Pseudomonas koreensis JDM-2株ACC脱氨酶基因的克隆和表达

应用PCR从杜仲内生Pseudomonas koreensis JDM-2株基因组中扩增出ACC脱氨酶基因acdS,将其克隆到pMD18-T载体并段进行DNA测序,通过BamHⅠ和HindⅢ酶切从重组质粒pMD18ACDS中切下acdS基因序列,将其连接到pQE30质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点,构建表达质粒pQE30ACDS,转化大肠杆菌BL21,利用比色法测定ACC脱氨酶活力.测序结果表明,JDM-2菌株acdS基因大小为1 017bp,与已报道不同菌种acdS基因的同源性在86%～99%之间.SDS-PAGE结果显示在大肠杆菌BL21中表达了分子量为38kDa的ACC脱氨酶.酶活性检测结果显示重组菌ACC脱氨酶的酶活力为0.214U/mg.

响应面法优化假单胞菌koreensis产聚-β-羟基丁酸酯的发酵工艺参数

聚-β-羟基丁酸酯(PHB)作为一种完全可降解生物塑料,有望替代传统塑料应用于食品包装、农业和医药等领域,但高昂的生产成本制约着PHB更广泛的应用。本文在以前培养基配方优化结果的基础上,对发酵工艺参数进行响应面优化,确定最佳发酵工艺参数,进一步提高PHB产量。首先,通过单因素试验,确定了转速、初始pH值、接种量和温度的水平范围;然后,以单因素试验结果为基础,采用Design Expert8.0软件设计Box-Behnken四因素三水平、5个中心点、共29组的响应面试验,得到拟合回归方程;最后,通过软件分析确定了假单胞菌koreensis发酵产PHB的最佳工艺参数。结果表明:转速170.91r/min、初始pH值7.64、接种量6.21%和温度32.15℃,PHB产量达4.42g/L,为优化前的1.38倍,效果显著。

假单胞菌koreensis产聚-β-羟基丁酸酯发酵培养基的响应面优化

通过单因素试验,确定了假单胞菌koreensis发酵培养基的最适碳、氮源种类为葡萄糖和NH4Cl;同时,随着培养基内各组分浓度的不断变化,试验结果表明:葡萄糖、NH_4Cl、K_2HPO_43个因素对PHB产量影响最为显著。在单因素试验基础上,采用Design Expert8.0软件设计Box-Behnken三因素三水平,5个中心点,共17组的响应面试验,得到拟合回归方程,最终确定最适发酵培养基配方为:葡萄糖浓度16.64g/L、NH_4Cl浓度3.94g/L和K_2HPO_4浓度1.45g/L,PHB产量达到3.18g/L,较优化前提高了1.8倍,效果显著。