Effect of wheat maxibastion of Guanyuan point on immune function and antitumor effect in mice with tumor

Objective To investigate wheat maxibastion of Guanyuan point on immune function and antitumor effect in mice with tumor.Method Group experiment and statistical analysis were conducted.Results were analyzed comparatively.Result Wheat maxibastion of Guanyuan point could reduce ATEP(associated tumor erythrocyte rate) and direct tumor erythrocyte rate(DTER) and raise excitotumorous erythrocyte rate(ETER)(P< 0.05,P< 0.01) and stimulate the reduced activity of NK cells and IL 2 significantly(P< 0.01) in mice with tumor.Conclusion Wheat maxibastion of Guanyuan point can increase the adhesion ability to tumor cells of RBC,and increase the activity of NK cell and IL 2.

体外扩增对食管癌患者NK细胞表面受体表达及其抑瘤活性的影响

目的:探讨食管癌患者NK细胞扩增前后的受体表达及其对肿瘤细胞的杀伤。方法:收集福建省肿瘤医院食管癌患者外周血20例,健康供者(对照组)外周血10例。NK细胞培养采用细胞因子(IL-2+IL-12+IL-15+IL-18)组合,流式细胞术检测NK细胞免疫表型及其受体(CD56+、CD69+、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、CD158b、CD159a)的表达,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对多种肿瘤细胞株(K562、Raji、Eca-109、TE-1)的杀伤作用。结果:与对照组相比,食管癌患者外周血CD3+、CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+T细胞比值明显降低(P<0.05),NK细胞(CD3-CD56+)及调节性T细胞(Treg)比例明显升高(P<0.05)。经细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合定向扩增20 d后,食管癌患者NK细胞比例高达90%以上,NK细胞数扩增达1 000倍以上(P<0.01);而CD3+T细胞、CD4+、CD8+T细胞、CD19+B细胞、Treg细胞及单核巨噬细胞(CD14+)比例均显著降低(P<0.01),且食管癌患者与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。经细胞因子体外培养20 d后,NK细胞表面CD69及活化性受体(NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46)均明显上调,而抑制性受体(CD158b、CD159a)均明显下调(P<0.05)。培养20 d后,食管癌患者NK细胞对肿瘤细胞K562、Raji、Eca-109、TE-1的杀伤能力均显著高于培养前[(69.2±5.1)%vs(42.3±3.0)%,(44.6±3.2)%vs(21.1±2.0)%,(69.7±3.9)%vs(50.3±3.5)%,(67.1±4.5)%vs(41.2±3.3)%;均P<0.01]。结论:细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合能有效扩增外周血NK细胞并上调其活并性受体的表达、下调抑制性受体的表达,其数量及功能均能满足临床治疗需要。

乌贼墨对小鼠NK细胞杀伤活性的影响和抑瘤作用的研究

研究乌贼墨对小鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的诱生作用及NK细胞杀伤活性的持续时间,并探讨乌贼墨对荷瘤鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的影响及抑制肿瘤生长的作用。用5％的乌贼墨给小鼠灌胃,连续5d后取不同时间的小鼠脾细胞,应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性。结果表明:口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强,实验组与对照组比较有显著性差异（P<0.01）;诱生后24h杀伤活性明显增强,2周左右恢复正常水平。乌贼墨可使荷瘤鼠NK细胞杀伤活性增强,瘤体明显小于阴性对照组,病理学分析证明小鼠瘤组织出血坏死及炎细胞浸润程度明显高于对照组,阳性对照组小鼠免疫功能损伤严重。

克癌临对荷肝癌(H_(22))小鼠IL-2和NK细胞活性的影响

目的 :研究和探讨中药复方克癌临对荷肝癌 (H2 2 )小鼠的免疫调节作用。方法 :建立荷实体型肝癌(H2 2 )小鼠模型 ,观察经克癌临治疗对其IL - 2和NK细胞活性的影响。结果 :克癌临能显著提高荷瘤小鼠IL - 2和NK细胞活性 ,且其IL - 2活性及NK细胞活性和模型组或阳性对照组 (5 -Fu组 )比较有非常显著性差异 (p<0 0 0 1)。结论 :克癌临方药可显著提高荷瘤机体的抗肿瘤免疫功能。

He-Ne激光照射对荷瘤小鼠NK活性的影响

本研究采用２４ｍＷＨｅ－Ｎｅ激光器照射ＳＰ２／０骨髓瘤小鼠脾区，然后用ＭＴＴ法检测荷瘤小鼠ＮＫ细胞活性及瘤块变化。结果表明激光照射组ＮＫ活性明显高于非激光组，组间比较Ｐ＜００１，差异有高度显著性。由此证明Ｈｅ－Ｎｅ激光具有增强ＮＫ活性及抗肿瘤作用。

Ge-132对荷瘤小鼠NK细胞活性及红细胞免疫功能的影响

为了探讨Ｇｅ－１３２抗癌作用机制，本文进行了Ｇｅ－１３２对荷瘤小鼠脾脏ＮＫ细胞活性和红细胞免疫粘附功能影响的体内实验研究。实验采用Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤小鼠，腹腔注射Ｇｅ－１３２（剂量分别为１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ），每日１次，连续１４天后，取小鼠脾细胞和血液进行ＮＫ细胞活性及红细胞免疫粘附功能测定，并摘除瘤块称重，计算抑瘤率。结果表明，Ｇｅ－１３２对小鼠抑植瘤（Ｓ１８０）的生长具有显著的抑制效应，抑瘤率达５５％；荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ活性明显低于正常对照组，Ｇｅ－１３２能使其得以恢复；荷瘤小鼠ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率明显低于正常对照组（Ｐ＜００１），ＲＢＣ－ＩＣ花环率则高于正常对照组（Ｐ＜００１），注射Ｇｅ－１３２可显著提高ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率，降低ＲＢＣ－ＩＣ花环率。表明Ｇｅ－１３２能增强荷瘤小鼠ＮＫ细胞杀伤活性和红细胞免疫粘附功能。

rIFNα-2b对小鼠脾脏NK细胞活性的影响

目的 研究重组干扰素 α- 2 b(r IFNα- 2 b)对小鼠脾脏 NK细胞杀伤活性的影响 ,了解该干扰素的生物学活性。方法 采用皮下给药的体内实验及 3 H- Td R掺入抑制法检测小鼠脾脏 NK细胞活性。结果 r IFNα- 2 b能显著提高小鼠脾脏 NK细胞杀伤活性 ,且呈剂量依赖性 ,其高、中、低剂量各组的 NK活性分别为 65 .19± 17.5 6、44 .19± 14.30、35 .46± 17.49,与空白对照及阴性对照均有显著性差异。结论 r IFNα- 2 b能提高 NK细胞活性 ,并有剂量依赖性。

淫蜂佐剂对实验动物NK细胞活性的影响

用微量乳酸脱氢酶 (LDH)释放法分别观察了淫羊藿 -蜂胶佐剂 (以下简称“淫蜂佐剂”)对小鼠脾脏和雏鸡外周血中自然杀伤细胞 (NK细胞 )活性的影响。结果 :小鼠 NK细胞活性在淫蜂佐剂 ( )组、生理盐水对照 ( )组、淫蜂 +环磷酰胺 ( )组和环磷酰胺( )组的上述各组间差异显著或极显著 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1 ) ( 组和 组间差异不显著 ,P>0 .0 5 ) ,这种差异在 4周龄小鼠较 8周龄小鼠更为明显。雏鸡 NK细胞活性 ,35日龄时 ,注射淫蜂佐剂雏鸡极显著高于注射生理盐水雏鸡 ,而且 0 .4m L/羽组明显高于0 .2 m L/羽组。上述结果表明 ,淫蜂佐剂能提高实验动物 NK细胞活性 ,并拮抗环磷酰胺对 NK细胞活性的抑制作用。淫蜂佐剂的这种作用在适龄的幼年动物中表现更为显著 。

A-NK细胞促口腔鳞状细胞癌凋亡效应的研究

目的通过观察A-NK细胞对裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤模型的体外生长特点以及口腔鳞状细胞癌(OSCC)凋亡指数的检测,探讨A-NK细胞对OSCC的免疫治疗机制。方法建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组、A-NK细胞组和NA-NK细胞组,观察33天后瘤重,绘制肿瘤生长曲线;OSCC组织标本经末端脱氧核苷酸转移酶介导的UTP缺口标记(TUNEL)染色以鉴定凋亡细胞,并由阳性细胞百分比表示细胞凋亡指数(AI)。结果 ANK细胞组第15天开始肿瘤体积显著小于对照组(P<0.05);NA-NK细胞组第27天后肿瘤体积显著小于对照组(P<0.05);A-NK细胞组第30天肿瘤体积显著小于NA-NK细胞组(P<0.05),且三组荷瘤裸鼠肿瘤生长重量均有明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。NK组病例活检癌组织AI为(0.71±0.66)%,A-NK组织AI为(1.76±0.83)%,二者间有显著性差异(P<0.01);对照组癌组织AI为(0.34±0.69)%,与前二者间有显著性差异(P<0.01)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。NK细胞对口腔鳞状细胞癌具有免疫杀伤效应,该作用是通过诱导靶细胞凋亡实现的。

小剂量辐射对肿瘤细胞K_（562）及肿瘤病人天然杀伤细胞（NK）活性的影响

已知小剂量辐射可增强机体免疫功能。从对高本底地区的调查发现，该地区居民肿瘤死亡率及某些肿瘤发病率有所降低（１）。ＮＫ细胞能直接杀伤肿瘤细胞，在肿瘤免疫中起着重要的作用。本文观察小剂量辐射对肿瘤病人和正常人外周血淋巴细胞ＮＫ活性的相对效应以及对人红白血病细胞（Ｋ（５６２）细胞）的影响。

低能量激光照射对小鼠脾脏NK细胞活性影响的试验研究

目的 :研究低能量激光照射对小鼠 NK细胞活性的影响 ,以便从 NK细胞活性的角度阐明其免疫调节效应。方法 :以 BAL B/ c小鼠为研究对象 ,应用 7.33J/ cm2、11.0 0 J/ cm2、14 .6 7J/ cm2、2 2 .0 0 J/ cm2和 36 .6 7J/ cm2五种剂量的氦氖激光作小鼠内眼角照射 ,连续照射 8d.,并于照射开始后第 3d、6 d、9d、13d和第 17d.动态监测实验鼠脾脏 NK细胞活性。结果 :以日剂量为 7.33J/ cm2、11.0 0 J/ cm2、14 .6 7J/ cm2和 2 2 .0 0 J/ cm2 L EL I照射小鼠四个剂量组均可增强 NK细胞的活性 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 ) ,但其峰值的出现随着 L EL I剂量的增大而加快 ,2 2 .0 0 J/ cm2剂量组在第 3d就达到峰值 ,而其余三组则分别在第 9d或第 13d时达到峰值。与此相反 ,大剂量 36 .6 7J/ cm2 EL EI组 NK活性则表现出明显的抑制效应。结论 :适当剂量的低能量激光照射可对小鼠脾脏 NK细胞活性产生增强效应 ,而过大剂量 L EL I则产生抑制效应。

卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变

目的了解卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况的改变，并探讨其与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度以及临床分期的关系。方法采用放射性同位素掺入法及OKT单克隆抗体分别检测卵巢恶性肿瘤患者腹水中NK细胞活性及T淋巴细胞亚群，并采用妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔渡作对照。结果卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性显著低于妇科良性肿瘤患者腹水或腹腔液组（P＜0.01），且OKT4细胞减少（P<0．05），OKT8细胞增多（P＜0.05），OKT4/OKT8比值减小（P＜0.05）。卵巢恶性肿瘤腹水内NK细胞活性及T淋巴细胞亚群的改变与肿瘤的组织学类型、细胞分化程度均无关（P＞0.05），但与临床分期有关（P＜0.05）。结论卵巢恶性肿瘤患者盆腹腔内免疫状况是低下的，且临床分期越晚，免疫功能越低。

sLAG3对人低分化胃癌MNK45细胞的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨可溶性淋巴细胞活化基因3(sLAG3)对人低分化胃癌MNK45细胞的抗肿瘤作用及其相关机制。方法:将体外培养的MNK45细胞分为对照组和实验组,实验组加入不同浓度的sLAG3,对照组加入等体积RPMI-1640培养基,每个浓度设置3个时间点,共计12个组;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,流式细胞技术检测细胞凋亡,黏附实验、Transwell实验检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;采用RT-PCR和Western Blot检测细胞CD44、CD133 mRNA和蛋白的表达水平。采用MNK45细胞建立人低分化胃癌裸鼠模型,将造模成功的荷瘤裸鼠分为对照组和实验组,实验组皮下注射不同浓度的sLAG3,对照组给予等体积的磷酸盐缓冲液(PBS),观察和测量瘤块体积和重量,流式检测外周血中的CD8^+CD28^+T细胞数量,ELISA法检测脾脏淋巴细胞分泌IL-12、INF-γ、IL-7及IL-2的水平。结果:与对照组相比,sLAG3呈剂量依赖性抑制MNK45细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力;同时,sLAG3呈剂量依赖性下调MNK45细胞CD44和CD133 mRNA和蛋白的表达水平。与对照组相比,荷瘤裸鼠实验表明sLAG3呈剂量依赖性抑制瘤块生长,同时sLAG3显著上调外周血液中CD8^+CD28^+T细胞水平并促进淋巴细胞分泌IL-12、INF-γ、IL-7及IL-2。结论:本研究证明sLAG3通过调节人低分化胃癌细胞的表面分子和外周血液中CD8^+CD28^+T细胞数量及其介导的免疫反应抑制人低分化胃癌的发生和发展。

Ge-132对荷瘤小鼠NK细胞活性及红细胞免疫功能的影响

为探讨Ge 1 32抗癌作用机制 ,进行了Ge 1 32对荷瘤小鼠脾脏NK细胞活性和红细胞免疫粘附功能影响的体内实验研究。结果表明 ,Ge 1 32对小鼠移植瘤 (S1 80 )的生长具有显著的抑制效应 ,抑瘤率达 55% ;荷瘤小鼠脾脏NK细胞活性明显低于正常对照组 ,Ge 1 32能使其恢复 ;荷瘤小鼠RBC C3b受体花环率和肿瘤RBC花环率明显低于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,RBC IC花环率则高于正常对照组 (P<0 0 1 ) ,注射Ge 1 32可显著提高NK细胞杀伤活性和红细胞免疫粘附功能。

NK细胞对人脑胶质瘤细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用的实验研究

目的观察NK细胞对人脑胶质瘤细胞(HGC)裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法将分离、培养的NK细胞和HGC按实验设计移植于随机分配的4组(A组:无细胞移植组;B组:HGC移植组;C组:HGC+人NK细胞移植组;D组:人NK细胞移植组)裸鼠体内,观察肿瘤的生长情况。结果 A组和D组无移植细胞生长,B组和C组肿瘤出现时间分别为(9.23±1.64)d、(15.26±1.53)d,B组和C组比较差异有显著性(t=4.328,P=0.000)。结论移植到裸鼠体内的人NK细胞能有效抑制移植的HGC的生长。

靶向PSCA的CAR-NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤作用

目的:构建并验证靶向前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的NK-92细胞对宫颈癌的抗瘤活性。方法:构建PSCA靶向的CAR慢病毒表达载体,利用慢病毒感染法获得PSCA CAR-NK-92细胞。用流式细胞术及Western blotting实验检测宫颈癌细胞中PSCA的表达水平。通过体外效靶细胞共孵育实验以及体内裸鼠移植瘤模型中的治疗情况,验证PSCA CAR-NK-92细胞对宫颈癌Hela及MS751细胞杀伤能力及其裸鼠移植瘤生长的抑制能力。结果:成功构建PSCA CAR-NK-92细胞,PSCA在宫颈癌细胞中高表达(均P<0.01)。体外共孵育结果显示,PSCA CAR-NK-92细胞可以以剂量依赖的方式裂解PSCA+的宫颈癌细胞;体内抗肿瘤数据表明,PSCA CAR-NK-92细胞较转染空载体的NK-92细胞显著抑制宫颈癌移植瘤的生长(P<0.01),并且可以有效地浸润肿瘤组织并高水平分泌TNF-α和IFN-γ(均P<0.01)。结论:靶向PSCA的CAR-NK-92细胞在体内外都显示出了良好的对PSCA+肿瘤细胞的杀伤能力,有潜力成为一种针对宫颈癌的潜在治疗策略。

A-NK细胞抗口腔舌鳞状细胞癌的实验研究

目的观察黏附性自然杀伤(A-NK)细胞体外生长与增殖能力,探讨其治疗裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤的效果及其作用机制,为临床治疗鳞癌提供理论依据。方法抽取健康人外周血,分选出A-NK细胞和非黏附性自然杀伤(NA-NK)细胞体外培养,镜下观察细胞生长情况。建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分成3组,每组7只小鼠,分别瘤旁注射生理盐水、A-NK细胞和NA-NK细胞,观察肿瘤体积变化,33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤质量,绘制肿瘤生长曲线。结果镜下观察,A-NK细胞在第15天达到增殖高峰,NA-NK细胞于第12天达到增殖高峰。培养3周后,A-NK细胞共增加39.33倍,NA-NK细胞仅增加16.33倍。生理盐水组裸鼠口腔舌鳞癌移植瘤体积大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组,3组裸鼠肿瘤体积在组间、时间和交互效应上差异均有统计学意义(P<0.01)。第33天,生理盐水组裸鼠瘤质量大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组(P<0.05)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。

A-NK细胞对舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨A-NK细胞治疗裸鼠舌鳞癌移植瘤的效果。方法：分离培养人A-NK细胞;建立舌鳞癌Tca8113-Tb细胞皮下移植瘤模型,随机分为2组（n=7）对照组裸鼠瘤旁注射生理盐水,实验组裸鼠瘤旁注射A-NK细胞,观察33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤重,绘制肿瘤生长曲线。结果：治疗15-33 d时实验组肿瘤体积均小于对照组（P〈0.05）,观察33 d后,实验组和对照组瘤重（g）分别是为0.96±0.38和3.74±1.22（P〈0.05）。结论：A-NK细胞在裸鼠体内具有抗肿瘤效应。

NK细胞的高效扩增及其对体外肿瘤模型的杀伤效果研究

目的:高效扩增NK细胞,并确定其对不同肿瘤的杀伤作用,为临床应用提供参考。方法:从成人外周血中分离PBMCs并利用表面表达4-1BBL、IL-15和IL-21的K562滋养细胞对其进行共刺激培养,15 d后计数并检测CD3^-CD56^+细胞纯度;利用间接免疫荧光及Real-time PCR方法检测NK细胞Granzyme B及Perforin表达变化的同时检测其对肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌的杀伤作用,确定其对不同肿瘤的杀伤效果。结果:扩增15 d后,细胞数量高于110亿,CD3^-CD56^+比例达95%以上;培养后的NK细胞高表达Granzyme B、Perforin,且对A549的杀伤效果(E∶T=10∶1)约为90%,同时对其他肿瘤细胞(E∶T=10∶1)的杀伤效果由强到弱的顺序为:胃癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肾癌、肝癌(P<0.05);NK细胞对宫颈癌、肝癌、胰腺癌的杀伤效果呈现一定的时间依赖性。结论:此方法可以扩增出高数量、高纯度的NK细胞,同时该NK细胞具有高效杀伤多种肿瘤细胞的能力。

蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响

目的研究蜂毒素与基因变构IL-2（melittin-^88ArgIL-2）嵌合蛋白，在体外对入卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响。方法用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法研究已经纯化制备的melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白，在体外对入卵巢癌细胞SKOV3生长抑制的作用，对NK细胞杀伤活性的影响。结果melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外能抑制入卵巢癌细胞SKOV3的生长增殖，能增强NK细胞的杀伤活性。结论melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外具有一定的增强免疫功能和抗肿瘤活性。为其在真核细胞系统的表达、纯化、体内的生物学活性研究以及大规模制备的中试放大研究和临床前期研究奠定了基础。