L-3-正丁苯酞对实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及其机制

目的 基于RhoA/ROCK信号通路探讨L-3-正丁苯酞(L-3-n-butylphthalide, NBP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠的疗效及潜在机制。方法 32只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、EAE组、NBP低剂量组(L-NBP)和NBP高剂量组(H-NBP),每组8只。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55, MOG35-55)作为抗原乳剂免疫诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型。EAE模型制作成功后,L-NBP组和H-NBP组分别以3.25,6.5 mg/(kg·d)NBP腹腔注射,连续28 d。免疫当日起,每7 d记录各组小鼠的体质量,每天进行神经功能障碍评分;对脊髓组织进行HE染色和劳克坚牢蓝(Luxol fast blue, LFB)染色,观察病理改变;使用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测外周血白细胞介素-10(IL-10)、IL-1β、IL-6和IL-18含量;real time-PCR检测脊髓组织炎症相关因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF受体1(TNFR1)、IL-1β的表达;Western blot检测RhoA、ROCKⅠ及ROCKⅡ蛋白表达情况。结果 与对照组相比,EAE组小鼠体质量下降,神经功能障碍评分、组织病理学评分升高,IL-10含量降低,IL-18、IL-6和IL-1β含量增加,TNF-α、TNFR1及IL-1β mRNA表达升高,RhoA、ROCKⅠ及ROCKⅡ蛋白表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与EAE组相比,L-NBP和H-NBP组小鼠体质量增加,发病潜伏期延长,高峰期延迟,神经功能障碍评分、组织病理学评分降低,IL-10含量增高,IL-1β、IL-6和IL-18含量降低,TNF-α、TNFR1及IL-1β mRNA表达降低,RhoA、ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与L-NBP组相比,H-NBP组小鼠体质量增加,发病潜伏期延长,高峰期延迟,神经功能障碍评分、组织病理学评分降低,IL-10含量增高,IL-1β、IL-6和IL-18含量降低,TNF-α、TNFR1和IL-1β mRNA表达降低,RhoA和ROCKⅡ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NBP能够减轻EAE小鼠外周及中枢炎症反应,进而改善EAE的神经障碍症状,其作用机制可能是通过抑制RhoA/ROCK信号通路来实现的。

L-NMMA对过量氟暴露引起的小鼠MC3T3E1成骨细胞中NO/iNOS表达的影响

目的探讨L-单甲基-精氨酸(L-NMMA)与过量氟化钠(NaF)共培养对小鼠颅顶前成骨(MC3T3E1)细胞中一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将MC3T3E1成骨细胞分为空白组(只含培养基)、NaF染毒组(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)及L-NMMA染毒组(0、5、10、20、40、80 mol/L),采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,并筛选最佳染氟浓度和最佳L-NMMA用药浓度;再将MC3T3E1成骨细胞分为对照组(0.0 mmol/L NaF)、低氟组(1.0 mmol/L NaF)、高氟组(4.0 mmol/L NaF)、低氟+L-NMMA组(1.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、高氟+L-NMMA组(4.0 mmol/L NaF+20μmol/L L-NMMA)、L-NMMA组(20μmol/L L-NMMA),处理24 h,采用硝酸还原酶法检测细胞中NO含量,蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法分别检测iNOS蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L NaF染毒组及80μmol/L L-NMMA染毒组MC3T3E1成骨细胞存活率降低(P<0.05),选择1.0 mmol/L和4.0 mmol/LNaF为染氟浓度、20μmol/LL-NMMA用药浓度进行后续实验;与对照组比较,低氟组、高氟组MC3T3E1成骨细胞中NO含量增加(P<0.05),低氟+L-NMMA组中NO含量低于低氟组(P<0.05),高氟+L-NMMA组细胞中NO含量低于高氟组(P<0.05);与对照组相比,高氟组MC3T3E1成骨细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);与高氟组比较,高氟+L-NMMA组细胞中iNOS蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论过量氟可致MC3T3E1成骨细胞损伤、iNOS蛋白和mRNA表达增强、细胞中NO含量增加,L-NMMA与氟共培养后可减弱这一效应,提示L-NMMA对过量氟所致MC3T3E1成骨细胞损伤有一定的保护作用。

L-3-n-丁基苯酞对急性缺血性脑卒中发病后1个月中性粒细胞和淋巴细胞计数的影响

目的:观察L-3-n-丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,NBP)对急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者发病后1个月中性粒细胞和淋巴细胞计数的影响。方法:将241例AIS患者纳入队列研究,根据患者是否使用NBP分为非NBP组和NBP组。在两组入院时和发病后1个月均进行血常规检查,并计算入院时和发病后1个月的中性粒细胞差值、淋巴细胞差值及中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophilto-lymphocyte ratio,NLR)差值,分析这些指标与使用NBP之间的关系。结果:241例AIS患者中,62例(25.7%)患者使用了NBP。与非NBP组比较,NBP组的中性粒细胞差值、NLR差值较高,发病后1个月的中性粒细胞计数、NLR、淋巴细胞差值较低(P<0.05)。中性粒细胞差值(校正OR=2.36,95%CI=1.12~4.83,P=0.006)、淋巴细胞差值(校正OR=0.85,95%CI=0.30~0.94,P=0.043)、发病后1个月NLR(校正OR=0.82,95%CI=0.34~0.98,P=0.046)与使用NBP独立相关。结论:NBP可显著降低AIS患者的中性粒细胞计数及NLR,并延缓外周淋巴细胞计数的下降。

基于碳纳米管/L-半胱氨酸/Fe_3O_4@Au纳米复合材料的电流型甲胎蛋白免疫传感器的研究

将DMF(N,N-二甲基甲酰胺)分散的多壁碳纳米管(MWNT)修饰在金电极表面,再将修饰电极依次沉积纳米金和L-半胱氨酸(L-Cys),并通过半胱氨酸中的巯基吸附Fe3O4@Au纳米复合材料,再固载甲胎蛋白抗体(anti-AFP),以牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性吸附位点,构建了高灵敏、稳定的新型电流型甲胎蛋白免疫传感器。实验通过扫描透射电子显微镜(TEM)对DMF-MWNT和Fe3O4@Au复合纳米粒子进行了表征。在优化的实验条件下,此免疫传感器对甲胎蛋白抗原的检测范围为0.1～150μg/L,检出限为0.03μg/L。

维生素D_3引起大鼠血管钙超载对血管L-精氨酸/NO途径的影响

目的：观察血管钙超载对Ｌ－精氨酸／ＮＯ途径的影响。方法：维生素Ｄ３（ＶｉｔＤ３）注射引起大鼠血管钙超载，检测血管ＮＯ生成、ｃＧＭＰ含量、Ｌ－瓜氨酸转化及Ｌ－精氨酸转运的变化，并与口服Ｌ－精氨酸治疗组大鼠比较。结果：大鼠血管钙含量（９４４±１８８）ｖｓ对照（１０７±１８）μｍｏｌ／ｇ干重，（Ｐ＜００１），血管ＮＯ生成减少，组织ｃＧＭＰ含量降低，但Ｌ－瓜氨酸转化增高，Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）高和低亲和性转运的最大速率（Ｖｍａｘ）分别降低５０５％和４５８％（Ｐ＜００１）。口服Ｌ－Ａｒｇ治疗的大鼠血管ＮＯ生成和ｃＧＭＰ含量都较钙超载大鼠明显增高（Ｐ＜００１），Ｌ－Ａｒｇ高、低亲和性转运的Ｖｍａｘ增加。结论：血管钙超载对Ｌ－Ａｒｇ／ＮＯ途径损伤的主要环节在Ｌ－Ａｒｇ的跨膜转运，补充ＮＯ前体Ｌ－Ａｒｇ可能减轻钙超载引起的血管损伤。

固定化细胞酶法拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸

利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸.考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响.确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50℃及底物浓度500mmol/L.10-4mol/L的Co2+和Mg2+对氨基酰化酶有显著激活作用,Cu2+和Zn2+对酶促反应有明显抑制作用.在最佳条件下,氨基酰化酶固定化细胞对N-乙酰-L-3-甲氧基丙氨酸的摩尔转化率达96%.

微生物絮凝剂L-3絮凝性能及废水处理研究

研究了影响微生物絮凝剂L 3絮凝活性的因素 ,并考察了其在染料废水处理方面的应用前景。结果表明 ,该絮凝剂絮凝膨润土悬浮液的最适宜pH值为 8,Ca2 + 、Mg2 + 等阳离子对其絮凝具有促进作用 ,对酸性湖兰A、碱性品红、活性翠绿KN R和直接深紫NM具有较好的脱色性能 ,脱色率分别达到 93%、84 2 %、75 5 %和 86 %。对赣州毛纺厂印染废水的处理结果为 :脱色率达 94 0 % ,COD去除率为 70 8%。

1-乙基-3-甲基咪唑L-乳酸盐作为手性配体用于氨基酸的手性拆分

基于手性配体交换机理,研究了以手性离子液体1-乙基-3-甲基咪唑L-乳酸盐([EMIM][L-Lac])为手性配体拆分色氨酸对映体(Trys)、苯丙氨酸对映体(Phes)和酪氨酸对映体(Tyrs)的方法。实验考察了背景电解质和中心离子种类、手性配体与中心离子的浓度及比例、运行缓冲液pH等因素对Trys、Phes和Tyrs手性拆分的影响。研究发现,当运行缓冲液为40.0 mmol/L[EMIM][L-Lac]、20.0 mmol/L氯化铜(pH 4.5)时,3对对映体均能得到良好的手性拆分。为了验证[EMIM][L-Lac]的良好性能,实验进一步将L-乳酸(L-Lac)作为手性配体用于Trys的手性拆分。对比实验发现,单独使用L-乳酸,DL-Try只能得到部分拆分,加入离子液体1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐(EMIM-Ace)后,DL-Try分离情况得到了很大改善,但出峰时间延长至30 min以上。而使用[EMIM][L-Lac]时,Trys的出峰时间均在15 min以内。实验最后还对手性拆分机理做了进一步讨论。实验结果表明:在EMIM-Ace辅助L-Lac体系中,EMIM-Ace仅被用于抑制电渗流,并未参与手性配体交换反应;而在[EMIM][L-Lac]体系中,参与手性配体交换反应的主要是未解离的[EMIM][L-Lac],而不是解离后的L-乳酸根离子形成的L-乳酸。

应用微载体Cytodex3高密度培养L-02人肝细胞系

目的 探讨用微载体进行 L - 0 2人肝细胞系高密度培养的方法 ,以期为生物人工肝提供有应用价值的生物材料。 方法 在限制贴壁的条件下 ,采用 Cytodex3为材料进行 L- 0 2人肝细胞的微载体培养 ,诱导肝细胞聚集体的形成 ,定期进行细胞计数及培养上清白蛋白、尿素、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (L DH )等生化指标的检测 ,并在光镜和透射电镜下观察生长情况。 结果 培养至第 6天时 ,所有的微载体均包满细胞 ,并形成微载体诱导的肝细胞聚集体 ,细胞数量达最高峰为 (17.1± 0 .76 )× 10 7/瓶 ,同时白蛋白和尿素的合成亦最高 ,浓度分别为5 3.81± 1.6 4m g/ L 和 5 .35± 0 .13m mol/ L。 结论 Cytodex3培养的 L- 0 2人肝细胞可形成高密度的肝细胞聚集体 ,具有一定的生物合成和代谢功能。

TiCl_3法快速筛选L-苹果酸高产突变株

[目的]探讨并验证TiCl3法筛选L-苹果酸高产突变株的可行性。[方法]将34株米根霉诱变株及出发株（CK）分别接种到含葡萄糖的发酵培养基中发酵96 h,发酵液经稀释后加入TiCl3,根据沉淀发生情况,筛选L-苹果酸高产突变株。[结果]当发酵液稀释40倍时,有4株诱变株发酵液产生沉淀,而出发株发酵液未产生沉淀。据此筛选出4株发生显著正突变的诱变株,其L-苹果酸产量约为16～20g/L。其发酵液经HPLC测定分析,表明4株突变株发酵液中L-苹果酸的产量为15.88～18.26 g/L,而出发株L-苹果酸产量为11.76 g/L,突变株L-苹果酸产量增幅达35%～55%。[结论]TiCl3法可有效应用于L-苹果酸高产突变株的筛选。

氧化乐果降解菌假单胞菌L-3发酵条件优化的研究

为确定氧化乐果降解菌假单胞菌L-3最佳的生长条件和最优的碳氮比,在含一定浓度氧化乐果的液体普通培养基中,对菌株在不同温度、pH值、通气量、接种量条件下发酵培养,通过测定光密度值绘制生长曲线;在氧化乐果的基础发酵培养基中选出最适的碳源和氮源,优化出碳氮源的最佳配比。结果表明,L-3最佳生长条件为30℃、pH7.0、接种量3%(装液量100mL);最佳的碳源、氮源分别为蔗糖和NH4NO3;最适的碳氮比为6∶5。

L—精氨酸(L-Arg)和NaHCO_3降低肉鸡腹水综合征病死率的田间试验

1800只3周龄肉仔鸡随机分成3组,每组600只。其中第Ⅰ组为正常对照组,饲喂基础日粮;第Ⅱ组为NaHCO3试验组,饲喂基础日粮加0.3%NaHCO3;第Ⅲ组为L—Arg试验组,饲喂基础日粮加1%L—Arg。在常规条件下饲养8周,对自然死亡的肉仔鸡进行病理剖检,凡腹腔有大量腹水、PCV和AHI显著升高的,判定为死于肉鸡腹水综合征。结果对照组腹水综合征病死率为3.17%,显著地高于NaHCO3组的1.33%和L—Arg组的1.17%(P<0.05);NaH-CO3组病死率略高于L—Arg组,但差异不显著(P>0.05)。试验表明:在生产实际中,日粮中添加1%的L—Arg或0.3%的NaHCO3均可以很好地预防因腹水综合征引起的死亡;在日粮精氨酸含量为1.35%和1.18%的基础上额外添加1%的L—Arg是有益的。

d,l-2-乙酰氨基-3-(3′-吲哚)丙酸的制备和拆分研究

以3-吲哚基-甲基-乙酰氨基丙二酸二乙酯为原料，经选择性水解制备d，l-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸，最佳反应条件是：反应温度70～80℃，反应时间为6h，物料3-吲哚基-甲基-乙酰氨基丙二酸二乙酯与氢氧化钠的摩尔比为1：2.5，产率可达到84.4％ 研究了利用对硝基苯基-2-氨基-1，3-丙二醇为拆分剂对d，l-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸进行拆分，d-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸的拆分纯度为98％。

螺[1-氯-4-l-孟氧基-5-氧杂-6-氧代双环[3·1·0]己烷-2,3'-(4'-吗啉基-5'-l-孟氧基丁内酯)]合丙酮的合成及晶体结构

利用新手性源,5-(l-孟氧基)-3-氯-2(5H)-呋喃酮4与亲核试剂吗啉通过串联不对称双Michael加成/分子内亲核取代反应合成了一般方法难以得到的含有多个手性中心的螺-环丙烷双内酯化合物C32H50O7NCl.其单晶为C32H50O7NCl(OC3H6)0.5,正交晶系, 空间群为P212121, 晶胞参数a = 17.149(3), b = 20.384(4), c = 10.831(2) , V = 3786.1(12) 3, Z = 4, Dc = 1.097 g/cm3, F(000) = 1352, μ= 0.144 mm-1; 射线类型为MoK?( = 0.71073 ?, 偏离因子R = 0.0755, wR = 0.1956, 独立衍射点3710个, 其中可观测点数2318个.分子中共有六个环, 12个手性中心, 3个六元环呈椅式构象, 两个五员内酯环呈信封式构象, 并分别与环丙烷形成[2.4]螺环和 [3.1.0] 稠环, 4个新生成的手性中心的绝对构型为C(3)(S), C(4)(S), C(5)(R), C(8)(R).

L-3-氟-酪氨酸的合成研究

以L-酪氨酸为原料,经由羧基、氨基保护后,在其苯环上3-位直接硝化,硝化后的产物在铁粉和醋酸的作用下还原成3-位氨基的衍生物,再重氮化、光照下发生氟代反应,最后,氟代完成后的产物盐酸水解除去保护基后,即得到光学纯的L-3-氟-酪氨酸。经熔点、旋光度、1H-NM R及M S检测,结果与文献值一致。本文方法是合成L-3-氟-酪氨酸的理想方法。

N-Boc-3-碘锌-L-丙氨酸甲酯的合成研究

以天然存在的手性氨基酸 L-丝氨酸为原料 ,经酯化、氨基保护后再把 3-位上的羟基对甲苯磺酰化 ,然后碘代生成 3-碘代丙氨酸衍生物 ,再与活化锌粉在超声波作用下生成 N- Boc- 3-碘锌 - L-丙氨酸甲酯 ,这种产物是合成氟代酪氨酸的中间体。利用 1 H- NMR,IR和 MS对 N- Boc- 3-碘锌 -

D,L-乳酸-1,3,5-苯三氧乙酸共聚物的合成与表征

为了研究聚乳酸(PLA)在长效农药缓释方面的应用,以D,L-乳酸和植物生长调节剂1,3,5-苯三氧乙酸为原料,采用工艺简单、成本低廉的直接熔融聚合法合成了可生物降解的D,L-乳酸-1,3,5-苯三氧乙酸共聚物。用1HNMR、GPC、XRD、IR、DSC、特性黏度等手段对聚合物的结构与性能进行了表征。所得共聚物的重均分子量Mw可达到3000以上,玻璃化温度为10.56℃,熔点为118.0℃,有望应用于农药缓释领域。

固体酸SO_4^(2-)/ZrO_2-Fe_2O_3催化合成L-乳酸酯的研究

将固体酸SO42-/ZrO2-Fe2O3用于催化L-乳酸和2-异亚丙基氨基氧基乙醇的酯化反应。确定了最佳反应条件:带水剂为甲苯,醇酸摩尔比为3.5:1,催化剂用量为L-乳酸质量的6%,反应时间为8 h,在此条件下酯化率可达62.5%。

米根霉SOI106-3玉米粉深层发酵生产L-乳酸

报道了米根霉(Rhizopous Orzae)SOI106-3以玉米粉为原料深层发酵生产L-乳酵。探讨了不同氮源、磷酸盐、底物浓度、温度以及不同液化时间、种龄及碳酸钙的不同添加方式对L-乳酸生成的影响,确定了最适发酵培养基组成和配比。在5 L发酵罐中,当玉米粉投料质量浓度为130 g/L时,5罐平均产L-乳酸85.05 g/L,对糖转化率77.32%。本研究表明,米根霉SOI106-3菌株具有L-乳酸产酸高和发酵快的特点。

C3A细胞与L-02永生化肝细胞低温保存条件下的生物学特性比较

背景:获得大量功能良好的肝细胞是生物人工肝的核心。探索出一种可靠的肝细胞低温保存方法进而构建一个肝细胞库是目前生物人工肝研究的热点。目的:比较用UW液在4℃条件下保存已经进入Ⅲ期临床试验的C3A细胞与国内构建的永生化肝细胞株L-02细胞的生物学特性。方法:贴壁培养C3A与L-02细胞,胰酶消化,制备成细胞悬液,UW液保存。4℃低温保存0,24,48及72h后,采用流式细胞术分别测定细胞存活率与凋亡率,测定谷草转氨酶与乳酸脱氢酶释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果与结论:随低温保存时间延长,C3A与L-02细胞存活率呈下降的趋势,但C3A细胞的存活率明显高于L-02细胞(P<0.01);细胞凋亡率呈上升趋势,但48h后C3A细胞同L-02细胞无差异(P>0.05)。谷草转氨酶及乳酸脱氢酶释放呈现上升的趋势,但C3A细胞明显低于L-02细胞(P<0.01)。白蛋白分泌功能呈下降的趋势,但C3A细胞明显优于L-02细胞(P<0.01)。尿素合成功能呈下降的趋势,但是L-02细胞明显优于C3A细胞(P<0.01)。结果提示,UW液4℃保存C3A细胞与L-02细胞时间不易超过48h。以C3A细胞为材料的人工肝可能更适用于肝功能衰竭合并低白蛋白血症,以L-02细胞为材料的人工肝更适用于肝功能衰竭合并肝性脑病。