siHybrids对耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因表达水平的影响

目的研究si Hybrids对耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因表达水平及其对美罗培南的抑菌效果的影响,探讨si Hybrids的作用机制。方法将48株携带有kpc-2基因的耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌株分成对照组(不加si Hybrid)、低浓度组(si Hybrids为0.125μg/ml)、高浓度组(si Hybrids为8.0μg/ml)。分别检测3组12、24、48 h后3个时间点的mRNA的量。另外再分别取3组菌液进行美罗培南药敏试验,观察3组间抑菌圈直径的大小有无差异。结果与对照组相比较,si Hybrids干预后kpc-2基因的mRNA表达量显著下降(P<0.05),高浓度组kpc-2基因的mRNA表达量显著低于低浓度组(P<0.05),si Hybrids的浓度与kpc-2基因的mRNA表达量呈负相关(r=-0.782,P=0.014);kpc-2基因的mRNA表达量随着si Hybrids干预时间的延长而显著下降(P<0.05)。si Hybrids干预能显著增大美罗培南抑菌圈的直径(P<0.05),不同浓度的si Hybrids对美罗培南抑菌圈直径的增大幅度不同,高浓度组美罗培南抑菌圈的直径显著大于低浓度组(P<0.05),si Hybrids的浓度与美罗培南抑菌圈直径的大小呈正相关(r=0.882,P=0.024)。结论 si Hybrids能降低耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌kpc-2基因的表达水平,能提高美罗培南的抑菌效果,其作用机制是si Hybrids分子特异性沉默了肺炎克雷伯菌的kpc-2基因。

海南产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状

目的探讨海南地区产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行现状。方法通过法国梅里埃API20E生化鉴定条和法国生物梅里埃VITEK2全自动细菌鉴定仪和配套CNS试剂筛选出临床上耐亚胺培南或美罗培南的肠杆菌科细菌并进行药敏统计;并对其进行改良Hodge试验和亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验检测碳青霉烯酶表型;对目的菌株进行KPC-2耐药基因PCR特异性扩增,扩增后将产物进行琼脂糖凝胶电泳。结果分离出30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌,体外药敏除阿米卡星23.3%和左氧氟沙星36.7%外,其他广谱青霉素类、头孢类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂及庆大霉素呈现高水平耐药。30株耐亚胺培南和美罗培南的肠杆菌科细菌有9株改良Hodge试验为阳性,有21株亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验为阳性。对其9株改良Hodge试验为阳性菌株进行KPC-2基因PCR扩增,扩增后进行电泳没有发现携带KPC-2耐药基因的耐药菌株。结论海南地区耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌暂时没有发现携带KPC-2型基因耐碳青霉烯酶,但多见产金属酶的碳青霉烯酶。

产KPC-2型碳青霉烯酶肠杆菌整合子分布研究

目的研究亚胺培南耐药肠杆菌耐药机制,分析整合子的分布情况及其在流行传播中的作用。方法收集临床分离的18株对亚胺培南耐药肠杆菌,用琼脂稀释法检测抗菌药物最低抑菌浓度(MIC);用PCR、DNA测序法检测KPC-2型碳青霉烯酶基因和整合酶基因,并分析整合子在耐药基因传播中的作用。结果 18株肠杆菌除对亚胺培南耐药外,对头孢噻肟、环丙沙星、头孢吡肟、阿米卡星、氨苄西林等多药耐药,MIC值分别为128～2 048、8～512、64～2 048、16～2 048、64～4 096μg/mL;PCR、基因测序显示18株肠杆菌均产KPC-2型碳青霉烯酶;18株菌均扩增出Ⅰ类整合酶基因,未检测出Ⅱ类整合酶基因,可变区中不存在kpc-2基因。结论本院分离的18株亚胺培南耐药肠杆菌均存在Ⅰ类整合酶基因,且kpc-2基因是引起这些细菌对亚胺培南耐药的主要原因。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC-2与NDM-1基因的研究

目的检测耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况以及KPC-2和NDM-1耐药基因的检出,分析耐碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌产酶情况;PCR法检测KPC-2及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果 29株分离菌中26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南-EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC-2型碳青霉烯酶耐药基因,占55.17%,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药机制主要是产碳青霉烯酶。

一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制。方法采用浓度梯度法(E-test)测定细菌的抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),采用接合实验、聚合酶链反应(PCR)、质粒抽提、探针杂交印迹试验(Southern blot)、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制。结果接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点(PI)分别为9.0、6.7(KPC-2)、5.4。PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型。结论碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶。

大环内酯类抗菌药物联合解热止嗽汤治疗携带bla_(KPC-2)基因病原菌感染肺炎的疗效

目的探究使用大环内酯类抗菌药物联合解热止嗽汤治疗携带bla_(KPC-2)基因病原菌感染肺炎患儿的临床疗效.方法选择2018年5月-2019年5月浙江大学附属儿童医院长兴院区儿内科接受治疗的54例携带bla_(KPC-2)基因耐药菌感染肺炎患儿作为研究对象,按照治疗方式不同分为研究组和对照组,每组各27例.对照组患儿仅接受大环内酯类抗菌药物治疗,研究组患儿在此基础上加用解热止嗽汤进行治疗,对两组患儿的临床疗效和血清因子水平进行比较.结果54例肺炎患儿痰液标本共分离病原菌73株,其中肺炎克雷伯菌携带bla_(KPC-2)基因阳性率最高为86.21%;治疗后研究组患儿退热、肺部啰音消失、咳嗽消失及肺部阴影消失的时间均短于对照组;研究组患儿治疗疗效高于对照组患儿(Z=2.338,P=0.019);研究组患儿血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均低于对照组(P<0.05);研究组患儿不良反应总发生率低于对照组患儿(P<0.05).结论大环内酯类抗菌药物联合解热止嗽汤治疗携带bla_(KPC-2)基因病原菌感染肺炎患儿能够有效改善临床症状,降低炎症因子水平,产生不良反应的概率较小,安全性较高.

肺炎克雷伯菌耐药基因及医院感染控制研究

目的研究临床分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的同源性及耐药机制,为有效预防与控制医院感染提供资料与依据。方法自2008年8月医院分离出第1株CRKP后,对随后所有分离CRKP实时监控;对前期分离的25株CRKP用接合试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)验证耐药性传递及分析菌株同源性;PCR及克隆测序分析耐药基因型。结果 2008年8月-2010年12月分离CRKP 52株,其中2008年8月-2009年6月共分离出11株,分离率为21.0%,为散发状态;2009年7月-2009年12月检出35株,分离率为67.0%,出现局部流行;加强预防控制后2010年全年检出6株,分离率为12.0%,重呈散发状态;所有菌株均产KPC-2碳青霉烯酶基因,并同时携带多种耐药基因,PFGE分型除2株菌外均为同一克隆。结论检出携带KPC-2基因的肺炎克雷伯菌,该菌株以克隆播散造成局部流行,加强医院感染预防控制能有效遏制菌株流行。

改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶的临床应用

目的探讨改良Hodge试验检测KPC型碳青霉烯酶最佳底物以及这种检测方法在临床上的应用。方法收集213株多药耐药的肠杆菌科细菌,选用亚胺培南、美罗培南、厄他培南为改良Hodge试验的不同底物筛选产碳青霉烯酶表型株;采用聚合酶链反应(PCR)及耐药基因测序分析细菌的耐药基因型。结果从213株肠杆菌科细菌中检出12株改良Hodge试验阳性株,其中7株为大肠埃希菌,2株为弗氏柠檬酸杆菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株;12株改良Hodge试验阳性菌体外药敏试验结果显示,对临床常用抗菌药物均耐药;PCR法扩增出5株阳性株,分别为2株大肠埃希菌,臭鼻克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、聚团泛菌各1株;扩增产物经基因测序Blast比对均为KPC-2型碳青霉烯酶。结论改良Hodge试验的最佳底物为厄他培南,美罗培南效果较差;5株耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌携带KPC-2型碳青霉烯酶。

Carba NP碳青霉烯酶检测方法在医院感染监测中的应用

目的研究Carba NP法检测3株产酶菌株同源性及耐药机制,探讨Carba NP碳青霉烯酶检测方法在医院感染监测中的应用价值,为临床治疗提供参考依据。方法于2012年7月-2013年1月采用Carba NP法对检出3株产碳青霉烯酶克雷伯菌属细菌进行鉴定、药物敏感性、菌株特征及药物敏感谱;PCR扩增和测序碳青霉烯酶的基因型;PFGE电泳探讨3株菌的亲缘关系。结果菌株1为肺炎克雷伯菌,产碳青霉烯酶酶KPC-2;菌株2为肺炎克雷伯菌,产碳青霉烯酶IMP-4,菌株3为产酸克雷伯菌,同时产KPC-2和IMP-4;PFGE结果表明该3株菌不是近源的克隆株,提示KPC-2和IMP-4基因元件在该病房的跨种属传播。结论 Carba NP能早期迅速准确的检出菌株是否产碳青霉烯酶,为产碳青霉烯酶菌株的医院感染提供早期线索,在医院感染监测、控制中有重要应用价值,结合PCR及测序,PFGE的结果能在医院获得性感染控制方面发挥积极的作用。