Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位在胃癌多药耐药中的作用

目的:对Ro 60在胃癌多药耐药中的功能进行研究．方法:克隆Ro 60编码基因,构建Ro 60编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901 细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素．结果:成功构建了Ro 60正义真核表达载体, 应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后其表达量明显增加,体外药物敏感性试验提示其对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性减低,SGC7901细胞的IC50值 (mg/L)与未转染细胞和转染空白载体细胞相比,显著增加(2．28±0．11 vs 0．45±0．04,0．65 ±0．05;2．89±0．14 vs 0．61±0．21,0．90±0．11; 1．92±0．03 vs 0．54±0．03,0．75±0．21;1．41± 0．06 vs 0．45±0．03,0．54±0．03;0．28±0．03 vs 0．14±0．01,0．14±0．01;均P<0．01),细胞内阿霉素蓄积显著减少(56．30±2．49 mg/L vs 92．83 ±3．63,87．38±2．94 mg/L,P<0．01)．结论:Ro 60真核表达载体转染SGC7901细胞后显示了一些多药耐药的特性,提示Ro 60在胃癌多药耐药中发挥了一定的作用．

Ss-A／Ro核蛋白60 ku亚单位及其变异体在耐药胃癌细胞中的表达

目的:克隆Ss-A／Ro 60 ku亚单位编码基因,检测Ss-A／Ro 60 ku亚单位及其变异体在耐药胃癌细胞中的表达情况．方法:应用RT-PCR克隆Ss-A／Ro 60 ku亚单位编码基因,应用半定量RT-PCR检测Ss-A／Ro 60 ku亚单位及其变异体在胃癌细胞中的表达情况．结果:成功克隆了Ss-A／Ro 60 ku亚单位编码基因,并发现了他的两种变异体,长度分别为52 bp和41 bp．半定量RT- PCR结果显示,Ss-A／Ro 60 ku亚单位在SGC7901／VCR中的表达强度高于SGC7901细胞(P=0．0001),Ss-A／Ro 60 ku亚单位的两种变异体在SGC7901／VCR中的表达强度也高于 SGC7901细胞(P=0．001)．结论:Ss-A／Ro 60 ku亚单位及其两种变异体为胃癌多药耐药相关分子．

Ss-A/Ro核蛋白60 ku亚单位反义核酸逆转胃癌细胞多药耐药

目的:对Ro 60反义核酸在逆转胃癌细胞多药耐药中作用进行研究．方法:克隆Ro 60编码基因,构建Ro 60编码基因的反义真核表达载体,将其转导入SGC7901细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素．结果:成功构建了Ro 60反义真核表达载体,应用脂质体介导法将其转导入SGC7901-VCR, Ro 60反义真核表达载体转染SGC7901-VCR细胞后,Ro 60的表达量明显下降,体外药物敏感性实验提示其对长春新碱、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性增加,转染反义表达载体的SGC7901-VCR细胞与未转染和转染空载体的细胞相比,IC50值(mg/L)有显著的下降(7．66±0．45 vs 19．56±0．38,17．48±0．85;0．84±0．03 vs 1．62±0．06．1．80±0．03;0．51±0．03 vs 0．87±0．03．0．88±0．03;0．22±0．01 vs 0．52±0．02,0．43±0．03,均P<0．01),细胞内阿霉素蓄积有显著的增加(51．94±1．26 mg／L vs 36．27±0．98,37．01±0．91 mg／L,P<0．01)．结论:Ro 60反义真核表达载体转染SGC7901后能够抑制胃癌细胞的多药耐药表型．

Ss-A/Ro 60 ku亚单位变异体1在胃癌多药耐药中的作用

目的:对Ro 60变异体1在胃癌多药耐药中的功能进行研究.方法:克隆Ro 60变异体1编码基因,构建Ro 60变异体1编码基因的正义真核表达载体,将其转导入SGC7901细胞,应用半定量RT-PCR技术,对基因转染细胞进行鉴定,通过MTT法进行体外药物敏感性分析,借助流式细胞仪检测细胞内蓄积的阿霉素.结果:成功构建Ro 60变异体1正义真核表达载体:应用脂质体介导法将其转导入SGC7901,其表达量明显增加;体外药物敏感性试验提示,与SGC7901和SGC7901-pcDNA3.1细胞相比,转染细胞对长春新碱(IC_(50):2.87±0.10 mg/L vs 0.47±0.07 mg/L,0.63±0.08 mg/L,P<0.01)、5-氟尿嘧啶(IC_(50):3.89±0.12 mg/L vs 0.59±0.17 mg/L,0.92±0.12 mg/L,P<0.01)、丝裂霉素(IC_(50):1.02±0.06 mg/L vs 0.50±0.04 mg/L,0.73±0.09 mg/L,P<0.05)、顺铂(IC_(50):1.15±0.06 mg/L vs 0.46±0.04 mg/L.0.52±0.05 mg/L,P<0.01)、阿霉素(IC_(50):0.45±0.03 mg/L vs 0.15±0.03 mg/L,0.16±0.02 mg/L,P<0.01)的敏感性减低;流式细胞仪检测结果显示,转染细胞内阿霉素的蓄积减少(50.39±2.09 mg/L vs 94.99±4.07 mg/L,88.06±2.67 mg/L,P<0.01).结论:Ro 60变异体1真核表达载体转染SGC7901细胞后,显示多药耐药特性.