介绍一种改良的Von Kossa钙盐染色法

在牙齿及骨骼外出现的钙沉积均为病理性钙盐沉积。草酸钙结晶性肾损伤的发病机制及其治疗靶点的基础研究中,实验大鼠肾组织内沉积的草酸钙结晶在HE染色中不易观察,借助Von Kossa钙盐染色法对实验动物行钙盐特殊染色,以便半定量统计各肾脏组织内草酸钙结晶的量。Von Kossa钙盐染色法是一种金属置换法,硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时,钙被银置换,银盐在光的作用下被还原为黑色金属银,钙盐沉积处染色为黑色。Von Kossa钙盐染色法中最关键的硝酸银溶液染色步骤需要阳光照射,传统方法是将其置于阳光下或60 W灯泡前,放置1 h或更长时间,整个染色步骤耗时长且不容易控制。

Von Kossa钙组织切片的制作初探

本文主要针对一些特殊的组织进行钙的观察。采用的是特殊的染色方法,即VonKossa染色法。从组织的取材、固定、脱水、透蜡、浸蜡、包埋到切片、展片、贴片、烤片、染片以及封片,综述了整个切片制作的全过程。为关于钙方面的切片的制作提供了有力的依据,值得借鉴与共享。

骨碎补各种提取成分对人骨髓间充质干细胞的影响

目的初步探讨骨碎补水提液、醇提液以及骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞(hu-manbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)增殖、分化的影响。方法将骨碎补水提液、醇提液和骨碎补的有效成分柚皮甙与hMSCs共同体外培养,倒置显微镜观察描述细胞生长情况、CCK-8法检测每组药液对细胞的毒性和增殖作用、碱性磷酸酶(ALP)活性测定,图文报告分析系统检测VonKossa染色的钙结节,统计学处理所得数据。结果与空白对照组比较,1mg/L骨碎补水提液、50μg/L骨碎补醇提液与50μg/L柚皮甙能促进hMSCs增加(P<0.05),50μg/L骨碎补醇提液与50μg/L柚皮甙能促进其向成骨细胞分化(P<0.05)。结论骨碎补水提液、醇提液与柚皮甙对hMSCs有保护作用并能分别促进其增殖、分化。

骨碎补有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞的影响

目的探讨骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖、分化的影响。方法将骨碎补的有效成分柚皮甙以及成骨诱导液(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠)与hMSCs共同体外培养,用倒置显微镜观察细胞生长情况、CCK-8法检测细胞的毒性和增殖作用、碱性磷酸酶(ALP)活性测定、von kossa钙结节染色。结果50μg/L柚皮甙对细胞无毒性、能促进hMSCs增殖,碱性磷酸酶(ALP)活性、von kossa钙结节染色与空白对照组比较有明显差异(P<0.05)。结论柚皮甙对hMSCs有保护作用并能促进其增殖、分化。

微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型的建立与染色方法的比较

目的:建立微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型,并比较茜素红S和冯·科萨染色方法对微钙化的识别。方法:30只雄性新西兰兔,在高脂饲料喂养和腹主动脉内皮球囊损伤基础上,随机分为套管组(给予腹主动脉双楔形套管缩窄)和非套管组,喂养12周,对比茜素红S和冯·科萨染色方法对微钙化识别的价值,并比较两组微钙化的发生率。结果:两组均形成动脉粥样硬化斑块,套管组微钙化发生率和钙化面积高于非套管组(P<0.05)。茜素红S和冯·科萨染色识别微钙化的敏感性相同,前者具有荧光活性的优势,但对于微钙化的定位准确性逊于后者。结论:本研究成功建立了一种微钙化动脉粥样硬化斑块兔模型。茜素红S和冯·科萨染色均能较好识别微钙化。

偏振光镜在大鼠肾脏草酸钙晶体组织学染色检测中的应用分析

目的探讨偏振光镜结合组织学染色在草酸钙结石模型大鼠肾脏组织中晶体与钙化晶体的最优检测效果。方法将38只草酸钙结石模型组和4只正常对照组大鼠肾脏的FFPE组织行4μm切片,经HE、Von Kossa、1%茜素红S(PH4.2)、0.2%茜素红S(PH8.3)四种染色后在偏正光镜、光镜下以晶体与钙化晶体的存在状态、双折射性作为评估指标进行分析。结果四种染色后光镜下模型组和对照组分别的晶体和草酸钙晶体的χ^(2)=138.8、P<0.001,χ^(2)=147.3、P<0.001;偏正光镜下的χ^(2)=126.9、P<0.001,χ^(2)=118.2、P<0.001。Von Kossa染色能确定模型组晶体和钙化晶体的阳性和对照组的阴性,HE染色仅能确定模型组晶体的阳性和对照组的阴性而无法确定模型组钙化晶体的阳性和对照组的阴性,2种茜素红S在晶体上均不着色呈假阴性而无法判断;由于HE和2种茜素红S染色均未能使晶体染色,故在偏正光镜下见晶体有显著的双折射光可确定模型组的草酸钙晶体阳性和未见双折射光从而确定对照组的阴性,同时在Von Kossa染色呈黑色颗粒或团块状区域在偏正光镜下呈暗黑色或暗红色,其内有见不完整、散在双折射光但不显著不能确定晶体和草酸钙的晶体为阳性。结论偏正光镜结合HE染色可确定草酸钙晶体,光镜下Von kossa染色可作为钙化晶体的验证方法,而茜素红染色在光镜下对草酸钙晶体染色观察无特异性。

Calcinosis circumscripta in a captive African cheetah(Acinonyx jubatus)

This article reports a first case of calcinosis circumscripta in a captive African cheetah(Acinonyx jubatus).Histopathology demonstrated well defined multiple cystic structures containing granular,dark basophilic materials with peripheral granulomatous reaction,characterized by presence of multinucleated giant cells surrounded by a varying amounts of fibrous connective tissues.Special staining with von Kossa revealed black stained deposits confirming the presence of calcium salts.

尿石汤配方颗粒改善肾草酸钙结石大鼠肾功能效果及其机制

目的:探讨尿石汤配方颗粒改善肾草酸钙结石(CaXO)大鼠肾功能效果及其机制。方法:建立草酸钙肾结石大鼠模型,检测大鼠造模前后体质量变化,肾脏质量、脏器系数变化,排尿量、尿液pH、尿液Ca^(2+)、尿液结晶数量及类型,观察肾结石模型在大鼠机体上的宏观变化。采用He染色和Von-Kossa’S染色,观察尿石汤配方颗粒对肾结石模型大鼠肾组织的病理变化。采用试剂盒方法,检测大鼠肾组织中SOD、MDA、GHS-PX、CAT指标变化,探讨尿石汤配方颗粒对改善肾草酸钙结石大鼠肾功能可能的机制。结果:模型组体质量增长缓慢,肾脏质量增加,肾脏系数升高,排尿量减少,pH呈碱性,Ca^(2+)浓度升高,BLD结果显示+3,PRO结果显示+2,尿液中结晶为磷酸铵镁结晶,结晶数量为+3,肾脏病理观察可见明显肾小管扩张和草酸钙晶体沉积。给药组体质量增长较模型组快,肾脏质量和肾脏比重较模型组不同程度下降,排尿量增多,pH呈碱性,Ca^(2+)浓度呈下降趋势,BLD结果显示+3,PRO结果显示阴性,尿液结晶数不同程度下降,肾脏病理观察可见肾小管扩张程度下降,草酸钙晶体减少。模型组大鼠肾组织中SOD、GSH-PX、CAT等指标水平下降,而MDA指标水平升高。各给药组均能提高因造模引起的SOD、GSH-PX、CAT水平降低,同时降低因造模引起的MDA水平升高。结论:尿石汤配方颗粒对改善肾草酸钙结石大鼠肾功能具有良好的治疗效果。改善草酸钙结石肾功能作用可能的机制为:阻止MDA的产生,减少细胞损伤,激活SOD、GSH-PX、CAT的释放,以防止生成CaXO结晶。