741杨离体叶片再生及抗虫基因转化

用７４１杨［Ｐｏｐｕｌｕｓａｌｂａ（ｐ．ｄａｖｉｄｉａｎａ×Ｐ．ｓｉｍｏｎｉｉ）×Ｐ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）］试管植株无菌叶片作外植体，经研究，筛选了诱导不定芽分化、增殖和生根培养基；暗培养５～１５ｄ能提高不定芽分化的诱导率。无根或生根试管植株两类叶片均可用作外植体。建立了７４１杨最佳转化和再生系统。用含有完全改造的Ｂｔ基因表达载体ｐＢ４８．７转化优良杨树新品种－７４１杨，经在含有卡那霉素培养基上选择和ＰＣＲ检测已获得初步确定的转基因植株。

大叶冬青叶外植体的愈伤组织诱导与不定芽苗再生

将离体培养的大叶冬青幼叶外植体在含有TDZ(噻吩隆,浓度0.1～5.0μmol/L)与IAA(浓度0.1～5.0μmol/L)的WPM培养基上培养,能够产生愈伤组织。当TDZ浓度不变时,5.0μmol/LIAA处理产生的愈伤组织块直径最大;愈伤组织块转培到含有不同浓度TDZ与IAA的WPM培养基上,在5.0μmol/LTDZ+3.0μmol/LIAA的培养基上出现较多不定芽苗(每一愈伤组织块平均产生11.2株);几种细胞分裂素作用比较研究表明:在BA、TDZ与ZT(均为15.0μmol/L)处理中,较好的芽苗增殖系数分别为3.7,6.0和7.4,BA与2 ip(均为3.0μmol/L)处理时芽苗高生长可达34mm和45mm。

现代月季(Rosa hybrida)叶片植株再生体系的建立

本试验对冰山、金秀娃、火球等24个现代月季(Rosa hybrida)品种再生体系进行了研究,结果表明:部分品种可从叶柄砧处直接再生出小苗;基因型、植物生长调节剂组合、暗培养时间及叶片的幼嫩程度对现代月季叶片的再生影响很大,暗培养和幼叶均有利于再生。24个现代月季品种中12个品种再生出了不定芽;现代月季品种冰山幼叶暗培养30 d后的再生率可从无暗培养的15.6％提高到45.6％;冰山顶生3片叶、中部叶片及基部叶片的再生率分别为46.5％、12.9％和0。适宜现代月季叶片不定芽再生的培养基为MS+6-BA 6.0 mg·L-1+ZT 6.0 mg·L-1+IBA 0.4 mg·L-1;芽伸长培养基为MS+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1;生根培养基为1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1+0.1％活性炭。

以叶盘为外植体的白桦的再生(英文)

从不同的激素组成 (BA ,KT ,2 ,4～D ,NAA ,GA3)、基本培养基 (MS ,WP)、外植体放置的方向性进行了实验 ,建立了以白桦叶盘为外植体的再生系统。当叶盘向轴面朝下放置在培养基上时 ,三周后 ,从叶盘边缘生出不定芽。不定芽的诱导率为 6 4 %,平均每片叶盘可生出 6个不定芽。叶盘再生系统的建立为白桦的遗传转化提供了前提。

84K杨叶片外植体再生系统的建立

利用正交试验等设计 ,首次系统开展了 84K杨叶片外植体再生系统建立研究 ,确定了84K杨叶片外植体最适不定芽诱导培养基及激素配比为 MS+ 6- BA1 .5 mg/L+ NAA0 .1mg/L,不定芽最适生根诱导培养基及激素配比为 GMS+ NAA0 .0 1 mg/L+ IBA0 .2 5 mg/L。该实验结果为

玉米幼叶愈伤组织诱导和不定根的再生

以 7d龄左右的玉米 (ZeamaysL .)实生苗幼叶不同切段为材料 ,在添加不同植物激素的 1/ 2MS培养基上培养 ,2周后可以诱导出愈伤组织 ,第 2叶基部愈伤组织诱导率高于第 1叶 .MS预处理培养基中添加 1mg·L- 1呋喃腺嘌呤 (KT)或 1mg·L- 1苄基腺嘌呤 (BA)后 ,使诱导频率提高到 5 8.3%,并不同程度地诱导不定根的发生 ;诱导培养基中添加 1mg·L- 1KT或 1mg·L- 1BA对愈伤组织和不定根的诱导均有抑制作用 .当在诱导培养基中添加 5 0 0mg·L- 1水解酪蛋白(CH)时 ,诱导培养基中BA或KT对愈伤组织和不定根发生的抑制作用得到缓解 .

84K杨叶片再生系统的建立

选用84K杨的叶片作为外植体,MS作为基本培养基,采用不同浓度组合的BA和NAA对84K杨再生系统进行了研究.结果表明,在MS培养基中单独添加2.0mg／L BA时,不定芽分化率为90％,单独添加0.3mg/L NAA时,不定根产生率最高(90％),但无不定芽生成.采用1.5mg/LBA+0.3mg/LNAA组合搭配时,不定芽分化率最高(95％).在此基础上,采用M1(MS+1.5mg/L BA+0.3mg/L NAA)培养基,研究了不同着生位置的叶片、同一着生位置叶片的不同切段以及叶片在培养基上的放置方式对84K杨叶片再生的影响,结果表明带有叶柄的下切段比其余叶片切段不定芽再生率高,幼嫩叶片比老化叶片再生率高,叶片近轴端向下接触培养基比远轴端向下接触培养基再生率高.叶片再生系统的建立为开展84K杨的工厂化育苗和遗传转化奠定了基础.

仙茅叶片的组织培养及其细胞学观察

目的通过对仙茅叶片组织培养的研究与细胞学观察,为仙茅的快速繁殖提供技术依据。方法将仙茅幼叶培养在MS培养基,通过设计不同的光照条件,附加不同的激素、水解酪蛋白和活性炭成分,调查出愈率和成苗率。细胞学观察采用石蜡切片法。结果对仙茅叶片的愈伤诱导,黑暗的效果好于光照;在所试验的培养基成分中,适宜的激素配比是2.0mg/L2,4-D或6-BA1.5mg/L+2,4-D2.5mg/L,并且附加300mg/L水解酪蛋白和0.2%活性炭,对于仙茅叶片的离体成苗较好;培养后,愈伤组织主要由叶片的中脉产生,位于中脉上表皮内侧的薄壁细胞首先启动分裂,随后维管束鞘薄壁细胞及其外侧的叶肉细胞也启动分裂,参与愈伤组织的形成。愈伤分化时,芽发生于愈伤组织的表面,根发生于愈伤组织的内部。结论可以通过仙茅幼叶的组织培养进行仙茅的快速繁殖。

桃叶片再生不定芽的研究

【目的】研究桃叶片再生不定芽的影响因子,建立并优化叶片再生体系。【方法】以桃品种＂布目早生＂、＂甜桃王＂、＂瑞江＂和优系＂97-8-4＂组培苗叶片为试材,研究基因型、叶龄、叶片不同部位、基本培养基及生长调节剂对不定芽再生的影响。【结果】不同基因型叶片的不定芽再生率差异较大,＂97-8-4＂和＂甜桃王＂不定芽再生率均较高,＂布目早生＂次之,＂瑞江＂的叶片不能再生;叶片在不同培养基中再生不定芽的效果不同,以LP培养基的再生效果较好;不同成熟度的叶片再生不定芽的能力不同,完全展开幼嫩叶片的再生效果较好;叶片不同部位产生不定芽的能力不同,叶柄和叶片基部的再生效果较好;叶片暗培养时最适的生长调节剂组合为2.0 mg/L BA＋0.2 mg/L NAA,光培养时最适的BA质量浓度为4.0~6.0 mg/L,BA与NAA适宜的质量浓度比为30∶1~60∶1。＂97-8-4＂、＂甜桃王＂和＂布目早生＂完全展开的幼嫩叶片在最适培养条件下的不定芽再生率分别为18.33%,16.67%和13.33%。【结论】桃叶片再生不定芽受内外因素的共同影响,基因型和叶片外植体的生理状态是不定芽再生的关键内在因素,培养基及附加的生长调节剂是不定芽再生的关键外在因素。

苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养及其叶片不定梢诱导

【目的】建立苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的组织培养快繁技术体系及其离体叶片不定梢再生技术体系,为工厂化生产优质苗木及利用生物技术手段改良品种奠定技术基础。【方法】以苹果抗寒矮化砧木‘BP-176’的半木质化新梢为试材,建立初代无菌试管苗。以试管苗为试材,研究了基本培养基、植物生长调节物质对试管苗继代生长及生根的影响。以离体叶片为外植体,研究了细胞分裂素种类和浓度及碳源对不定梢再生的影响。【结果】半木质化新梢在芽启动培养基上的腋芽萌发率达85%以上。在基本培养基MS和QL上,试管苗的增殖没有显著差异,但生长表现不同,QL培养基上的增殖苗表现出该品种田间生长的红色特征。当细胞分裂素为BA时,蔗糖比D-山梨醇易诱导出叶片不定梢;当细胞分裂素为TDZ并且浓度较高时,D-山梨醇比蔗糖易诱导出叶片不定梢。以添加3 mg·L-1BA和30 g·L-1蔗糖处理获得的不定梢再生率最高,为71.6%。生根诱导,基本培养基1/2MS比1/4MS有效,生长素IBA比NAA有利于提高生根率。【结论】苹果砧木‘BP-176’试管苗适宜的继代增殖培养基为添加1.0 mg·L-1BA和0.1 mg·L-1IBA的QL培养基;最佳不定梢再生培养基为:NM+3 mg·L-1BA+0.3 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1IBA+20 g·L-1蔗糖,最高生根率为69.8%。

柠檬酸和抗坏血酸对蝴蝶兰叶外植体褐变发生的影响

目的:探究柠檬酸和抗坏血酸对蝴蝶兰叶片外植体褐变发生的影响以及对PPO活性变化影响的作用机理。方法:以褐变率和褐变指数为参考数据,分析柠檬酸和抗坏血酸对外植体PPO活性和PPO反应产物积累的影响以及与外植体褐变发生的关系。结果:分别用100mg/L柠檬酸共培养和50mg/L抗坏血酸浸泡处理叶片外植体,经离体培养3d,褐变率分别比对照降低94.9%和54.9%,离体培养6d,褐变指数低于对照的0.53,分别为0.46和0.36,同时PPO活性降低。结论:推测柠檬酸抑制褐变的原因是直接与酶蛋白作用,抗坏血酸则与新生醌类物质结合。

酸枣叶片不定梢形成及玻璃化的影响因素

以酸枣无菌苗叶片为外植体,研究了培养条件对不定梢再生及不定梢玻璃化的影响.结果表明,叶片在加有细胞分裂素TDZ的诱导培养基(培养基Ⅰ)上连续培养,可诱导不定芽形成,但不能进一步发育成不定梢;而在诱导培养基Ⅰ上培养2周后转移到不加TDZ的培养基Ⅱ上,可获得不定芽伸长的不定梢.培养基Ⅱ的基本培养基组成影响不定芽(梢)的玻璃化症状:MS培养基产生玻璃化的不定芽(梢),而WPM培养基产生正常不定芽梢;光培养条件的变化对玻璃化症状的发生没有影响.不定芽(梢)玻璃化的发生可能与培养基中铵或硝酸铵的浓度有关,在不定芽伸长发育阶段,培养基中高浓度的铵导致了玻璃化苗的发生.

野生花卉厚叶岩白菜组织培养及再生体系的建立

[目的]建立厚叶岩白菜的完整再生体系,并为研究其遗传转化奠定基础。[方法]以野生厚叶岩白菜的叶片为外植体,通过筛选培养基与激素配比,初步建立其离体培养再生体系。[结果]厚叶岩白菜愈伤组织的最佳诱导培养基为:改良MS+NAA 0.50 mg/L+6-BA 0.50 mg/L+水解酪蛋白100.00 mg/L+0.2%PVP;分化培养基为:改良MS+NAA 0.50 mg/L+IBA 0.10 mg/L+6-BA0.50 mg/L;生根培养基为:1/2 MS+IBA 0.50 mg/L+NAA 0.01 mg/L。15 d后移植幼苗的叶片由嫩绿变成深绿,30 d后移植幼苗长出新叶,叶片中心偏红,成活率达到95%,且幼苗生长健壮。[结论]通过对培养基组分、激素配比及环境因子的筛选,为野生厚叶岩白菜初步建立了一个实用的离体培养再生技术体系。

蝴蝶兰叶片诱导植株再生的研究

以蝴蝶兰叶片为外植体,建立了蝴蝶兰植株再生系统。结果表明:(1)可通过花梗节芽建立丛生芽诱导体系,获得大量无菌材料,丛生芽诱导增殖的最佳激素组合为7.5 mg/L 6 BA+1.0 mg/L NAA;(2)植物激素显著影响叶片类原球体的诱导,在10.0 mg/L 6 BA+1.0 mg/L NAA的激素组合处理下,各品种的诱导效果最好;(3)4种基本培养基中,1/2MS和Hyponex对类原球体的增殖和分化效果较好;(4)蔗糖浓度对类原球茎分化成苗的影响可用y=-0.019 92x2+0.077 51 x+0.17 进行拟合,在蔗糖浓度为20 g/L时,蝴蝶兰类原球茎分化率达最高。

药蒲公英(Taraxacum officinale Weber)耐1．5％NaCl变异体的筛选及特性分析

为提高药蒲公英的耐盐性,用20～30 d大小的药蒲公英叶片诱导愈伤,获得的愈伤以NaCl作为选择因子,用直接筛选的方法,每3周进行一次继代培养,经3个月继代筛选获得了耐1.5%NaCl的药蒲公英愈伤组织,将耐1.5%NaCl的药蒲公英愈伤组织接种在分化培养基上分化出芽,之后将再生芽转接到生根培养基中进行生根培养,经4个月得到了12株耐1.5%NaCl的药蒲公英再生植株。与野生型相比,耐盐植株叶片宽大、叶柄粗短、叶表面覆盖白色细毛,根粗壮较短,花茎中部具2 cm左右的苞叶。RAPD(Random amplified polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA)和SDS-PAGE检测表明,耐盐植株与对照植株在DNA及蛋白水平上均存在明显差异。1.5%NaCl处理后,与普通再生植株相比,耐盐株系的抗氧化酶活性明显提高,脯氨酸含量上升幅度更为显著,而丙二醛(MDA)含量降低,其主要药用成分黄酮的含量显著增加。这些结果说明耐盐植株的抗氧化防御能力明显增强。以上结果表明耐1.5%NaCl的药蒲公英再生植株为耐1.5%NaCl药蒲公英变异体,这些耐盐变异体有望成为抗盐耐海水蔬菜家族的新成员。同时,这些耐盐变异体植株比普通植株具有更高的医用商业价值。耐1.5%NaCl的药蒲公英再生变异体遗传稳定性的研究正在进行中。

银河Ⅰ号杨叶外植体再生体系建立

以银河 号杨 (Populus alba× P.hopeiensis)无菌试管苗叶片为外植体 ,建立了叶片外植体快速繁殖的培养程序。实验结果表明 ,MS附加 6 - BA∶ IAA(5∶ 1 )、每天 1 4h光照 ,可诱导离体叶片产生大量不定芽 ,且生根试管苗叶片的不定芽分化率明显高于无根试管苗。不定芽长至 1 cm以上时切下后转至 1 /2 MS附加 IBA 0 .2 mg/L的培养基上 。

切割方式和外植体大小对蝴蝶兰叶片诱导类原球茎的影响

以蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)试管播种苗的叶片为外植体,以1/2MS+10%椰乳+NAA 0.1 mg L-1+TDZ 1.0 mg L-1+0.5%琼脂为诱导培养基,研究了切割方式和外植体大小对类原球茎(protocorm-like body,PLB)诱导的影响。结果显示,叶片经横切2刀和纵切2刀后,叶片PLB诱导率和每叶片诱导出的PLB数量均极显著提高,PLB形成时间极显著缩短,且横切处理的效果比纵切的更好;叶片经横切成三分片段、六分片段和十二分片段后,3种片段的PLB诱导率均极显著高于未切处理(对照),PLB形成时间均极显著短于对照,且六分片段的PLB诱导率极显著高于其它两种片段。这些表明,切割方式和外植体大小均对PLB的诱导有显著影响。

阔叶猕猴桃叶片离体器官发生和植株再生(英文)

以阔叶猕猴桃(A ctinidia latifolia M err.)叶片为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,探讨了不同激素组合、暗培养时间以及不同浓度的蔗糖对叶片器官发生和植株再生的影响。结果表明,BW +0.1μm ol/L N AA +5μm ol/L Zeatin 附加20g/L 蔗糖,先进行21d 暗培养然后转到光下培养效果最好,6周后不定芽再生频率达91.67%,平均每个外植体再生芽数6.87个。再生芽生根良好,生根率可达100%。首次报道了阔叶猕猴桃的器官发生和植株再生,建立了叶片的高效再生体系,为今后的遗传转化研究奠定了基础。

云南野生早花象牙参叶片再生体系的建立

以云南野生的早花象牙参叶片为外植体,探讨了叶片的不同部位、植物生长调节剂组合、暗培养、水解酪蛋白和椰子汁对愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明:叶片基部,暗培养,水解酪蛋白和椰子汁均有利于愈伤组织的诱导;暗培养促进了不定芽的再生。适宜早花象牙参叶片愈伤组织形成的诱导培养基为MS+6BA1.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+水解酪蛋白800mg·L-1+椰子汁50mL·L-1,再生培养基为MS+6BA1.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1,增殖培养基为MS+6BA0.6mg·L-1+NAA0.1mg·L-1,生根培养基为1/2MS+NAA0.8mg·L-1。