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SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
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作者 赵仁双 朱羿龙 +10 位作者 尚超 韩继成 刘子睿 修志儒 李善智 李雅茹 杨霞 李霄 金宁一 金鑫 李一权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期19-25,共7页
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭... 目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 天坛株痘苗病毒 tk基因 同源重组
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副干酪乳杆菌TK1501后生元的制备及对幽门螺旋杆菌的抑制作用
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作者 聂金蕊 吴亚慧 +3 位作者 韩雪梅 李亚琪 王海宽 张会图 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期867-875,共9页
目的对副干酪乳杆菌(L.paracasei TK1501)发酵大豆产物中的后生元进行分离提取和体内外抑菌活性进行研究,评估该后生元在治疗幽门螺旋杆菌(Hp)感染的作用。方法L.paracasei TK1501在无氧密闭的环境内以37℃、固态发酵参数中料水比1∶1.5... 目的对副干酪乳杆菌(L.paracasei TK1501)发酵大豆产物中的后生元进行分离提取和体内外抑菌活性进行研究,评估该后生元在治疗幽门螺旋杆菌(Hp)感染的作用。方法L.paracasei TK1501在无氧密闭的环境内以37℃、固态发酵参数中料水比1∶1.5,接种量5×107 CFU/mL,培养发酵32 h后,通过大孔树脂XAD-16N吸附法、阳离子交换色谱法、高效液相色谱法分离纯化,对L.paracasei TK1501后生元进行稳定性及抗菌效果分析。将50只C57雄性小鼠随机分为空白组、模型组、阴性对照组、低剂量组(0.02 mL/只)和高剂量组(0.1 mL/只),10只/组,连续灌胃4周。取血清观察胃部炎症因子TNF-α、IL-1β表达水平变化,取小鼠胃组织进行HE染色。结果L.paracasei TK1501后生元易被蛋白酶降解,热稳定性好,对酸碱、有机溶剂等不利因素有较好的耐受性(P<0.05);在体外试验中,对金黄色葡萄球菌、Hp等均有较好的杀灭作用;在动物实验中,与模型组相比,L.paracasei TK1501后生元高剂量组明显改善Hp感染(P<0.05),胃部炎症因子TNF-α、IL-1β表达水平变化明显下降(P<0.05)。结论L.paracasei TK1501后生元对Hp、金黄色葡萄球菌等具有较好的抑制和杀灭效果,而在相同条件下对肠道中的正常菌群则无明显影响。 展开更多
关键词 副干酪乳杆菌tk1501 分离 抗幽门螺旋杆菌
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黑水城出土文献TK187“16-3右与16-5左”考释
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作者 张佳丽 穆胜 惠宏 《中国医药导报》 CAS 2024年第11期104-108,共5页
沈澍农先生等对编号TK187的俄藏黑水城文献缀接研究发现:16-3右与16-5左两部分文字存在缀接关系并认为其大约是1个药酒方。经分析,本文判断TK18716-3右与16-5左缀接后的内容应是两首方,前者①~⑨的内容为药酒方;后者为养生食疗方。通过... 沈澍农先生等对编号TK187的俄藏黑水城文献缀接研究发现:16-3右与16-5左两部分文字存在缀接关系并认为其大约是1个药酒方。经分析,本文判断TK18716-3右与16-5左缀接后的内容应是两首方,前者①~⑨的内容为药酒方;后者为养生食疗方。通过对养生食疗方中所用药物等的详细考证,发现文献中杏仁、川椒、马芹子、茴香、白芷、川芎均属于药食同源之品,几种同用具有预防外感并调理中焦的养生作用,制作时采用在瓮中油浸并密封日晒发酵的方法,极为符合日常制作酱类或腌菜类调味用品的特点。按照两方所制的成品为一酒一酱,既有防病保健之效,又可日常食用。两方同处于TK187文献养生分组之中,都反映了西夏人对健康长寿的追求。 展开更多
关键词 黑水城 tk187 马芹子 食疗
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TK50/AP复合物三维纳米网格结构的构筑及其性能研究
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作者 李岚 龙亭宇 +2 位作者 游婷 冯晓军 段晓惠 《化学研究与应用》 CAS 北大核心 2024年第4期704-712,共9页
为了改善1,1’-二羟基-5,5’-联四唑二羟胺盐(TK50)的释能特性,采用冰模板法构筑了TK50/高氯酸铵(AP)(TK50/AP)复合物三维纳米网格结构。通过场发射扫描电子显微镜、X射线粉末衍射、差示扫描量热仪、比表面积和孔径分析仪、热-红联用仪... 为了改善1,1’-二羟基-5,5’-联四唑二羟胺盐(TK50)的释能特性,采用冰模板法构筑了TK50/高氯酸铵(AP)(TK50/AP)复合物三维纳米网格结构。通过场发射扫描电子显微镜、X射线粉末衍射、差示扫描量热仪、比表面积和孔径分析仪、热-红联用仪及激光点火装置对其形貌、微结构、热分解和燃烧性能进行了研究。结果表明,TK50/AP复合物的三维纳米网格结构包含大量的中孔(2~6 nm),比表面积和孔体积分别为7.059m^(2)·g^(-1)和0.09 cm^(3)·g^(-1)。XRD衍射峰强度大大降低,由Scherrer公式计算的平均晶粒度为83.80 nm。DSC曲线有2个放热峰,位于228.1℃处尖锐的强放热峰,其峰温较原料TK50提前12℃,活化能增加144.86 kJ·mol^(-1);位于325.6℃处弱的宽峰,其峰温较原料AP提前105.6℃,活化能增加24.21 kJ·mol^(-1)。热-红联用测试结果表明复合物的热分解速率更快、能量释放更完全。TK50/AP复合物表现出高效稳定的激光点火燃烧(LIC)性能,点火延迟时间从原料TK50的50 ms、混合物的60 ms降低到20 ms,激光点火阈值从原料TK50的25.12 mJ、混合物的12.56 mJ降低到6.28 mJ。复合物的纳米尺寸效应和多孔网格结构优异的传热传质特性是其热分解和LIC性能显著改善的主要原因。 展开更多
关键词 tk50 AP 冰模板 三维纳米网格 热分解 激光点火燃烧
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LDCT+外周血TK1对肺结节定性价值及诊断模型的构建与检验
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作者 王琦 李煜 《中国CT和MRI杂志》 2024年第4期41-44,共4页
目的探讨低剂量CT(LDCT)+外周血胸苷激酶1(TK1)对肺结节的定性价值,构建恶性肺结节诊断模型,并对其进行检验。方法选取2020年2月~2023年1月我院收治的244例肺结节患者,均行肺部LDCT和常规剂量CT扫描,比较LDCT与常规剂量CT图像质量、辐... 目的探讨低剂量CT(LDCT)+外周血胸苷激酶1(TK1)对肺结节的定性价值,构建恶性肺结节诊断模型,并对其进行检验。方法选取2020年2月~2023年1月我院收治的244例肺结节患者,均行肺部LDCT和常规剂量CT扫描,比较LDCT与常规剂量CT图像质量、辐射剂量、影像学特征。按照病理诊断结果分为恶性组(n=105)、良性组(n=139),比较两组LDCT检查结果、外周血TK1,Logistic回归分析恶性肺结节的影响因素,采用R语言构建列线图诊断模型,并给予评价与验证。结果LDCT膈顶上缘层面、支气管分叉层面、主动脉弓上缘层面图像噪声值高于常规剂量CT,辐射剂量ED、DLP、CTDIvol低于常规剂量CT(P<0.05);恶性组胸膜凹陷征、支气管征、血管征、分叶征、毛刺征、形态不规则患者占比高于良性组,外周血TK1水平高于良性组(P<0.05);Logistic回归分析显示,胸膜凹陷征、支气管征、血管征、分叶征、毛刺征、形态不规则、TK1与恶性肺结节相关(P<0.05);用R语言绘制恶性肺结节的诊断模型,C-index为0.907,ROC分析显示,所构建的诊断模型高于任一单独变量,提示该诊断模型具有良好的预测能力;校准曲线分析显示,所构建的诊断模型与实际观测结果有较好的一致性。结论肺结节局部LDCT特征(胸膜凹陷征、支气管征、血管征、分叶征、毛刺征、形态不规则)、TK1与恶性肺结节密切相关,基于以上因素构建恶性肺结节的诊断模型具有良好的预测效能和可信度,可为临床筛查恶性肺结节提供参考。 展开更多
关键词 LDCT 外周血 tk1 肺结节 诊断模型
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TKS10型电梯故障的振动诊断 被引量:3
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作者 罗孟杰 孙仁佳 +1 位作者 胡家炘 岳从风 《沈阳工业大学学报》 EI CAS 1989年第2期39-46,共8页
本文通过对TKS10型电梯故障的振动诊断,提出了减小乘人电梯的振动和噪声的措施及提高其质量和舒适性的合理化建议。
关键词 电梯故障 tks10型 振动诊断
全文增补中
TKS4和TKS5在肿瘤中的研究进展 被引量:1
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作者 李青峰 奎翔 +2 位作者 易晓佳 王小芳 王燕 《生物技术通讯》 CAS 2020年第6期763-768,共6页
TKS4和TKS5是酪氨酸激酶底物(TKS)蛋白家族中的经典亚型,两者的结构和功能十分相似,是重要的生理调节因子,也是机体功能正常发育不可或缺的因子之一。同时,在肿瘤的发生及进展中起着重要的调控作用,可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移... TKS4和TKS5是酪氨酸激酶底物(TKS)蛋白家族中的经典亚型,两者的结构和功能十分相似,是重要的生理调节因子,也是机体功能正常发育不可或缺的因子之一。同时,在肿瘤的发生及进展中起着重要的调控作用,可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。TKS4和TKS5可能是潜在的生物学标志,对于靶点治疗研究具有重要意义。 展开更多
关键词 酪氨酸激酶底物(tks) tks4 tks5 生物学标志 肿瘤
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基于TKS累积的农机化技术创新研究
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作者 段贵恒 《中国农机化》 2007年第1期60-63,共4页
根据国内农机化产业现状,运用技术知识存量(TKS)累积的方法,分析农机化技术创新过程和影响因子,构建基于TKS累积之上的农机化技术创新的一体化轮状模型,并结合已有方法进行度量,提出农机化创新的政府对策。
关键词 技术创新 tks累积 一体化轮状模型
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伪狂犬病病毒TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪毒力稳定性检测
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作者 姜辰龙 马梓承 +4 位作者 吕林 刘星 白娟 孙杨杨 姜平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期51-56,共6页
旨在明确伪狂犬病病毒(PRV)TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪的安全性。试验选择21~28日龄PRV阴性健康仔猪,通过病毒接种感染试验,观察ZJ01R在仔猪体内的分布规律及不同代次病毒对仔猪致病性。试验结果显示,仔猪肌肉注射ZJ01R后无明显临... 旨在明确伪狂犬病病毒(PRV)TK/gE/gI基因缺失株ZJ01R对仔猪的安全性。试验选择21~28日龄PRV阴性健康仔猪,通过病毒接种感染试验,观察ZJ01R在仔猪体内的分布规律及不同代次病毒对仔猪致病性。试验结果显示,仔猪肌肉注射ZJ01R后无明显临床症状,鼻腔排毒3~6 d,免疫后7、14、21 d,猪脑组织检测到PRV,其他组织均无病毒。仔猪滴鼻和肌肉注射F5、F30和F35代次ZJ01R病毒液,体温正常,无明显临床症状和病理变化,无病毒血症,鼻腔排毒时间仅为6 d;仔猪接种后7和14 d,肝脏和肺脏组织病毒检测均阴性,脑组织病毒核酸阳性;感染仔猪血清PRV gB ELISA抗体阳性,gE ELISA抗体阴性,表明ZJ01R毒株35代内对仔猪无临床致病作用,病毒毒力稳定性较好。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 tk/gE/gI基因缺失 毒力稳定性
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TK1在肺癌中的诊断价值的Meta分析
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作者 胡婵 李京城 +2 位作者 刘玲 彭倩 桑圣刚 《海南医学院学报》 CAS 2023年第11期850-859,共10页
目的:通过文献回顾和Meta分析,探究胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)在肺癌诊断中的价值。方法:首先检索Pubmed、Embase、Cochrane、Web of Science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网、万方等数据库,并获取截止日期在2022年06... 目的:通过文献回顾和Meta分析,探究胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)在肺癌诊断中的价值。方法:首先检索Pubmed、Embase、Cochrane、Web of Science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网、万方等数据库,并获取截止日期在2022年06月之前的文献。由两名研究者单独筛选报道TK1在肺癌诊疗中的相关临床研究,并获取文献全文。其次,通过使用Revman5.3软件对文献进行系统质量评价和偏倚风险评估,并对各协变量之间的一致性进行评价。最后,通过使用Stata16.0软件将灵敏度(sensitivity,Sen)、特异度(specificity,Spe)等指标进行汇总分析。结果:本研究共纳入37篇文献,其中包含3218例肺癌病例和2976例对照病例,在此基础上进行Meta分析,结果显示,TK1单独作为肺癌诊断指标时,Sen=0.63(95%CI:0.57,0.68),Spe=0.88(95%CI:0.84,0.91),阳性似然比(positive likelihood ratio,PLR)为5.34(95%CI:4.02,7.1),阴性似然比(negative likelihood ratio,NLR)为0.42(95%CI:0.37,0.48),诊断比值比(diagnostic odds ratio,DOR)为12.69(95%CI:8.91,18.08),受试者工作曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.82(95%CI:0.79,0.85)。TK1、CEA及CYFRA21⁃1作为肺癌联合诊断指标时,Sen=0.82(95%CI:0.76,0.86),Spe=0.78(95%CI:0.46,0.94),PLR=3.69(95%CI:1.28,10.66),NLR=0.24(95%CI:0.18,0.31),DOR=15.59(95%CI:4.56,53.36),AUC=0.84(95%CI:0.80,0.87);联合诊断的Youden指数为0.60,大于TK1单独诊断时的0.55。结论:TK1单独作为肺癌诊断指标时灵敏度偏低,但特异度较高,具有一定的诊断价值;TK1与CEA、CYFRA21⁃1联合诊断肺癌时有更高的灵敏度,诊断真实性高于TK1单独作为诊断指标时,诊断价值更佳。 展开更多
关键词 tk1 肺癌 诊断价值 META分析
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TK1、TPS及LDH在非霍奇金淋巴瘤治疗前后水平变化及与预后生存的相关性
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作者 李向垒 许英君 +2 位作者 张孟伟 刘灿 翟亚超 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第4期585-588,593,共5页
目的 探讨细胞质胸苷激酶(TK1)、组织多肽特异性抗原(TPS)及乳酸脱氢酶同工酶(LDH)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)治疗前后水平变化及与预后生存的相关性。方法 选取2016年6月至2019年6月于河南大学淮河医院进行化疗治疗的113例NHL患者设为观察... 目的 探讨细胞质胸苷激酶(TK1)、组织多肽特异性抗原(TPS)及乳酸脱氢酶同工酶(LDH)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)治疗前后水平变化及与预后生存的相关性。方法 选取2016年6月至2019年6月于河南大学淮河医院进行化疗治疗的113例NHL患者设为观察组,依据治疗效果将观察组分为缓解组和未缓解组;随访2年,了解观察组患者预后情况,根据随访结果将观察组分为生存组和死亡组。选取同期本院健康体检者118名设为对照组。比较各组间TK1、TPS、LDH水平,分析联合三项指标检测对NHL患者预后死亡的预测价值。结果 TK1、TPS、LDH水平分析:对照组<观察组化疗后<观察组化疗前,差异具有统计学意义(F=763.670、109.030、1175.280,P<0.05)。缓解组TK1、TPS、LDH水平低于未缓解组,差异具有统计学意义(t=8.466、4.567、14.182,P<0.05)。生存组NHL患者TK1、TPS、LDH水平低于死亡组,差异具有统计学意义(t=8.301、4.239、11.086,P<0.05)。TK1、TPS、LDH三者联合检测灵敏度(0.968)、特异度(0.952)、AUC(0.988)均高于各指标单一检测(P<0.05)。结论 临床可通过联合TK1、TPS、LDH检测提高NHL早期诊断率,三者可作为评估化疗治疗效果,判断患者预后的血清标志物。 展开更多
关键词 tk1 TPS LDH NHL
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血清TK1和G17联合检测对胃癌患者的诊断价值
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作者 张建清 齐秋峰 +1 位作者 朱明 刘永萍 《河北医药》 CAS 2023年第4期534-536,540,共4页
目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、胃泌素17(G17)联合检测在胃癌患者中的诊断价值分析。方法选取2018年1月至2019年12月就诊收治的108例胃部疾病患者为研究对象,经病理学诊断标准确诊为胃癌组(n=44)、胃溃疡组(n=33)、慢性胃炎组(n=31)。比... 目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、胃泌素17(G17)联合检测在胃癌患者中的诊断价值分析。方法选取2018年1月至2019年12月就诊收治的108例胃部疾病患者为研究对象,经病理学诊断标准确诊为胃癌组(n=44)、胃溃疡组(n=33)、慢性胃炎组(n=31)。比较3组患者的血清TK1、G17水平及TK1、G17指标单项检测与联合指标检测对胃癌诊断的价值。结果胃癌组患者的血清TK1、G17水平均高于胃溃疡组及慢性胃炎组患者(P<0.05);胃癌组TK1、G17联合检测与TK1、G17单项检测的AUC值分别为0.8011、0.6266、0.7568;TK1、G17联合检测对胃癌诊断的敏感性优于单项指标检测(P<0.05);两者特异性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清TK1、G17联合检测对胃癌诊断的敏感性优于单项指标检测,对胃癌早期与其他胃部疾病的鉴别诊断有重要价值,但其特异性不高,若要进一步明确胃癌的诊断,还需结合临床其他相关检查及指标。 展开更多
关键词 胃癌 tk1 G17 敏感性 特异性 联合检测
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中国人群中血清TK1对原发性肝癌诊断价值的meta分析
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作者 皮爱荣 彭伟 《国际医药卫生导报》 2023年第5期606-613,共8页
目的通过meta分析研究中国人群中血清胸苷激酶1(TK1)对原发性肝癌的诊断价值。方法通过计算机检索数据库中有关中国人群中血清TK1在原发性肝癌诊断方面的相关文献,对文献进行质量评价,通过Stata 17.0对研究结果进行综合评价。文献检索... 目的通过meta分析研究中国人群中血清胸苷激酶1(TK1)对原发性肝癌的诊断价值。方法通过计算机检索数据库中有关中国人群中血清TK1在原发性肝癌诊断方面的相关文献,对文献进行质量评价,通过Stata 17.0对研究结果进行综合评价。文献检索时间从建库至2022年8月31日。结果共纳入22篇文献,meta分析结果显示TK1对原发性肝癌诊断的灵敏度(SE)=0.73(95%CI 0.67~0.78,P<0.05)、特异度(SP)=0.89(95%CI 0.85~0.92,P<0.05)、阳性似然比(PLR)=6.47(95%CI 4.76~8.80,P<0.05)、阴性似然比(NLR)=0.31(95%CI 0.25~0.37,P<0.05)、诊断比值比(DOR)=21.22(95%CI 13.42~33.55,P<0.05)、综合受试者工作特征曲线下面积(SROC-AUC)=0.88(95%CI 0.85~0.91,P<0.05)。TK1、甲胎蛋白(AFP)、Dickkopf-1(DKK1)联合诊断原发性肝癌的SE=0.88(95%CI 0.85~0.90,P<0.05)、SP=0.91(95%CI 0.89~0.93,P<0.05)、PLR=9.89(95%CI 6.72~14.57,P<0.05)、NLR=0.11(95%CI 0.05~0.23,P<0.05),DOR=94.52(95%CI 35.02~255.09,P<0.05)、AUC=0.97(95%CI 0.63~0.99,P<0.05)。联合诊断的Youden指数为0.79,高于TK1单独诊断时的0.66。结论中国人群中单独检测血清TK1对原发性肝癌的诊断SE尚好,SP较高,具有一定的诊断价值;TK1、AFP、DKK1联合检测对原发性肝癌具有更高的诊断价值。 展开更多
关键词 原发性肝癌 tk1 META分析
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仿制TKS14.15司机控制器的体会
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作者 许晓勤 《电力机车与城轨车辆》 1992年第1期19-19,共1页
TKS14、15型司机控制器是仿制8K电力机车的新型司机控制器。现在,这两种司机控制器正运用在SS<sub>5</sub>型准高速电力机车上。从车间生产试制、通过型式试验、装车运行等等的资料表明,该司机控制器比以前的司机控制器有... TKS14、15型司机控制器是仿制8K电力机车的新型司机控制器。现在,这两种司机控制器正运用在SS<sub>5</sub>型准高速电力机车上。从车间生产试制、通过型式试验、装车运行等等的资料表明,该司机控制器比以前的司机控制器有质的飞跃。这具体表现在以下几个方面:从生产制造方面看,模块化程度高,组装调整简单;从维修方面来看,更换联锁方便;从应用方面来说,使用省力、准确。从该司机控制器上,可以看到国际上机车电器设计的发展特点是:1. 展开更多
关键词 司机控制器 tks14.15 机车电器 联锁 型式试验 生产试制 装配工艺 研制时间 去其糟粕 冷压
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HSV-tk基因和IL-12基因抑制VEGF的表达及对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用的实验研究
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作者 周玉华 朱欠元 +1 位作者 曾友根 李宝金 《中国医学创新》 CAS 2023年第19期24-27,共4页
目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV... 目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组、空白对照组、每组6只。采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液(AdKDR-tk)、重组逆转录腺病毒液IL-12及生理盐水,24 h后重复注射1次。次日起HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组连续10 d每天腹腔内注射GCV 100 mg/(kg·d),连续10 d。各放射治疗组第3周开始给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。治疗结束后处死裸鼠,检测裸鼠肿瘤质量及肿瘤生长抑制率,免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度及VEGF阳性细胞灰度值。结果:IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组裸鼠瘤体质量明显低于IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组的肿瘤生长抑制率最高,达71.7%。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组微血管密度均低于其他各组,VEGF阳性细胞灰度值均高于其他各组(P<0.05)。结论:HSV-tk基因和IL-12基因联合应用在鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放疗中可抑制移植瘤的生长,为鼻咽癌的放疗产生增敏作用。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 鼻咽癌 放射治疗 HSV-tk 基因 IL-12 基因
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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gG^-/LacZ^+突变株的构建 被引量:34
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作者 陈焕春 周复春 +3 位作者 方六荣 何启盖 吴斌 洪文洲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期69-74,共6页
为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用E... 为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK-/LacZ+ 突变株基因组DNA共转染PK- 15细胞 ,待完全病变后 ,收毒作空斑试验 ,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化 3次 ,随机挑取空斑进行PCR扩增 ,证实所获得的病毒为均一的无TK-/LacZ+ 突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增 ,扩增产物经酶切分析和测序后发现 :TK缺失重组病毒的TK基因缺失了 2 0 5个碱基 ,XhoI和SalI位点消失 ,SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK - 15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA ,与含gG -LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK - 15细胞 ,待完全病变后 ,在X - gal存在下筛选蓝斑 ,将挑取的蓝斑纯化 3次后 ,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增 ,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段 ,同时又能扩增出LacZ基因 ,证实所得到的重组病毒为TK-/ gG-/LacZ+ 突变株。此双缺失突变株的构? 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鄂A野毒株 tk^-/LacZ^+突变株 tk缺失突变株 tk^-/gG^-/LacZ^+突变株
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猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其gE、TK全基因序列遗传变异分析 被引量:7
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作者 王宇 李段 +4 位作者 张乐宜 刘燕玲 王磊 徐铮 宋长绪 《广东农业科学》 CAS 2016年第7期133-144,F0002,共13页
将分离到的8种PRV分离株的g E、TK基因与国内外的毒株进行核苷酸及氨基酸的序列同源性分析,结果发现,分离毒株的gE、TK基因与15株国内外已发表的代表毒株核苷酸及氨基酸的序列同源性分别为97.3%~99.9%、98.7%~99.9%;遗传进化分析结果表... 将分离到的8种PRV分离株的g E、TK基因与国内外的毒株进行核苷酸及氨基酸的序列同源性分析,结果发现,分离毒株的gE、TK基因与15株国内外已发表的代表毒株核苷酸及氨基酸的序列同源性分别为97.3%~99.9%、98.7%~99.9%;遗传进化分析结果表明,分离毒株与国内近年分离自不同省份的代表毒株亲缘关系较近,与国外分离的代表毒株亲缘关系较远;而对gE、TK基因氨基酸主要变异位点分析表明,gE和TK基因都有一些位点已经发生突变。结果表明猪PRV广东部分地区分离毒株已发生变异,为规模化猪场对猪伪狂犬病的净化以及疫苗的选择提供参考。 展开更多
关键词 PRV 分离 鉴定 gE tk
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TK基因联合mIL-2基因治疗胃癌的实验研究 被引量:18
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作者 郭善禹 顾琴龙 +3 位作者 刘炳亚 朱正纲 尹浩然 林言箴 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第9期974-978,共5页
目的通过转基因方法观察自杀基因 TK 对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合 mIL-2基因,观察免疫反应在增强 TK 杀伤性中的作用.方法应用逆转录病毒方法转导自杀基因 TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因 mIL-2.通过体外实验观察 TK 基因对小鼠胃... 目的通过转基因方法观察自杀基因 TK 对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合 mIL-2基因,观察免疫反应在增强 TK 杀伤性中的作用.方法应用逆转录病毒方法转导自杀基因 TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因 mIL-2.通过体外实验观察 TK 基因对小鼠胃癌 MFC 细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中首先在615小鼠建立胃癌模型,然后分组将病毒上清注入瘤体内,并结合应用前药和 mIL-2基因,分别观察它们对肿瘤的杀伤作用.通过病理切片观察组织病理变化;应用免疫组化方法观察 T 淋巴细胞亚群在局部的聚集情况.结果 TK 基因在体外即显出明显的杀伤作用,20%的转基因细胞可以杀伤70%~80%以上的肿瘤细胞.体内实验表明 TK基因结合前药 GCV 可显著杀伤肿瘤,而 TK 基因本身并无杀伤作用(P=0.046).联合 mIL-2后抗肿瘤作用进一步加强,部分肿瘤完全消退(P=0.005).免疫组化显示 CD_4^+,CD_8^+细胞在局部聚集.结论自杀基因 TK 联合前药 GCV 对小鼠胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞.细胞因子基因 mIL-2可增强 TK 的抗肿瘤作用. 展开更多
关键词 胃肿瘤 治疗 tk基因 mIL-2基因 基因治疗
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应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株 被引量:11
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作者 梁苑燕 胡艳芬 +3 位作者 张小荣 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1802-1809,共8页
为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本... 为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 GE基因 tk基因 重组病毒
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鸭瘟病毒的分离鉴定及其UL2、TK基因序列分析 被引量:11
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作者 刘荣昌 黄瑜 +7 位作者 卢荣辉 傅秋玲 江斌 万春和 傅光华 程龙飞 施少华 陈红梅 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1257-1261,共5页
2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒... 2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒。对新分离鉴定的2株鸭瘟病毒株的UL2基因进行序列测定及分析发现,均具有强毒株的分子特征;经TK基因序列测定及分析表明,2株新分离的鸭瘟病毒株与强毒代表株、弱毒疫苗株的TK基因核苷酸同源性均高达98.7%。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分离鉴定 UL2基因 tk基因 序列分析
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