16-Hydroxytriptolide" An Active Compound from Tripterygium wilfordii

From the dried roots and leaves of Tripterygium wilfordii^(1.2),a new diter- penoid triepoxide,16-hydroxytriptolide was isolated,and its structure and stereochemistry elucidated as 16-(S)-hydroxy-triptolide on the basis of spectral data(IR, MS, UV,~1HNMR,^(13)CNMR,2d-NMR,Selective Long-range DEPT)and x-ray crystallographic analysis.This compound showed definite antiinflammatory action,strong immunosuppressive and antifertile activities.In addition,a known compound,triptolide was also isolated and all the spectral signals of^1 HNMR and ^(13)CNMR were assigned.

雷公藤内酯醇调控Notch4蛋白影响舌鳞癌CAL27细胞活性

目的 探讨雷公藤内酯醇对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞系CAL27活性和Notch4表达的影响。方法 分别使用0、20、40、80 ng·mL~(-1)雷公藤内酯醇对CAL27细胞进行干预,并依次分为T0组(对照)、T20组、T40组和T80组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,采用Transwell小室检测细胞侵袭能力,采用划痕实验检测细胞迁移率,采用免疫印迹法检测各组细胞Notch4蛋白表达量。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞Notch4 mRNA相对表达量。结果 与T0组相比,T20组、T40组和T80组培养24、48、72h细胞增殖率均逐渐降低(P<0.05),且T20组、T40组和T80组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。T0组、T20组、T40组和T80组早期凋亡率、总凋亡率均依次增加(P<0.05),T80组晚期凋亡率高于T0组、T20组和T40组(P<0.05),而T0组、T20组和T40组晚期凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。T0组、T20组、T40组和T80组细胞侵袭和迁移率均依次降低(P<0.001)。与T0组比较,T20组、T40组和T80组Notch4表达均逐渐降低(P<0.05),且T20组、T40组、T80组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 雷公藤内酯醇通过调控Notch4蛋白使舌鳞癌细胞系CAL27生物活性降低,促使其凋亡,其机制可能与抑制Notch4蛋白表达相关。

雷公藤抗炎免疫及抗生育活性成份的筛选——Ⅲ.7个环氧二萜内酯化合物体内抗炎免疫活性的比较

用巴豆油诱发的小鼠耳炎症模型及小鼠溶血素抗体生成模型作指标,测定从雷公藤中分离的7个环氧二萜内酯化合物的抗炎及免疫抑制活性的半数有效剂量(ED_(50))、治疗指数(TI)和可靠安全系(CSF)。结果表明:雷藤内酯醇(T10)、雷藤氯内酯醇(T4)、雷藤内酯酮(T7)、雷藤内酯二醇(T8)、雷醇内醋(T9)和16-羟基内酪醇(L2)兼有抗炎、免疫抑制活性;而雷藤内酯三醇(T11)仅具抗炎活性。7个合物抗炎作用的TI由大至小依序为:T11(>19)、T10(17)、T9(9.6)、T4(9.0)、T8(7.3)、L2(6.6)、T7(5.9);6个化合物免疫抑制作用的TI依序为:T9(30.7)、T4(16.7)、L2(15.8)、T10(13.7)、T8(8.8)、T7(7.5)。全部化合物的抗炎、免疫抑制作用的CSF都大于1,其中T9、T4、L2免疫抑制作用的CSF分别为7.1、5.1和3.6。这显示雷公藤抗炎免疫有效成份是多元的。这些差别可作为化合物药用评价和选择的依据之一。然而,这些化合物的实用价值还取决于它们在药材中的含量和得率,合成和衍生物制备的难易以及遗传毒性检测的结果。

雷酚内酯的结构修正

雷公藤别名黄藤,系卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)。其根有舒筋活血,祛风湿,消肿止痛的功效,多用于类风湿关节炎的治疗。根皮中含有生物碱、甙、萜以及其它成分。

雷公藤抗炎免疫及抗生育活性成份的筛选 Ⅳ.7个环氧二萜内酯化合物体内雄性抗生育活性的比较

本文用小鼠模型,以等毒剂量,检测了从雷公藤中分离的7个环氧二萜内酯化合物的雄性抗生育活性及在有效阈剂量下对溶血素抗体生成的影响。结果表明:在7个化合物中,6个(T4、T7、8T、T9、T10、及L2)具有明确的抗生育活性,其中T7、T8、T10、L2有效阈剂量为1/40 LD50,T4、T9为1/60 LD50;而T11无此活性。实验再次证实化合物的抗生育活性与免疫抑制活性不可分割,但是所有活性化合物在阈值抗生育总剂量下均不抑制小鼠溶血素抗体生成。化合物单剂量的抗生育效价比抗炎效价高5～28倍,比免疫抑制效价高3～12倍,免疫抑制作用总剂量为阈值抗生育总剂量的0.9～1.8倍。最后对雷公藤抗生育活性的利用价值、对抗炎免疫治疗的影响及对小鼠模型作了讨论。

雷公藤药材中有效部位含量的比较研究

目的测定不同产地、来源雷公藤药材中有效部位总二萜内酯和总生物碱的含量。方法采用Kedde显色法,检测雷公藤中总二萜内酯的含量;采用重量法,检测雷公藤中总生物碱的含量。结果比较了8批不同产地、来源雷公藤药材中总二萜内酯和总生物碱的含量,其中河南产雷公藤(批号:080706)总二萜内酯含量最高,四川产雷公藤(批号:081030,081031)中总生物碱含量明显高于其他产地的雷公藤。结论不同产地、来源雷公藤药材中有效成分的含量差异较大,在临床用药时应引起重视,在含雷公藤的复方制剂生产中应建立药材检测的可控标准。

雷公藤愈伤组织的固体培养

本文报道了不同理化因素对固体培养的雷公藤愈伤组织生长及二萜内酯含量的影响:黑暗条件下,愈伤组织中二萜内酯含量高于10001 x 光照下的组织;在不同生长素及其组合中,NAA 对二萜内酯积累的作用最好,而 2,4-D 对愈伤组织生长的效果最好;在6,7-V 培养基中,补加100mg/L 的KNO_3,或者加入丙酮酸、柠檬酸、苹果酸等,都能显著提高愈伤组织中二萜内酯的含量;愈伤组织分化出根,二萜内酯含量升高,而生长速度下降;20g/L 的蔗糖浓度对二萜内酯积累的效果较好,但30g/L 的蔗糖浓度对愈伤组织生长的效果好。

雷公藤贴膏透皮吸收研究

雷公藤生物碱和总萜内酯是雷公藤主要有效成分。利用紫外分光光度法检测二者的量,探索雷公藤有效成分透皮吸收情况。结果表明,雷公藤生物碱及总萜内酯成分均可透过鼠皮,12小时透过率分别达13.40％、17.60％,雷公藤贴膏敷贴人体12小时后,膏中生物碱及总萜内酯成分分别被吸收17.34％、22.13％,提示雷公藤可经应给药。

雷公藤抗炎免疫及抗生育活性成分的筛选V．7个环氧二萜内酯化合物体外对T、B淋巴细胞增殖的影响

以有丝分裂原ＣｏｎＡ或ＬＰＳ诱导的小鼠脾细胞增殖为模型，检测从雷公藤中分离的７个环氧二萜内酯化合物体外对Ｔ、Ｂ淋巴细胞的作用和效价。实验结果表明，６个化合物（Ｔ_４、Ｔ_７、Ｔ_８、Ｔ_９、Ｔ_１０、Ｌ_２）和ＴⅡ组份均显著抑制ＣｏｎＡ或ＬＰＳ诱导的淋巴细胞增殖，这些化合物对两者的抑制效价在１０^（－５）～１０^（－９）μｇ／ｍｌ间，Ｔ_Ⅱ组份则分别为３．５及４．２μｇ／ｍｌ。其ＩＣ５０值由小至大依次是Ｔ_１０、Ｔ_４、Ｔ_８、Ｌ_２、Ｔ_７、Ｔ_９和Ｔ_Ⅱ，在剂量─效应坐标图上ＬＰＳ诱导曲线在ＣｏｎＡ诱导曲线的右侧，两曲线基本平行，ＩＣ５０大小次序一致，结果非常接近。另一个化合物Ｔ_（１１）在浓度达５０μｇ／ｍｌ时对两者均无抑制作用，体外定性结果与体内完全一致。提示雷公藤免疫活性化合物在体外对Ｔ、Ｂ细胞增殖的抑制作用是明确的、直接的和无选择性的。

雷藤内酯四醇和雷公藤精碱的结构

从雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)的根皮分离到两种化合物(Ⅰ和Ⅱ)。据理化性质和 UV、IR、NMR、MS、x-射线衍射等分析,Ⅰ为新二萜内酯,命名为雷藤内酯四醇;Ⅱ为新倍半萜生物碱,命名为雷公藤精碱。

异雷公藤内酯四醇的分离与结构

从雷公藤(Tripterygium wilfordii)的根皮中分离到一种新的二萜内酯,据理化性质和UV、IR、MS、~1H-NMR、^(13)C-NMR、~1H-~1Hcosy、~1H-^(13)Ccosy、DIFNOE、NOESY、X射线衍射等数据分析,鉴定为异雷公藤内酯四醇。

不同产地雷公藤药材中总二萜内酯含量的测定

目的:比较不同产地雷公藤药材中总二萜内酯的含量。方法:采用Kedde显色法,在550 nm波长处进行总二萜内酯的含量测定。结果:比色法测定雷公藤总二萜内酯(以雷公藤甲素计)在7.8μg/mL～46.8μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均加样回收率为96.86%,RSD为2.40%(n=6);江西产雷公藤总二萜内酯含量最高。结论:不同产地的雷公藤药材中总二萜内酯的含量变化较大,在临床用药时应引起重视。

雷公藤片中总二萜内酯的含量测定

采用紫外分光光度法测定雷公藤片中雷公藤总二萜内酯的含量,为控制雷公藤片质量提供了依据。

正交试验优选雷公藤提取工艺

目的:优选雷公藤的提取工艺。方法:以雷公藤甲素和总二萜内酯提取量为指标,通过L9(34)正交试验考察提取时间、乙醇用量及体积分数对雷公藤提取工艺的影响。采用HPLC测定雷公藤甲素含量,流动相甲醇-水(45∶55),检测波长218 nm;利用UV测定总二萜内酯含量,检测波长550 nm。结果:乙醇体积分数对雷公藤甲素提取量具有显著性影响,其他2个因素则无显著性差异;各因素对总二萜内酯提取量均无显著性影响。最佳提取工艺为加8倍量95%乙醇回流提取3次,提取时间分别为2,1,1 h;雷公藤甲素、总二萜内酯提取量分别为4.20,86.64μg·g-1。结论:优选的提取工艺稳定可行,指标成分提取效率较高。

不同雷公藤单体对仓鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的:观察雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤红素及雷公藤内酯甲对仓鼠卵巢细胞凋亡的浓度及时间效应。方法:采用体外细胞培养,用不同质量浓度的雷公藤单体干预及相同质量浓度干预不同时间,显微镜下观察细胞形态及数量变化,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率及蛋白印迹法检测细胞ERK磷酸化及c-fos表达水平。结果:不同单体干预的细胞凋亡率、ERK磷酸化及c-fos表达水平不同,以雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲最显著。雷公藤甲素质量浓度在30μg·L^(-1)时细胞凋亡率最高,其后质量浓度增加,细胞凋亡率并不增加;雷酚内酯干预后细胞凋亡呈浓度效应即随质量浓度增加细胞凋亡率升高;雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲干预后随干预时间延长细胞ERK磷酸化及c-fos表达增加。结论:不同雷公藤单体引起细胞凋亡的质量浓度有差异,雷公藤甲素促进细胞凋亡的最佳质量浓度是30μg·L^(-1),而雷酚内酯在10~200μg·L^(-1)范围内随质量浓度增加,引起细胞凋亡增加的现象。此外雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲引起细胞凋亡相关蛋白的表达有时间效应。