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The Lapinized Chinese Strain Vaccine Against Classical Swine Fever Virus:A Retrospective Review Spanning Half A Century 被引量:6
1
作者 QIU Hua-ji SHEN Rong-xian TONG Guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第1期1-14,共14页
Classical swine fever (CSF), a list A disease of Office International des Epizooties, is caused by classical swine fever virus (CSFV) belonging to the Flaviviridae family. The well-known lapinized Chinese strain o... Classical swine fever (CSF), a list A disease of Office International des Epizooties, is caused by classical swine fever virus (CSFV) belonging to the Flaviviridae family. The well-known lapinized Chinese strain of CSFV, also known as C-strain, was developed in China in the mid-1950s. In the past half a century, the vaccine has been proved to be safe and immunogenic in pigs of essentially any age. It is of high efficacy, providing immunized animals with broad-spectrum, sometimes lifelong, protection, which is contributed by both cell-mediated immunity and humoral immunity, against essentially all genotypes or subgenotypes of the virus. The maternal antibodies derived from immunized sows can confer solid protection of their offspring from disease; however, they have been proved to inhibit the successful active immunization of C-strain vaccine. The complete genomes of C-strain and dozens of established or field strains have been sequenced and annotated. Recently, the reverse genetics system of C-strain has been developed, resulting in several C- strain-derived candidate marker vaccines. Many countries manage to control or even eradicate CSF with the aid of mass vaccination with C-strain. in spite of these efforts, the eradication of the disease worldwide remains a big challenge and needs to go a long way, and provably still resorts to genetically modified C-strain vaccine. The authors present an overview of the characteristics of the vaccine, which has stood the test of half a century. 展开更多
关键词 classical swine fever classical swine fever virus C-strain vaccine
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Molecular Cloning and NucleotideSequence of Classical SwineFever Virus Strain Shimen 被引量:1
2
作者 Huang Qianhua Zhang Chuyu +2 位作者 Wang Jiafu Wang Ning Fu Liezhen(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan, 430072,China) 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 1998年第4期504-508,共5页
According to the previously published CSFV sequences, 18 paris of partially overlapping primers which span the entire genome of CSFV strain Shimen were designed and synthesized. Each cDNA fragment of strain Shimen was... According to the previously published CSFV sequences, 18 paris of partially overlapping primers which span the entire genome of CSFV strain Shimen were designed and synthesized. Each cDNA fragment of strain Shimen was amplified by RT-PCR method from the anticoagulant blood of strain Shimen infected pig. The PCR fragments were cloned into pGEM-T vector respectively and sequenced. The results show that we have obtained the nucleotide sequence of strain Shimen. The viral RNA consists of 12 297 nucleotides including noncoding regions of 373 and 227 bases at the 5′ and 3′ end, respectively, and a single large open reading frame spanning 11 697 nucleotides in the middle, which encodes an amino acid sequence of 3 989 residues with a calculated molecular weight of 437.6×103. The precisely sequencing of 5′ and 3′ termini is undertaking. 展开更多
关键词 Key words classical swine fever virus strain Shimen CLONING SEQUENCING
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Effect of Attenuated Highly Pathogenic Pig Reproductive and Respiratory Syndrome(HP-PRRS) TJM-F92 Strain Vaccine on Immune Antibody Levels against Classical Swine Fever(CSF) and Foot-and-Mouth Disease(FMD) 被引量:1
3
作者 Luo Zhizhong Fu Xiandong Wang Yan 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2016年第3期162-164,共3页
Effects of attenuated highly pathogenic pig reproductive and respiratory syndrome(HP-PRRS)TJM-F92 strain vaccine on immune antibody level against classical swine fever(CSF)and foot-and-mouth disease(FMD)were stu... Effects of attenuated highly pathogenic pig reproductive and respiratory syndrome(HP-PRRS)TJM-F92 strain vaccine on immune antibody level against classical swine fever(CSF)and foot-and-mouth disease(FMD)were studied from October 8 to November 12 in 2014,in order to optimize vaccination program of CSF,HP-PRRS and FMD and to provide scientific guidance for animal disease control and prevention work.The results showed that attenuated HP-PRRS(TJMF92 strain)vaccine had no significant effect on immune antibody level of hog cholera lapinized virus(HCLV,ST passage cell vaccine)attenuated vaccine and FMD-O inactivated vaccines(OZK/93 strain),and single or combined use of three vaccines received good immunization effects. 展开更多
关键词 attenuated PRRS TJM-F92 strain vaccine classical swine fever Foot-and-mouth disease Antibody level ELISA
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Construction of cDNA library, nucleotide sequence and analysis of entire genome of classical swine fever virus strain Shimen 被引量:1
4
作者 Qianhua Huang Chuyu Zhang +7 位作者 Jiafu Wang Liezhen Fu Ning Wang Yan Zhu Jisen Huai Pengwei Zhang Jianshi Yu Hui Xu 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2000年第4期367-369,共3页
According to the previously published CSFV sequences, 18 pairs of primers have been designed and synthesized, which cover the entire genome of CSFV strain Shimen. Each cDNA fragment has been amplified by RT-PCR from t... According to the previously published CSFV sequences, 18 pairs of primers have been designed and synthesized, which cover the entire genome of CSFV strain Shimen. Each cDNA fragment has been amplified by RT-PCR from the anticoagulant blood of strain Shimen infected pig. The PCR products have been cloned respectively and sequenced. Results show that the cDNA library of strain Shimen and its nucleotide sequence have been obtained. The genomic RNA of strain Shimen is 12 298 nucleotides in length, containing a 5’ and a 3’ noncoding region 373 and 231 nt long respectively. The center of genome is a single large open reading frame of 11 697 nt which encodes a polyprotein of 3 898 amino acids. The entire sequence of strain Shimen has also been compared with that of other CSFV strains. 展开更多
关键词 : GENOME of classical swine fever virus strain Shimen cDNA library CLONING SEQUENCING sequence analysis.
原文传递
猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾 被引量:84
5
作者 仇华吉 童光志 沈荣显 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1675-1685,共11页
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的... 猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并构建了不同的反向遗传操作标记疫苗,赋予了C株疫苗新的生命和内涵。C株疫苗可以用于猪瘟的控制和根除,借助于C株疫苗密集接种和综合控制措施,有关国家有效地控制了猪瘟,甚至消灭了猪瘟。尽管如此,要在全球范围内根除猪瘟,今后依然有漫长的路要走,这可能有赖于对C株进行进一步改造和利用。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗 20世纪50年代 综合控制措施 细胞免疫应答 被动免疫保护 反向遗传操作 回顾 免疫效力
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苜蓿多糖对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫应答强化作用的研究 被引量:21
6
作者 张世军 王三虎 赵坤 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2003年第10期57-60,共4页
用苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂 ,对 6 0日龄体重 1 8~ 2 0kg的仔猪进行免疫试验。结果表明 ,苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多 ,IgG水平提高 ,可显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。
关键词 苜蓿多糖 猪瘟兔化弱毒疫苗 免疫应答 B淋巴细胞 免疫增强剂
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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量:10
7
作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度
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中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 被引量:8
8
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 张彦明 韩雪清 刘在新 张永国 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期490-493,共4页
应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2... 应用RT PCR、NestedPCR和Half nestedPCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C 株全基因组的7个cDNA重叠片段,分别克隆于pMD18 T或pGEM TEasy载体后进行测序。运用T A克隆和多片段一步连接法,将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM 5Zf(+)载体后,得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 4和pGEM 5Zf(+)/F5 7,再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM 5Zf(+)载体,构建出了CSFVC 株全长cDNA重组质粒pGEM 5Zf(+)/F1 7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 C-株 脾淋毒 CDNA 分子克隆 兔脾组织 RNA 克隆 多片段一步连接法
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猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测 被引量:10
9
作者 张改平 何文博 +5 位作者 王德国 周景明 邓瑞广 郭军庆 祁艳华 王爱萍 《郑州大学学报(理学版)》 CAS 北大核心 2014年第3期85-90,共6页
为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAM... 为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法. 展开更多
关键词 猪瘟强毒株 兔化弱毒疫苗株 环介导等温扩增 鉴别检测
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猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救 被引量:10
10
作者 邹兴启 赵启祖 +5 位作者 范运峰 朱元源 王琴 徐璐 范学政 宁宜宝 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期409-416,共8页
【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染... 【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒。【结论】成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 C株 感染性克隆构建 拯救方法 传代
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猪瘟单克隆抗体的制备及ACI-ELISA检测猪瘟病毒的研究 被引量:10
11
作者 陆芹章 罗廷荣 +2 位作者 温和心 蒋毅立 谢琪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期368-372,共5页
本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb... 本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb对CSFV进行抗原捕获间接ELISA试验(ACI-ELISA),通过一元McAb和二元McAb CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种McAb有协同作用,其捕获CSFV的能力比一元McAb显著提高。方阵试验结果表明:McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度分别为1:400和1:200。特异性试验和敏感性试验结果显示本法特异性强,敏感性高。最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果相符。上述结果说明本研究所获得AC9和CF8可用作猪瘟诊断试剂盒的研制,是检测CSFV的有效方法。 展开更多
关键词 猪瘟石门毒 单克隆抗体 制备 抗原捕获间接ELISA试验
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猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10
12
作者 王伟 符芳 +3 位作者 陈欣 李雪松 李海忠 李曦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期854-857,共4页
为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSF... 为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。 展开更多
关键词 SYBRGreenⅠ实时荧光PCR 猪瘟病毒野毒株 C株
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猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救 被引量:5
13
作者 范运峰 赵启祖 +5 位作者 赵耘 邹兴启 徐璐 张仲秋 王琴 宁宜宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1420-1425,共6页
采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(... 采用高保真DNA聚合酶,分7个片段扩增猪瘟病毒(CSFV)Thiverval株全基因组序列,克隆至pMD18-T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101,同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰,构建出含有T7启动子、榔头状(HH)核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T1-7。利用T7 RNA聚合酶将线性化重组质粒pAC/F101/T1-7体外转录成基因组RNA,再使用脂质体转染将体外转录RNA转染PK-15细胞。通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,表明成功的从感染性克隆拯救出活病毒粒子。猪瘟病毒低温诱变疫苗"Thiverval"株感染性克隆的构建及病毒的成功拯救,为进一步研究CSFV疫苗株的致弱机制提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 疫苗Thiverval株 感染性克隆 病毒拯救
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猪瘟病毒野毒株与疫苗株酶切检测方法的建立、优化及应用 被引量:9
14
作者 董浩 李菲 +2 位作者 王鑫 王开 胡桂学 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第9期187-189,共3页
为有效鉴别猪瘟病毒强毒株(Shimen)与弱毒疫苗株(HCLV),根据GenBank上已发表的猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因高度保守区设计一对特异性引物,在其跨越区内部有Shimen株独有的限制性内切酶BglⅡ酶切位点,采取酶切RT-PCR产物的方法鉴别Shimen... 为有效鉴别猪瘟病毒强毒株(Shimen)与弱毒疫苗株(HCLV),根据GenBank上已发表的猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因高度保守区设计一对特异性引物,在其跨越区内部有Shimen株独有的限制性内切酶BglⅡ酶切位点,采取酶切RT-PCR产物的方法鉴别Shimen株和疫苗株,同时对该方法的特异性和敏感性进行检测。结果表明,应用该方法从Shimen株和疫苗株中均能扩增出一条大小为750bp的特异性片段,疫苗株的RT-PCR产物不能被BglⅡ酶切,Shimen株的RT-PCR产物则被酶切为大小分别为520和230bp的两条带。此方法可扩增猪瘟病毒的E2基因保守片段,对病毒RNA的最小检出量为3.96×10-4μg/mL。采用此方法检查了30例临床疑似猪瘟病料,结果3例感染猪瘟病毒强毒,21例为猪瘟弱毒疫苗株,其他为猪瘟阴性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 强毒株和疫苗株 反转录-聚合酶链式反应 酶切
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广西猪瘟流行毒株全基因组的克隆与序列分析 被引量:5
15
作者 吴显实 罗廷荣 +6 位作者 廖素环 刘芳 陆芹章 黄伟坚 温荣辉 秦爱珍 余克伦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期125-128,共4页
参考已发表的猪瘟病毒 (CSFV) Shimen株、HCL V株、Paderborn株的核苷酸序列 ,设计并合成 1 1对引物 ,应用RT- PCR技术 ,成功地分 1 1个片段扩增了 CSFV广西流行毒株 GXWZ0 2的全基因组。将这 1 1个基因片段克隆 ,并测定了其核苷酸序列... 参考已发表的猪瘟病毒 (CSFV) Shimen株、HCL V株、Paderborn株的核苷酸序列 ,设计并合成 1 1对引物 ,应用RT- PCR技术 ,成功地分 1 1个片段扩增了 CSFV广西流行毒株 GXWZ0 2的全基因组。将这 1 1个基因片段克隆 ,并测定了其核苷酸序列。应用计算机生物软件 Vector NTI将 1 1个基因片段进行拼接 ,确认 CSFV GXWZ0 2株全基因组序列的长度为 1 2 2 96个核苷酸 (Gen Bank收录号 AY3 6 776 7)。将 GXWZ0 2株与国内外已发表的 Shimen、HCL V、3 9、Brescia、Eystrup、Glentorf、Alfort1 87、Paderborn、CS、AL D、GPE- 、P97、L PC毒株进行全基因组核苷酸序列和推定的氨基酸序列比较 ,核苷酸同源性分别为 85 .4 %、 84 .6 %、88.7%、85 .7%、 85 .7%、 85 .3 %、85 .6 %、 95 .3 %、 85 .7%、85 .7%85 .4 %、83 .4 %、84 .3 % ,推定的氨基酸同源性分别为 92 .6 %、91 .7%、94 .2 %、 93 .1 %、92 .9%、92 .3 %、 93 .0 %、97.7%、92 .6 %、93 .0 %、92 .6 %、90 .5 %、90 .6 %。 GXWZ0 2与 Shimen、HCL V的全基因组序列及推定的氨基酸序列有明显差异 ,表明 GXWZ0 2株在遗传性和抗原性上发生了较明显的变化。系统发育树分析 ,所比较的 1 4株 CSFV被分为2个群 :GXWZ0 2、Paderborn和 3 9这 3个毒株被归为群 . 展开更多
关键词 猪瘟病毒 基因组克隆 序列分析 GXWZ02株 猪瘟
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猪瘟病毒兔化弱毒株全长cDNA克隆的感染性鉴定 被引量:5
16
作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 郭东升 张淼涛 田宏 张彦明 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期143-147,共5页
用SrfⅠ限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C 株)全长cDNA线性化,体外转录获得其基因组RNA,利用脂质体将基因组RNA转染至SK 6细胞系,连续传代,收集5代以后培养细胞,采用RT PCR、荧光抗体直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明,所... 用SrfⅠ限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C 株)全长cDNA线性化,体外转录获得其基因组RNA,利用脂质体将基因组RNA转染至SK 6细胞系,连续传代,收集5代以后培养细胞,采用RT PCR、荧光抗体直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明,所构建的全长cDNA具有感染性。猪瘟病毒C 株全长感染性cDNA的成功构建,为在分子水平上进一步研究中国猪瘟病毒兔化弱毒株提供了极有价值的研究工具。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 兔化弱毒株 CDNA 克隆 感染性 转染 体外转录
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含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量:11
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作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页
提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因 伪狂犬病 伪狂犬病毒Bartha-K61株 TK基因 EGFP基因 猪瘟病毒E2基因 基因缺失 转移载体 疫苗
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猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立 被引量:9
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作者 郭抗抗 邓力 +3 位作者 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第6期13-18,共6页
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒... 【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗 反转录-聚合酶链式反应 鉴别检测
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鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 王淑娟 班付国 +8 位作者 王东方 刘影 赵雪丽 谢彩华 王翠 马震原 杨海波 柴茂 闫若潜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期177-184,共8页
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建... 旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,用于非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪瘟病毒(CSFV)野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5′UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示:建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10~0~10~6拷贝·μL~(-1)模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL~(-1);利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒野毒株 二重TaqMan MGB FQ-PCR 检测
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猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析 被引量:4
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作者 韩国全 郭万柱 +4 位作者 林华 王利娜 张博 陈弟诗 陈杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期65-71,共7页
分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami... 分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 四川分离株 E2基因 原核表达 免疫学活性
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