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催乳素通过酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5信号通路促进奶牛乳腺上皮细胞乳铁蛋白合成和分泌
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作者 杨跃杰 连帅 +1 位作者 武瑞 王建发 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1916-1926,共11页
本试验旨在研究催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白(LF)合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0(对照)、10、100、1000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF... 本试验旨在研究催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白(LF)合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0(对照)、10、100、1000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF含量和LF、催乳素受体(PRLR)以及JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达的影响。为了验证STAT5在PRL促进BMECs LF合成和分泌的关键作用,添加STAT5抑制剂匹莫齐特(Pimozide)[未添加Pimozide(对照)、10μmol/L Pimozide、100 ng/mL PRL、10μmol/L Pimo⁃zide+100 ng/mL PRL]处理BMECs 24 h,测定PRL和Pimozide对LF含量和LF、JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达以及相对荧光强度的影响。结果表明:1)与对照组相比,10、100、1000 ng/mL PRL能够显著或极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组能够极显著降低BMECs上清液中的LF含量(P<0.01);PRL组能够极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.01)。2)与对照组相比,10 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2及STAT5基因相对表达量显著升高(P<0.05);100 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2和STAT5基因相对表达量极显著升高(P<0.01);1000 ng/mL PRL组PRLR和STAT5基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);Pimozide组LF基因相对表达量显著降低(P<0.05);PRL组BMECs中LF基因相对表达量显著升高(P<0.05)。3)100、1000 ng/mL PRL组BMECs中LF蛋白表达量极显著升高(P<0.01);10、100、1000 ng/mL PRL显著或极显著提高BMECs中p⁃JAK2/JAK2和p⁃STAT5/STAT5表达量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组和Pimo⁃zide+PRL组极显著降低BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01)。4)Pimozide组和Pimozide+PRL组显著或极显著降低BMECs中LF或p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.05或P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF和p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.01)。综上所述,PRL通过JAK2/STAT5信号通路促进BMECs中LF合成和分泌。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 催乳素 信号通路 基因表达调控
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整合人lactoferrin基因的山羊体细胞支持核移植克隆胚的体外发育 被引量:2
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作者 李兰 沈伟 +5 位作者 潘庆玉 闵令江 孙玉江 房勇为 邓继先 潘庆杰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1513-1519,共7页
克隆了人lactoferrin基因和山羊β-casein基因5′端调控区,构建了人lactoferrin的乳腺表达载体,并将该载体利用脂质体介导转染了奶山羊胎儿成纤维细胞,获得了稳定整合人lactoferrin基因的转基因体细胞克隆17个,其中PCR和SouthernBlot检... 克隆了人lactoferrin基因和山羊β-casein基因5′端调控区,构建了人lactoferrin的乳腺表达载体,并将该载体利用脂质体介导转染了奶山羊胎儿成纤维细胞,获得了稳定整合人lactoferrin基因的转基因体细胞克隆17个,其中PCR和SouthernBlot检测阳性的细胞克隆14个,阳性率82.4%。以转基因体细胞为供体细胞进行了核移植,获得了能够体外发育的山羊转基因克隆胚胎,体内成熟卵母细胞来源的核移植囊胚率为64.8%,体外成熟卵母细胞来源的核移植囊胚率为51.7%,证明了山羊转基因体细胞能够支持克隆胚的进一步发育。 展开更多
关键词 lactoferrin基因 转基因 核移植 山羊 乳腺生物反应器
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Preparation and Characterization of Cationic PLGA-PEG-Lf/DOPE Nanoparticles for HO-1 Gene Delivery 被引量:1
3
作者 宋远见 魏贤勇 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2012年第2期217-221,共5页
Cationic nanoparticles (NPs) for gene delivery were successfully prepared by assembling earboxylation poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA), polyethylene glycol (PEG), L-ct-Phosphatidylethanolamine (DOPE) and... Cationic nanoparticles (NPs) for gene delivery were successfully prepared by assembling earboxylation poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA), polyethylene glycol (PEG), L-ct-Phosphatidylethanolamine (DOPE) and octadecyl quaternized carboxymethyl chitosans (OQCMC). Lactoferrin (Lf) was selected as a targeting ligand conjugated to PLGA via bifunctional PEG, yielding PLGA-PEG-Lf/DOPE NPs to be used for gene vectors. Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), UV and nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy were performed to evaluate the synthesis of the vectors. The characteristics of the vectors loaded heine oxygenase (HO-1) gene were evaluated by transmission electron microscope (TEM), particle size analyser and fluorescent microscopy. The experimental results showed that the obtained vectors were spherical in shape with average particle size of 142.2 nm and zeta potentials of +16.4 inV. The vectors could protect the loaded gene from the degradation by nuclease. For 293T cells, there is high transfection efficiency of the vectors similar to liposome-2000. It can be concluded that the established cationic PLGA-PEG-Lf/DOPE NPs have potential gene delivery ability for gene therapy. 展开更多
关键词 PLGA nanoparticles PEGYLATION gene delivery lactoferrin
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奶牛乳铁蛋白基因启动子区PCR-RFLP分析与乳房炎的相关性 被引量:12
4
作者 张利军 蔡亚非 +3 位作者 刘庆华 宋维龙 李莲 王根林 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期87-91,共5页
采用CMT方法检测奶牛的乳房炎发病情况.筛选 90头分别设为对照组(健康奶牛)、隐性乳房炎组 (试验组Ⅰ )和临床乳房炎组(试验组Ⅱ),每组 30头.检测每头奶牛的NAGase活性,并用限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术,检测乳铁蛋白(Lf)基因... 采用CMT方法检测奶牛的乳房炎发病情况.筛选 90头分别设为对照组(健康奶牛)、隐性乳房炎组 (试验组Ⅰ )和临床乳房炎组(试验组Ⅱ),每组 30头.检测每头奶牛的NAGase活性,并用限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术,检测乳铁蛋白(Lf)基因启动子区域的RFLP多态性.结果表明:不同组别的奶牛之间NAGase活性差异显著 (P<0. 01),且Lf基因启动子区域存在RFLP多态性,说明该多态性与乳房炎存在一定关系,可能是奶牛乳房炎的一个分子标记. 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 隐性乳房炎 F基因 PCR-RFLP分析 分子标记 多态性 乳铁蛋白 NAG 基因启动子区 相关性
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奶牛乳铁蛋白基因5′侧翼区PCR-SSCP多态性分析 被引量:10
5
作者 李国华 张沅 +1 位作者 孙东晓 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期827-830,共4页
采用PCR SSCP技术 ,对奶牛乳铁蛋白基因 5′侧翼区 112 2bp序列进行多态性分析。在该区所划分的 5个亚片段上 ,发现Blf5′ 1(2 2 7bp) ,Blf 5′ 3(175bp)和Blf5′ 5 (2 93bp) 3个DNA片段存在多态。进一步对这 3个片段进行测序分析 ,在Bl... 采用PCR SSCP技术 ,对奶牛乳铁蛋白基因 5′侧翼区 112 2bp序列进行多态性分析。在该区所划分的 5个亚片段上 ,发现Blf5′ 1(2 2 7bp) ,Blf 5′ 3(175bp)和Blf5′ 5 (2 93bp) 3个DNA片段存在多态。进一步对这 3个片段进行测序分析 ,在Blf 5′ 1序列中 ,发现位于转录起始位点上游 - 92 6和 - 915位分别有G→A及T→G点突变 ;在Blf5′ 3片段中 ,- 4 78位存在G的插入 ;Blf 5′ 5位点上 ,发生 - 2 8位的C颠换为A和 +33位的G颠换为C两处突变。利用TFSEARCH (ver.1 3)软件对乳铁蛋白基因 5′侧翼区潜在调控元件及蛋白质结合位点进行了预测 ,结果显示 展开更多
关键词 乳铁蛋白基因 PCR—SSCP 调控因子
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人乳铁蛋白基因转化胡萝卜研究初报 被引量:36
6
作者 郑回勇 郑金贵 黄碧芳 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第2期215-217,共3页
乳铁蛋白具有抗菌、抗病毒感染和促进 Fe吸收等多种功能 .把人乳铁蛋白基因转入胡萝卜 ,为其添加新的营养保健因子 ,同时增强植株抗性 ,具有重要意义 .本试验把人乳铁蛋白基因插入 p BIN1 2 1质粒 Xba 、Sac 位点之间 ,经农杆菌介导 ,... 乳铁蛋白具有抗菌、抗病毒感染和促进 Fe吸收等多种功能 .把人乳铁蛋白基因转入胡萝卜 ,为其添加新的营养保健因子 ,同时增强植株抗性 ,具有重要意义 .本试验把人乳铁蛋白基因插入 p BIN1 2 1质粒 Xba 、Sac 位点之间 ,经农杆菌介导 ,转入胡萝卜受体 ,在抗性筛选培养基上诱导形成抗性愈伤组织 ,进而经胚状体途径得到抗性苗 .经 PCR检测 。 展开更多
关键词 胡萝卜 人乳铁蛋白 遗传转化 乳铁蛋白基因
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乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达 被引量:12
7
作者 张锦霞 王铁东 +2 位作者 张守峰 郭学军 扈荣良 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第2期229-233,共5页
根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽(LfcinB)25个氨基酸的mRNA序列,设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物,用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因(包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子),并将此基因克... 根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽(LfcinB)25个氨基酸的mRNA序列,设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物,用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因(包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子),并将此基因克隆到载体pI-B,获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL,该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织(注射量为400μg),以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示,注射后3~48h,奶样有明显抑菌活性,其中3~9h抑菌活性最高。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 乳铁蛋白肽 基因合成 乳腺特异性表达
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转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的研究 被引量:7
8
作者 郑月茂 刘凤军 +1 位作者 何小宁 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1282-1286,共5页
利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因的重组质粒,并导入到山羊乳腺上皮细胞,经G418及PCR筛选获得阳性细胞;转染细胞增殖后经激素诱导,培养液上清通过Western blot检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,其分子质量为58 ku。
关键词 人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体 绿色荧光蛋白 转基因山羊乳腺上皮细胞
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隐性乳房炎奶牛IL-8受体与乳铁蛋白基因的PCR-SSCP分析 被引量:4
9
作者 何高明 张素华 +1 位作者 赵宗胜 李大全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期136-140,共5页
本研究旨在探讨IL-8受体基因、乳铁蛋白基因多态性与奶牛乳房炎的相互关系。试验采用PCR-SSCP技术分别对80头健康奶牛和隐性乳房炎奶牛的IL-8受体基因和乳铁蛋白基因进行了多态性检测,并分析了它们与奶牛乳汁中体细胞数的关系。PCR-SSC... 本研究旨在探讨IL-8受体基因、乳铁蛋白基因多态性与奶牛乳房炎的相互关系。试验采用PCR-SSCP技术分别对80头健康奶牛和隐性乳房炎奶牛的IL-8受体基因和乳铁蛋白基因进行了多态性检测,并分析了它们与奶牛乳汁中体细胞数的关系。PCR-SSCP分析结果表明,IL-8受体CXCR1基因SSCP-5、SSCP-7在健康奶牛个体中出现程度较高,说明其个体对隐性乳房炎表现抗性;在乳铁蛋白基因5′调控区的不同基因型中,AB基因型个体对奶牛隐性乳房炎表现抗性。 展开更多
关键词 隐性乳房炎 IL-8受体基因 乳铁蛋白基因 PCR-SSCP
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根癌农杆菌转化甘薯高频获得抗性愈伤组织的研究 被引量:8
10
作者 罗红蓉 张勇为 张义正 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第S1期21-24,共4页
作者用根癌农杆菌LBA4 4 0 4转化甘薯 8个品系 (该农杆菌携带有含人乳铁蛋白基因 (hLFc)的表达质粒 pCSL2 34) ,研究了转化甘薯的频率 .结果转化有效叶片 2 4 9片 ,共获得 6 5个抗性愈伤组织 ,平均转化频率为 2 6 .10 %,有 14.4 6 %的... 作者用根癌农杆菌LBA4 4 0 4转化甘薯 8个品系 (该农杆菌携带有含人乳铁蛋白基因 (hLFc)的表达质粒 pCSL2 34) ,研究了转化甘薯的频率 .结果转化有效叶片 2 4 9片 ,共获得 6 5个抗性愈伤组织 ,平均转化频率为 2 6 .10 %,有 14.4 6 %的叶片发生了转化 .不同品种的转化频率有很大的差异 ,从 0~ 6 9.35 %,表明转化频率受基因型的影响很大 ,94 0 3 4是一个重要的高转化频率甘薯品系 .该研究中采用的完整叶片转化方法是一种较好的改良叶盘转化法 . 展开更多
关键词 甘薯 人乳铁蛋白基因 根癌农杆菌 转化
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人乳铁蛋白基因转化银耳的研究 被引量:4
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作者 朱坚 饶永斌 +4 位作者 谢宝贵 刘新锐 孙淑静 郑域茹 陈东兴 《热带作物学报》 CSCD 2010年第7期1137-1142,共6页
利用电穿孔转化法,把携带人乳铁蛋白基因(hlf)的银耳表达载体pCB-hlf导入银耳芽孢菌株Tr21,用PCR鉴定该基因阳性转化子,检测转基因菌株的GUS活性,并用Southern杂交检测hlf的插入位点。结果表明:电穿孔转化法的转化率可达到9.25×106... 利用电穿孔转化法,把携带人乳铁蛋白基因(hlf)的银耳表达载体pCB-hlf导入银耳芽孢菌株Tr21,用PCR鉴定该基因阳性转化子,检测转基因菌株的GUS活性,并用Southern杂交检测hlf的插入位点。结果表明:电穿孔转化法的转化率可达到9.25×106个/μg质粒DNA;抗性筛选的阳性转基因菌株中均能扩增出与预期大小相符的hlf、GUS和Tnos序列,且GUS基因在转基因菌株中均有表达。Southern杂交结果表明,不同转基因菌株hlf的插入位点不同,有些菌株插入了2个或更多的拷贝。RT-PCR结果表明,外源基因在银耳中能正常转录成RNA。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白基因 表达载体 银耳 电穿孔 转化
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牛奶中乳铁蛋白含量的影响因素及调控机制研究进展 被引量:6
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作者 程金波 王加启 +2 位作者 刘光磊 张春刚 卜登攀 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期137-140,共4页
乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,广泛存在于哺乳动物的分泌物中。研究表明,乳铁蛋白具有多种生物学功能。本文就牛奶中乳铁蛋白含量的影响因素及其基因调控特点方面的研究做简要综述。
关键词 乳铁蛋白 含量 基因调控
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IL-8受体和乳铁蛋白基因多态性与奶牛隐性乳房炎关系的初步研究 被引量:4
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作者 何高明 李大全 孙庆华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第B08期251-254,共4页
采用PCR-SSCP技术分别对80头健康和隐性乳房炎奶牛的IL-8受体基因、乳铁蛋白基因进行了多态性检测,并与相对应的奶牛乳汁中的体细胞数进行了相关分析,结果表明,两者都与奶牛隐性乳房炎存在关联;在IL-8受体CXCR1基因PCR-SSCP分析中,SSCP5... 采用PCR-SSCP技术分别对80头健康和隐性乳房炎奶牛的IL-8受体基因、乳铁蛋白基因进行了多态性检测,并与相对应的奶牛乳汁中的体细胞数进行了相关分析,结果表明,两者都与奶牛隐性乳房炎存在关联;在IL-8受体CXCR1基因PCR-SSCP分析中,SSCP5、SSCP7在健康奶牛个体中出现程度较高,说明个体对隐性乳房炎表现较好的抗性;在乳铁蛋白基因5′调控区的不同基因型中,SSCP1对奶牛隐性乳房炎有很好的抗性。 展开更多
关键词 隐性乳房炎 IL-8受体基因 乳铁蛋白基因 PCR-SSCP
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不同猪种乳铁蛋白基因启动子区单核苷酸多态性分析 被引量:1
14
作者 刘晓静 姚志文 +5 位作者 李兆能 何必宏 吴琳兰 高萍 李加琪 张爱玲 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期151-153,共3页
通过构建DNA池和测序,分析了广东蓝塘猪、大花白猪和外来长白猪3个猪种的乳铁蛋白基因启动子区和部分5′UTR区1 494 bp的单核苷酸多态性。结果表明,在3个猪种中发现了24处单核苷酸突变,其中12处为转换,8处为颠换,3处为插入,1处为缺失突... 通过构建DNA池和测序,分析了广东蓝塘猪、大花白猪和外来长白猪3个猪种的乳铁蛋白基因启动子区和部分5′UTR区1 494 bp的单核苷酸多态性。结果表明,在3个猪种中发现了24处单核苷酸突变,其中12处为转换,8处为颠换,3处为插入,1处为缺失突变。通过生物信息学方法预测了猪乳铁蛋白基因启动子转录因子结合位点,发现了5个SNP:-1032A>G、-989C>T、-740T>G、-732G缺失、-680A>G,分别位于PEA3、cAMP、STAT5、SRY转录因子结合位点上,其中-1032 A>G产生了MYT1结合位点,-680A>G导致了SRY结合位点消失,引起了转录因子结合位点的改变,但是否对启动子转录活性有影响还需要进行深入研究。 展开更多
关键词 乳铁蛋白基因 启动子 单核苷酸多态性
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重组人乳铁蛋白对幽门螺杆菌抑菌作用的实验研究 被引量:3
15
作者 罗娟 成国祥 +10 位作者 袁渝萍 张爱民 刘雪芳 刘思国 边莉 陈建泉 张磊 董向前 杨刚 南琼 马岚青 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第10期1302-1305,共4页
目的评估重组人乳铁蛋白(rhLF)对幽门螺杆菌(H.pylori)的抑菌作用及其对细胞毒素相关蛋白A(CagA)、尿素酶(Ure)和胃黏膜白细胞介素8(IL-8)的影响。方法测定最低抑菌浓度(MIC)和不同药物浓度对H.pylori增殖的影响。通过实时定量PCT和West... 目的评估重组人乳铁蛋白(rhLF)对幽门螺杆菌(H.pylori)的抑菌作用及其对细胞毒素相关蛋白A(CagA)、尿素酶(Ure)和胃黏膜白细胞介素8(IL-8)的影响。方法测定最低抑菌浓度(MIC)和不同药物浓度对H.pylori增殖的影响。通过实时定量PCT和Western blot检测rhLF对H.pylori CagA和Ure的mRNA和蛋白表达的影响。动物实验,144只BABL/c小鼠,分为4组,标准三联+rhLF组(A组)、rhLF组(B组)、标准三联组(C组)、生理盐水组(D组),组织病理学苏木素-伊红(HE)染色观察不同分组间胃黏膜炎性反应,ELISA法检测各组胃组织IL-8水平。结果 MIC为0.5mg/mL,且rhLF抑制细菌生长增殖呈现浓度依赖性过程。rhLF能降低H.pylori主要毒力因子CagA、Ure mRNA和蛋白的表达。A组胃黏膜组织炎症积分和匀浆液IL-8水平与B、C、D组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rhLF抑制H.pylori生长及增殖,并不同程度抑制H.pylori主要毒力因子CagA、Ure mRNA及蛋白的表达,削弱该菌的致病性,同时降低小鼠胃黏膜IL-8水平,减轻H.pylori相关性胃黏膜炎性反应。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 乳铁蛋白 细胞毒素相关蛋白A 尿素酶 白细胞介素8
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用原位杂交法定位猪乳铁蛋白基因于染色体2q^(12) 被引量:4
16
作者 何新 陈清轩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期96-100,共5页
本研究以非放射性标记的猪乳铁蛋白(PorcineLactoferin简称PLF)cDNA为探针,通过染色体原位杂交法,对PLF基因进行了染色体定位。实验中采用金胶抗体技术并结合使用银增强系统,提高了方法的灵敏度。利用... 本研究以非放射性标记的猪乳铁蛋白(PorcineLactoferin简称PLF)cDNA为探针,通过染色体原位杂交法,对PLF基因进行了染色体定位。实验中采用金胶抗体技术并结合使用银增强系统,提高了方法的灵敏度。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行统计学分析。52%(26/50)的分裂相在第2号染色体具银粒分布,实验结果表明:PLF基因定位于猪2号染色体2q12区域。 展开更多
关键词 猪乳铁蛋白 铁蛋白 原位杂交 基因定位
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乳铁蛋白的生物学功能及其基因工程研究进展 被引量:6
17
作者 单体中 汪以真 《中国饲料》 北大核心 2005年第10期10-12,共3页
乳铁蛋白是一种具有多种生物活性的糖蛋白。本文主要就乳铁蛋白的生物学功能及其基因工程研究进展作一综述。
关键词 乳铁蛋白 生物学功能 基因工程
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人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证 被引量:6
18
作者 袁玉国 安礼友 +2 位作者 于宝利 杨廷佳 成勇 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期6-10,共5页
构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂... 构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白 双标记基因 双启动子 小鼠 胎儿成纤维细胞 荧光蛋白
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乳铁蛋白的分子特性及其基因表达调控研究进展 被引量:5
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作者 程金波 王加启 卜登攀 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第5期5-9,共5页
乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白,广泛存在于哺乳动物的分泌物中。研究报道,乳铁蛋白具有多种生物学功能。作者就乳铁蛋白的分子特性、生物学功能、作用机理以及基因表达调控方面的研究作了简要评述。
关键词 乳铁蛋白 分子特性 生物学功能 基因表达调控
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乳铁蛋白及乳铁蛋白肽结构抗菌功能及基因表达 被引量:10
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作者 汪以真 胡迎利 +1 位作者 许梓荣 林文学 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期53-54,共2页
乳铁蛋白 (LF)是一种天然的铁结合蛋白。乳铁蛋白肽 (Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的 2 5个氨基酸残基的小肽。本文综述了LF和Lfcin的结构。
关键词 乳铁蛋白 乳铁蛋白肽 结构特征 抗菌功能 基因表达
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