an Aviation Piston Engine
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作者 Luda Zhu Wenming Cheng +1 位作者 Eryang Liu Shupeng Wang 《World Journal of Engineering and Technology》 2024年第2期245-257,共13页
A cylinder combustion simulation model was established for a two-stroke aviation piston engine used in a small unmanned aerial vehicle. The influence of different ignition system parameters on the combustion process o... A cylinder combustion simulation model was established for a two-stroke aviation piston engine used in a small unmanned aerial vehicle. The influence of different ignition system parameters on the combustion process of aviation kerosene was studied using this model. The research results showed that under the working conditions of 5500 r/min and 50% throttle opening, as the ignition energy increased, the peak values of average cylinder pressure and average temperature increased, and the combustion duration shortened, The advance of the combustion center of gravity increases the tendency of the engine to knock. Under the same operating conditions, as the ignition timing advances, the peak values of average pressure and average temperature in the cylinder increase, gradually approaching the top dead center, and the tendency of engine detonation increases more significantly. 展开更多
关键词 Aircraft Piston Engines Aviation Kerosene IGNITION Combustion Characteristics knock
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Simulation Research on the Effect of Cooled EGR, Supercharging and Compression Ratio on Downsized SI Engine Knock 被引量:1
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作者 SHU Gequn PAN Jiaying +1 位作者 WEI Haiqiao SHI Ning 《Chinese Journal of Mechanical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2013年第2期341-350,共10页
Knock in spark-ignition(SI) engines severely limits engine performance and thermal efficiency. The researches on knock of downsized SI engine have mainly focused on structural design, performance optimization and ad... Knock in spark-ignition(SI) engines severely limits engine performance and thermal efficiency. The researches on knock of downsized SI engine have mainly focused on structural design, performance optimization and advanced combustion modes, however there is little for simulation study on the effect of cooled exhaust gas recirculation(EGR) combined with downsizing technologies on SI engine performance. On the basis of mean pressure and oscillating pressure during combustion process, the effect of different levels of cooled EGR ratio, supercharging and compression ratio on engine dynamic and knock characteristic is researched with three- dimensional KIVA-3V program coupled with pressure wave equation. The cylinder pressure, combustion temperature, ignition delay timing, combustion duration, maximum mean pressure, and maximum oscillating pressure at different initial conditions are discussed and analyzed to investigate potential approaches to inhibiting engine knock while improving power output. The calculation results of the effect of just cooled EGR on knock characteristic show that appropriate levels of cooled EGR ratio can effectively suppress cylinder high-frequency pressure oscillations without obvious decrease in mean pressure. Analysis of the synergistic effect of cooled EGR, supercharging and compression ratio on knock characteristic indicates that under the condition of high supercharging and compression ratio, several times more cooled EGR ratio than that under the original condition is necessarily utilized to suppress knock occurrence effectively. The proposed method of synergistic effect of cooled EGR and downsizing technologies on knock characteristic, analyzed from the aspects of mean pressure and oscillating pressure, is an effective way to study downsized SI engine knock and provides knock inhibition approaches in practical engineering. 展开更多
关键词 exhaust gas recirculation compression ratio knock pressure wave equation pressure oscillation
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Theoretical Analysis of Noise of Piston Knocking Cylinder Wall in Automotive Engines 被引量:1
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作者 肖云魁 李世义 +2 位作者 曹亚娟 杨万成 冯汉生 《Journal of Beijing Institute of Technology》 EI CAS 2005年第3期284-288,共5页
Based on the loading conditions of engine, applying difference method to solve the hydrodynamic lubrication equation of piston skirt movement, the force acting on piston skirt and the moment on wrist pin were obtained... Based on the loading conditions of engine, applying difference method to solve the hydrodynamic lubrication equation of piston skirt movement, the force acting on piston skirt and the moment on wrist pin were obtained. A computer program for simulating the piston second order motion was conducted to calculate the lateral motion of the upper part and the bottom part of piston skirts of the engine of automotive model CA1091. From the simulated result, the maximal impacting phase and the maximal impacting region of the piston were obtained. The result can be used for designing engine, diagnosing the noise of piston knocking cylinder wall and explaining many practical fault phenomena in theory. 展开更多
关键词 piston knocking cylinder wall second order motion fault diagnosis
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Knock prediction for dual fuel engines by using a simplified combustion model
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作者 费少梅 刘震涛 严兆大 《Journal of Zhejiang University Science》 EI CSCD 2003年第5期591-594,共4页
The present work used a methane-air mixture chemical kinetics scheme consisting of 119 elementary reaction steps and 41 chemical species to develop a simplified combustion model for prediction of the knock in dual fue... The present work used a methane-air mixture chemical kinetics scheme consisting of 119 elementary reaction steps and 41 chemical species to develop a simplified combustion model for prediction of the knock in dual fuel engines. Calculated values by the model for natural gas operation showed good agreement with corresponding experimental values over a broad range of operating conditions. 展开更多
关键词 Dual fuel engines Combustion model knock prediction
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Estimation of Knock Wheel Noise of Rail Transport with an Acoustic Intensity Method
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作者 Kolykhalin Vitaly 《Journal of Mechanics Engineering and Automation》 2012年第8期465-469,共5页
The application of railway wheel noise compensation method is considered. The effect can be obtained by shift a pair of usual parallel rail joints on a pair of offset rail joints, for example, the right rail joint is ... The application of railway wheel noise compensation method is considered. The effect can be obtained by shift a pair of usual parallel rail joints on a pair of offset rail joints, for example, the right rail joint is shifted concerning the left rail joint on the certain distance. The distance is depend on the speed of train and promotes the correlation interconnection between excited acoustical pulses. The intensity wheel knock spectrograms corresponding of different distance between rail joints registered by the microphone are estimated. The spectrograms considerably differed from each other in low frequency band are analyzed. The result of practical using the acoustic noise compensation method is proved. 展开更多
关键词 Control noise ACOUSTIC RAILWAY MICROPHONE wheel knock.
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目标成分敲出/敲入技术及其在食品功能领域的应用进展
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作者 王怡雯 苏安祥 +4 位作者 雍韵琪 姚丽 马宁 杨文建 胡秋辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第7期123-130,共8页
食品具有多种生物活性成分,并且有些成分间具有协同或拮抗作用,挖掘和发现有效活性成分是研究其健康功能的关键。目标成分敲出/敲入技术通过对比目标成分敲出/敲入前后食品功能的变化,从而可以高效研究目标成分对食品功能的贡献。中药... 食品具有多种生物活性成分,并且有些成分间具有协同或拮抗作用,挖掘和发现有效活性成分是研究其健康功能的关键。目标成分敲出/敲入技术通过对比目标成分敲出/敲入前后食品功能的变化,从而可以高效研究目标成分对食品功能的贡献。中药研究中常将两种及以上活性成分有机组合,可以发挥更好的功能效果,因此目标成分敲出/敲入技术在中药研究中应用较多,而在食品领域应用较少。随着化合物分离技术的不断成熟,已有食品中活性成分的研究应用了该项技术的思路,但该技术在食品领域并未得到系统的应用。本文概述了目标成分敲出/敲入技术发展、分析流程及在食品功能领域的应用进展,以期为目标成分敲出/敲入技术在食品功能研究领域的应用提供参考。 展开更多
关键词 功能食品 活性成分 成分敲出 成分敲入
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青枯雷尔氏菌温度相关致病基因yqhE功能研究
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作者 周大祥 杨俊年 +2 位作者 陈弘 殷幼平 熊书 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期141-148,共8页
不同温度下青枯雷尔氏菌表达谱PPI网络分析发现,yqhE可能是青枯雷尔氏菌新的温度相关致病基因。克隆青枯雷尔氏菌CBM613的yqh E基因,结果发现该基因长度为831 bp,共编码276个氨基酸。基因敲除结果显示,28℃培养的yqhE突变株较野生型菌... 不同温度下青枯雷尔氏菌表达谱PPI网络分析发现,yqhE可能是青枯雷尔氏菌新的温度相关致病基因。克隆青枯雷尔氏菌CBM613的yqh E基因,结果发现该基因长度为831 bp,共编码276个氨基酸。基因敲除结果显示,28℃培养的yqhE突变株较野生型菌株致病力降低,病程延长,但并未彻底丧失致病力。20℃和28℃培养的yqh E突变株维生素C的生物合成皆被抑制;与28℃相比,20℃培养下野生型菌株维生素C的合成能力降低。突变株在20℃和28℃培养下甲基乙二醛(MG)和丙二醛(MDA)明显积累,其中20℃积累更多;20℃培养的野生型菌株MG和MDA比28℃积累更多。维生素C的生物合成被抑制导致青枯雷尔氏菌自由基清除能力减弱与氧化应激反应增强,MG和MDA积累产生细胞毒性,上述结果可能与28℃培养的突变株致病力减弱,20℃培养的野生型菌株致病力丧失有关。综上结果表明yqhE是青枯雷尔氏菌温度相关致病基因。 展开更多
关键词 青枯雷尔氏菌 温度相关致病基因 yqhE 基因敲除 功能研究
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敲除LRRK2基因的PC12细胞移植对帕金森病大鼠的疗效
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作者 刘治华 韦丽萍 +5 位作者 田慧虹 蔡慧敏 聂坤 张玉虎 王丽娟 王丽敏 《医学研究杂志》 2023年第5期83-88,共6页
目的探究经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞移植至帕金森病模型大鼠右侧纹状体的治疗效果及作用机制。方法用CRISPR/Cas9单载体慢病毒转染PC12细胞构建敲除LRRK2基因的细胞株,Western blot法检测敲除效率;颈背部皮下注... 目的探究经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞移植至帕金森病模型大鼠右侧纹状体的治疗效果及作用机制。方法用CRISPR/Cas9单载体慢病毒转染PC12细胞构建敲除LRRK2基因的细胞株,Western blot法检测敲除效率;颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型,通过立体定向注射移植敲除LRRK2基因的PC12细胞至帕金森病大鼠右侧纹状体,移植1周后采用旷场实验、爬杆实验检测对大鼠的运动功能的改变,用Western blot法、免疫组化检测纹状体区凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax以及酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化探索经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞对PD模型大鼠运动症状改善的作用机制。结果右侧纹状体PC12细胞移植治疗1周后,与帕金森病组大鼠比较,移植敲除LRRK2基因的PC12细胞的PD大鼠的旷场实验运动总路程延长、运动平均速度增大及爬杆试验评分降低(P<0.05);右侧纹状体中TH的表达量增多(P<0.05);右侧状体区中细胞凋亡的发生率降低(P<0.05),且上述指标的改善程度均高于移植正常PC12细胞的帕金森病大鼠(P<0.05)。结论经过LRRK2敲除的PC12细胞移植后对帕金森病模型大鼠的运动功能有更好的疗效,其潜在的作用机制可能是减少移植区中细胞凋亡的发生率来增强其疗效,基因修饰LRRK2的细胞移植有望成为帕金森病运动功能的治疗手段之一。 展开更多
关键词 LRRK2 基因敲除 帕金森病 细胞凋亡
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基于CRISPR/Cas9技术构建GP73基因敲除小鼠模型及表型验证
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作者 徐艺心 甄兰 +2 位作者 黄庆 莫运海 吴飞翔 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第1期107-111,共5页
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建高尔基体73(GP73)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法:利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,造成GP73基因蛋白读码框移码,使其功能缺失,针对GP73基因外显子4设计sgRNA靶位点,体外转录获... 目的:基于CRISPR/Cas9技术构建高尔基体73(GP73)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法:利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,造成GP73基因蛋白读码框移码,使其功能缺失,针对GP73基因外显子4设计sgRNA靶位点,体外转录获得sgRNA,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法获得F0代阳性敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得GP73基因敲除纯合子小鼠(GP73-/-小鼠)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肝、肾、皮下脂肪、棕色脂肪组织中GP73 mRNA表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清GP73蛋白水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,GP73-/-小鼠肝、肾、皮下脂肪、棕色脂肪组织GP73 mRNA及蛋白表达水平降低,血清GP73蛋白水平降低(均P<0.05)。结论:基于CRISPR/Cas9技术成功构建了GP73基因敲除小鼠。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 GP73 基因敲除 基因型鉴定
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miR-148a-3p调控血管生成的体内外表型鉴定
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作者 黄瑾 韩文卿 +1 位作者 李鑫 陈骁俊 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第6期525-529,540,共6页
目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基... 目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基质胶管腔形成实验、细胞迁移实验、荧光定量PCR实验等,从敲除和过表达两方面明晰miR-148a-3p对血管生成的作用。结果与同窝对照相比,miR-148a基因敲除小鼠的骨骼组织存在H型血管分布异常。离体实验得到了相似的趋势,miR-148a敲除胎鼠的跖骨具有明显更强的血管形成能力。通过miR-148a-3p mimic过表达血管内皮细胞中的miR-148a-3p表达水平,发现miR-148a-3p过表达不影响hUVECs的增殖能力,但可通过抑制其迁移能力干扰血管生成,影响伪足形成、管腔形成等过程。结论miR-148a-3p可抑制体内外血管生成,包括细胞出芽、迁移、管腔形成等生物学过程。 展开更多
关键词 miR-148a-3p 血管生成 基因敲除小鼠 表型鉴定 H型血管
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