层粘连蛋白α4亚基的功能及其与疾病关系的研究进展

层粘连蛋白家族是基底膜的主要成分。作为家族中的一员,层粘连蛋白α4亚基(LAMA4)广泛存在于成人组织的细胞间质中,参与细胞的固定,并可与相应的整合素受体结合,激活相关的信号转导通路,对于细胞的生长、增殖和迁移,以及人体的正常生长发育均起着重要作用。现有的研究已发现LAMA4与许多疾病的发生、发展有关;此外,还发现LAMA4与多种肿瘤细胞的迁移和侵袭有密切的联系。本文综述了当前LAMA4的研究进展,着重探讨LAMA4与疾病尤其是肿瘤发生发展的关系,以期为相关疾病的诊治提供新的思路。

层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基。方法采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能。结果同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点。点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段,合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成。结论成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基。所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能。

人层黏连蛋白α4链LG1-3组件的克隆及酵母表达

目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统获得重组的人层黏连蛋白LG1-3组件蛋白,为进一步研究LG1-3的结构和功能间的关系奠定基础。方法:利用RT-PCR从人胎盘组织总RNA中扩增LG1-3组件cDNA,并重组入pPICZαA,电转化入毕赤酵母GS115,利用甲醇诱导表达目的蛋白。结果和结论:获得了1 800 bp LG1-3组件cDNA,利用体外定点突变将SacⅠ酶切位点GAGCTC突变为GAGCGC,经SDS-PAGE和W estern印迹检测到相对分子质量为67.48×103的LG1-3组件蛋白的表达。