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变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测 被引量:1
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作者 张加勤 黄珊珊 +6 位作者 徐巧丽 饶慧华 马晓波 黄朝阳 房丽丽 郑港森 宋秀宇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期224-228,共5页
目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子... 目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性。结果成功扩增出大小为269bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍。结论成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 ldh基因 启动子
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谷氨酸棒杆菌ldh基因的敲除 被引量:2
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作者 伍展红 郑穗平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期107-111,共5页
谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态... 谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态细胞。分别在卡那霉素抗性平板及10%蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC 13032-Δldh。应用荧光定量PCR检测,ATCC 13032-Δldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC 13032相比,相对表达量为0。ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响。 展开更多
关键词 ldh基因 基因敲除 谷氨酸棒杆菌 荧光定量PCR
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多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究 被引量:1
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作者 何顺伟 李洪清 +2 位作者 李晓燕 赵瑞雪 魏晓星 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期967-971,共5页
目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构... 目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构建重组表达质粒pET15b-EmLDH,转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达形式,Ni-IDA树脂亲和层析纯化重组蛋白。通过Western blotting法鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,ELISA法检测泡型包虫病患者(57例)、囊型包虫病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步评价EmLDH重组蛋白的免疫诊断效果。结果成功克隆了EmLDH基因并表达纯化出相应的重组蛋白。Western blotting结果显示,EmLDH重组蛋白可被泡型和囊型包虫病患者血清识别,而不被正常人血清识别。ELISA结果显示,EmLDH重组蛋白对泡型和囊型包虫病患者血清的诊断敏感性分别为84.21%和84.85%。结论 EmLDH重组蛋白具有较高的免疫原性,对包虫病具有较好的免疫诊断价值。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 ldh基因 克隆 表达 免疫原性
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绵羊LDHβ基因的生物信息学分析及其在不同剩余采食量绵羊肝脏和肌肉组织中的表达 被引量:2
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作者 莫负涛 李发弟 +3 位作者 喇永富 张小雪 唐德富 王维民 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期13-21,27,共10页
【目的】为鉴定绵羊乳酸脱氢酶β(lactate dehydrogenase B,LDHβ)基因的分子特征,研究其在不同剩余采食量绵羊肝脏和肌肉组织中的表达差异.【方法】测定了137只‘湖羊’公羔的剩余采食量(residual feed intake,RFI),按RFI进行排序,分... 【目的】为鉴定绵羊乳酸脱氢酶β(lactate dehydrogenase B,LDHβ)基因的分子特征,研究其在不同剩余采食量绵羊肝脏和肌肉组织中的表达差异.【方法】测定了137只‘湖羊’公羔的剩余采食量(residual feed intake,RFI),按RFI进行排序,分别筛选出RFI最高(high-residual feed intake,H-RFI)和RFI最低(low-residual feed intake,L-RFI)的羊各15只,屠宰后,采集肝脏和肌肉组织,利用Q-PCR技术检测绵羊LDHβ基因分别在H-RFI和L-RFI羊肝脏和肌肉中表达量,并利用生物信息学软件构建了该基因的系统进化树和预测其结构与功能.【结果】绵羊LDHβ基因开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 005bp,编码334个氨基酸,其蛋白质分子质量为36 479.43U,理论等电点为6.40.绵羊LDHβ基因与山羊的亲缘关系较近,其次为牛,序列同源性高.功能结构域预测结果显示,该基因编码产物在内质网中参与辅酶因子生物合成的可能性最高.Q-PCR结果显示,绵羊LDHβ-mRNA基因在L-RFI羊肝脏和肌肉中表达量均显著低于H-RFI羊(P<0.01).【结论】绵羊LDHβ基因作为能量代谢的关键酶参与绵羊饲料效率的调控. 展开更多
关键词 绵羊 ldhβ基因 生物信息学 基因表达 剩余采食量
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LDH5在舌鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量:2
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作者 袁春平 李中武 +3 位作者 张玮 王东苗 程杰 杨建荣 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期926-929,共4页
目的:探讨LDH5蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达特点,及其与临床病理和患者生存预后的关系。方法:应用免疫组织化学染色法检测LDH5蛋白在63例舌癌组织标本和16例正常舌黏膜组织标本中的表达。结合患者临床病理资料和随访资料,应用SPSS17.... 目的:探讨LDH5蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达特点,及其与临床病理和患者生存预后的关系。方法:应用免疫组织化学染色法检测LDH5蛋白在63例舌癌组织标本和16例正常舌黏膜组织标本中的表达。结合患者临床病理资料和随访资料,应用SPSS17.0软件分析LDH5的表达与相关临床病理参数(Fisher精确概率法)以及患者总生存率之间的关系(KaplanMeier法)。结果:LDH5在部分舌鳞癌组织中呈高表达(33/63,52.38%),与其在正常舌黏膜组织的表达水平相比有显著统计学差异(P<0.01)。LDH5蛋白表达水平与肿瘤大小、颈淋巴结转移、临床分期具有相关性(P<0.05),而与患者的性别、年龄、病理分级、局部浸润等无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier法分析患者总体生存情况结果显示:LDH5高表达组患者的总体生存率明显低于LDH5低表达组患者(P=0.006,Log-rank检验)。结论:LDH5在部分舌鳞状细胞癌组织中呈异常高表达,其表达水平与肿瘤的病理学特征及患者预后具有相关性。 展开更多
关键词 舌鳞状细胞癌 ldh5基因 有氧糖酵解 免疫组织化学染色
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Cloning and Sequence Analysis of Lactate Dehydrogenase C(LDH-C)Gene from Black-lipped Pika in Western Sichuan Plateau 被引量:1
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作者 贺庆华 徐亚欧 +2 位作者 郑玉才 陈锋 张文磊 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第6期63-66,共4页
[Objective] The aim was to lay a foundation for research of contraceptive rodenticide with LDH-C4 as target protein. [ Method] EST sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned by PCR with degenerate primer... [Objective] The aim was to lay a foundation for research of contraceptive rodenticide with LDH-C4 as target protein. [ Method] EST sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned by PCR with degenerate primers; then the full length open reading frame (ORF) and 3'UTR sequence were cloned by RACE technique. [ Result] The full length cDNA was 1 498 bp containing an ORF of 996 bp and a 3'UTR of 486 bp. The ORF encoded a polypeptide of 332 amino acids. The alignment of LDH-C gene ORF nucleotide sequences from different species showed that the gene was conserved even between large taxons. The phylogenic tree showed that black-lipped pika LDH-C was closer to prima- tes and artiodactyla than to rodents. [Conclusion] cDNA sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned successfully. 展开更多
关键词 ldh-C gene RACE EST Sequence analysis
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运动发酵单胞菌定点整合质粒的构建 被引量:1
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作者 邹少兰 洪解放 +3 位作者 马媛媛 张一婷 张鲲 张敏华 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期42-47,共6页
运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种,但其可利用的碳源范围窄.对其进行分子生物学基础研究和基因工程改造的工作早在上世纪八、九十年代就开始了,但基... 运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种,但其可利用的碳源范围窄.对其进行分子生物学基础研究和基因工程改造的工作早在上世纪八、九十年代就开始了,但基于其独特的生物学特性,至今遗传操作手段仍不成熟.以大肠杆菌(E.coli)pBR328为出发质粒,分段插入带Z.mobilis乳酸脱氢酶基因ldh、分别作为左右同源臂、1.5 kb大小的DNA片段,构建了Z.mobilis定点整合型质粒pBR328-ldhR-ldhL(6 239 bp),此质粒两同源臂片段即ldhR和ldhL的中间有稀有酶切位点NotI和SfiI,以方便插入待整合片段.经NotI位点插入1 216 bp氯霉素抗性基因cml,将相应质粒pBR328-ldhR-cml-ldhL以环型和线型形式分别电击转化Z.mobilis ZM4菌株,都成功筛选到了ZM4 ldh::cml菌株,证明此定点整合质粒是方便可用的,为对Z.mobilis的定点遗传操作提供了很好的基础. 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 定点整合质粒 ldh基因 cml基因 定点整合
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姜黄素对变异链球菌产酸、耐酸能力的影响 被引量:4
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作者 李京洋 姚毅章 赵国廷 《口腔医学》 CAS 2020年第8期707-710,共4页
目的初步研究姜黄素对变异链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法微量稀释法确定姜黄素对变异链球菌的最低抑菌浓度MIC值,检测1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC的姜黄素对细菌产酸、耐酸能力的影响:通过细菌糖酵解实验检测细菌的产酸能力,通过细... 目的初步研究姜黄素对变异链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法微量稀释法确定姜黄素对变异链球菌的最低抑菌浓度MIC值,检测1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC的姜黄素对细菌产酸、耐酸能力的影响:通过细菌糖酵解实验检测细菌的产酸能力,通过细菌在酸性环境(pH 3.0的甘氨酸溶液)中的存活率检测细菌的耐酸能力;定量PCR检测与乳酸脱氢酶编码基因ldh的表达。结果姜黄素对变异链球菌的MIC为100 mmol/L,在亚抑菌浓度(1/8 MIC、1/4 MIC、1/2 MIC)下,姜黄素增加细菌糖酵解实验的pH值,降低细菌在酸性环境中的存活率,并且降低乳酸脱氢酶编码基因ldh的表达。结论姜黄素对变异链球菌产酸和耐酸能力有抑制作用。 展开更多
关键词 姜黄素 变异链球菌 产酸 耐酸 ldh基因表达
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