苦参醇F对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用

目的探究苦参醇F(KSC-F)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的干预作用。方法将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(柳氮磺吡啶,703 mg/kg)、KSC-F 50 mg/kg组(KSC-F50组)、KSC-F 100 mg/kg组(KSC-F100组),每组6只。除正常组外,其余各组小鼠均连续饮用3%葡聚糖硫酸钠水溶液7 d以复制UC模型;与此同时,各药物组灌胃相应药液,每天1次,连续10 d。实验期间,观察小鼠体重变化及排便情况,并于末次给药后进行疾病活动指数评分,观察其结肠组织病理形态,检测血清和结肠组织中炎症因子水平,以及结肠组织中炎症因子mRNA和炎症相关蛋白[白细胞介素1β(IL-1β)、叉头框蛋白O1(FOXO1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(pp38 MAPK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)等]的表达水平。结果KSC-F能缓解UC小鼠的体重减轻和结肠组织病变;可不同程度地降低血清中IL-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和结肠组织中IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α水平,升高血清和结肠组织中IL-10水平(P<0.05或P<0.01);可不同程度地降低结肠组织中IL-1β、IL-17、TNF-αmRNA和p-PI3K、p-p38 MAPK、p-Akt蛋白的表达水平,提高结肠组织中IL-10 mRNA和FOXO1蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论KSC-F可通过抑制PI3K、Akt、p38 MAPK蛋白的激活,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎因子的释放,促进抗炎因子IL-10的分泌,减轻结肠组织炎症损伤,从而改善UC小鼠的相关症状。

苦参醇F调节肠道菌群及免疫应答对溃疡性结肠炎小鼠的改善作用机制研究

目的探究苦参醇F(KSCF)治疗溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用机制。方法采用网络药理学与分子对接预测KSCF干预UC的潜在靶点。将C57BL/6J小鼠按体重分为模型组、阳性对照组(柳氮磺胺吡啶,703 mg/kg)、KSCF组(100 mg/kg)和正常组,每组6只;采用饮用葡聚糖硫酸钠溶液的方法建立小鼠UC模型;造模期间灌胃给药,每天1次,连续7 d。末次给药后,对小鼠疾病活动指数(DAI)进行评分;测量小鼠结肠长度;观察小鼠结肠组织病理形态学变化;检测小鼠血清中脂多糖(LPS)及结肠中髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;检测小鼠结肠组织中闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)表达水平;检测小鼠脾脏中CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞比例及CD4+/CD8+值变化;采用16S rDNA测序法分析结肠微生物变化。结果网络药理学结果显示,KSCF可能调节磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B、核因子κB(NF-κB)等信号通路治疗UC。分子对接结果表明,KSCF与NF-κB p65蛋白结合最稳定。动物实验结果表明,与模型组比较,KSCF组小鼠结肠组织病理形态学特征得到改善;DAI评分、血清LPS水平、结肠组织中MPO及NF-κB p65磷酸化和NLRP3蛋白表达水平、脾脏中CD8+T淋巴细胞比例显著降低(P<0.05);小鼠体重,结肠组织中SOD水平、occludin和ZO-1表达水平,脾脏中CD3+T、CD4+T淋巴细胞比例及CD4+/CD8+值显著升高(P<0.05);肠道中厚壁菌门、放线菌门、阿克曼氏菌属和乳酸杆菌属丰度增加,变形菌门丰度减少,菌群结构向正常组趋近。结论KSCF通过修复肠道微生态失调、增强免疫应答来抑制结肠炎症反应,改善肠屏障完整性来缓解UC。

苦参新醇F对黑素细胞氧化应激及自噬的影响

目的:探究苦参新醇F对黑素细胞氧化应激及自噬的影响。方法:以PIG1细胞株为研究对象,将细胞分为对照组、模型组、阳性对照(小檗碱,5μmol/L)组以及苦参新醇F低、中、高剂量(26、52、78μmol/L)组。除对照组外,其他各组加入1.0 mmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))干预24 h,以诱导氧化应激损伤。H_(2)O_(2)刺激后,各药物组给予相应药物干预24 h。CCK8法检测细胞活力;ELISA检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;透射电镜观察自噬小体;免疫荧光检测E-钙黏素蛋白表达;Western blot检测氧化应激及自噬相关蛋白的表达,包括:Beclin-1、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)。结果:(1)与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的细胞活力均显著升高(P<0.01),且高剂量组细胞活力明显高于低剂量组、阳性对照组(P<0.05)。(2)与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的ROS、MDA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),GSH水平明显升高(P<0.05,P<0.01);且高剂量组的ROS、MDA水平低于低剂量组、阳性对照组(P<0.05,P<0.01),GSH水平高于低剂量组(P<0.05)。(3)与模型组相比,苦参新醇F不同剂量组的自噬小体数目均显著增多(P<0.05,P<0.01);且中、高剂量组的自噬小体数目明显多于低剂量组(P<0.05,P<0.01)。(4)苦参新醇F中、高剂量组E-钙黏素表达较模型组显著升高(P<0.05,P<0.01),且明显高于低剂量组(P<0.05,P<0.01)。(5)与模型组相比,不同剂量苦参新醇F干预后,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Nrf2、P62蛋白表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:苦参新醇F可能通过上调Nrf2-P62信号通路,促进黑素细胞自噬,从而抵抗氧化应激损伤。