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豌豆早期结瘤素基因ENOD12A的克隆及与PsLectin基因双元表达载体的构建 被引量:3
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作者 王洪伟 张兴国 +3 位作者 黎林 孙士群 秦淑丽 苏承刚 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期202-205,共4页
采用PrimStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsENOD12A.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的序列仅相差1个碱基,但推导的氨基酸序列没有改变.将PsENOD12A基因和豌豆凝集素基因psl重组进了双元表... 采用PrimStar HS DNA聚合酶从豌豆基因组DNA中扩增出了豌豆早期结瘤素基因PsENOD12A.序列分析结果表明,所克隆的基因与GenBank公布的序列仅相差1个碱基,但推导的氨基酸序列没有改变.将PsENOD12A基因和豌豆凝集素基因psl重组进了双元表达载体. 展开更多
关键词 豌豆 早期结瘤素基因 凝集素基因 双元表达载体
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褐飞虱凝集素基因NlCTL4的克隆及功能分析
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作者 王彦丹 邵珠龙 +1 位作者 王正亮 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期337-346,共10页
C型凝集素(C-type lectins,CTLs)是广泛存在于昆虫体内一类含糖识别结构域的蛋白超家族,通常作为模式识别受体,在识别外来病原微生物并启动昆虫先天免疫过程中发挥重要功能。本研究克隆并鉴定了一条褐飞虱CTL编码基因NlCTL4(GenBank登录... C型凝集素(C-type lectins,CTLs)是广泛存在于昆虫体内一类含糖识别结构域的蛋白超家族,通常作为模式识别受体,在识别外来病原微生物并启动昆虫先天免疫过程中发挥重要功能。本研究克隆并鉴定了一条褐飞虱CTL编码基因NlCTL4(GenBank登录号:OQ032531),其c DNA序列全长936 bp,编码311个氨基酸。序列分析显示,Nl CTL4蛋白N端存在一段由21个氨基酸残基组成的信号肽,C端仅具有一个典型的糖识别结构域,属于S型CTLs。系统发育分析表明,Nl CTL4与半翅目其他昆虫的CTLs聚为一支,其中与玻璃翅叶蝉CTL亲缘关系最近。q RT-PCR分析显示,Nl CTL4基因在褐飞虱不同发育阶段和不同组织中均有表达。Nl CTL4在5龄若虫期的表达量最高,且在高龄若虫期(4~5龄)的表达量显著高于低龄若虫(1~3龄),但在雌、雄成虫中其表达量无显著差异。Nl CTL4在褐飞虱雌成虫肠道中表达量最高,脂肪体次之,在血淋巴中表达量最低。大肠杆菌(革兰氏阴性细菌)、金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性细菌)和金龟子绿僵菌(丝状病原真菌)均能显著诱导Nl CTL4的表达水平,其中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在诱导36 h时Nl CTL4的表达量达到顶峰,金龟子绿僵菌接种24 h时的诱导水平最高。RNAi分析结果显示,抑制Nl CTL4表达后褐飞虱5龄若虫存活率及对金龟子绿僵菌侵染的抵御能力显著降低。本研究结果初步证实了褐飞虱Nl CTL4在宿主生长发育和免疫防御过程中发挥重要调控作用,且在开发褐飞虱RNAi抗虫和病原真菌防虫技术中具有重要的潜在应用价值。 展开更多
关键词 褐飞虱 C型凝集素 基因克隆 表达模式 RNA干扰
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MIF和MBL2基因多态性与双相情感障碍患者自杀未遂的关联
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作者 刘瑛 《精神医学杂志》 2024年第1期64-67,共4页
目的探讨巨噬细胞抑制因子(MIF)和甘露糖结合凝集素2(MBL2)基因多态性与双相情感障碍(BD)患者自杀未遂的关系。方法选取321例BD患者作为研究对象,依据自杀未遂定义分为BD伴自杀未遂组120例,BD不伴自杀未遂组201例。采用聚合酶链反应-限... 目的探讨巨噬细胞抑制因子(MIF)和甘露糖结合凝集素2(MBL2)基因多态性与双相情感障碍(BD)患者自杀未遂的关系。方法选取321例BD患者作为研究对象,依据自杀未遂定义分为BD伴自杀未遂组120例,BD不伴自杀未遂组201例。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术检测MIF和MBL2基因多态性。通过计算比值比(OR)和95%置信区间(95%CI)评估MIF、MBL2基因多态性与BD患者自杀未遂的关联性,采用Logistic回归分析探讨多态性位点基因型与BD易感性的关系。结果两组MIF、MBL2各基因型分布频率比较,差异存在统计学意义(P<0.001)。BD伴自杀未遂组MIF、MBL2 A等位基因频率高于BD不伴自杀未遂组,MIF G等位基因、MBL2 T等位基因频率低于BD不伴自杀未遂组(P<0.05)。MIF AA基因型、MBL2 A等位基因频率为BD患者自杀未遂发生的危险因素(P<0.05)。结论MIFAA基因型、MBL2 A等位基因频率与BD患者自杀未遂具有一定相关性。 展开更多
关键词 巨噬细胞抑制因子 甘露糖结合凝集素2 基因多态性 双相情感障碍 自杀未遂
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转基因大豆GTS 40-3-2产品加工过程中lectin和cp4 epsps成分降解规律研究进展 被引量:1
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作者 杜艳 陈复生 +3 位作者 夏义苗 刘昆仑 张丽芬 刘伯业 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第6期107-115,共9页
自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方... 自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方法的开发应用和食品(如豆浆、豆腐等)加工过程中外源成分分子量、含量的变化等方面,而关于食品加工过程中转基因成分的降解机理及本质的影响因素涉及较少。从物理、化学、生物作用3个方面对前人的研究进行梳理,分析转基因大豆GTS 40-3-2中 lectin 和 cp 4 epsps 基因降解的影响因素、降解规律,旨在找到减少甚至去除转基因成分的有效方式,为转基因大豆制品的检测和生产调控提供科学依据。 展开更多
关键词 转基因大豆 GTS 40 3 2 lectin 基因 cp4 EPSPS 基因 降解
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Construction of Plant Expresion Vector Carrying Two Insecticidal Genes and Obtain Insect-resistant Transgenic Tobacco Plants 被引量:2
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作者 高越峰 《High Technology Letters》 EI CAS 1998年第2期97-101,共5页
1.IntroductionCropplantsaresusceptibletoatackbyawiderangeofherbivorousinsects.Itisestimatedthataround13%oft... 1.IntroductionCropplantsaresusceptibletoatackbyawiderangeofherbivorousinsects.Itisestimatedthataround13%ofthetotalworldwide... 展开更多
关键词 lectin PROTEINASE inhibitor Insect resistant gene TRANSGENIC PLANTS
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Molecular characterization and expression analysis of a novel dual-CRD C-type lectin in kuruma shrimp(Marsupenaeus japonicus) 被引量:1
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作者 ZHANG Man MAO Yong +3 位作者 WANG Jun FENG Wenrong SONG Xiaohong SU Yongquan 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2015年第2期74-83,共10页
C-type lectins are among the most significant pattern recognition receptors(PRRs) found in invertebrate. They are a class of carbohydrate-binding proteins that can recognize specific sugar moieties on the surface of... C-type lectins are among the most significant pattern recognition receptors(PRRs) found in invertebrate. They are a class of carbohydrate-binding proteins that can recognize specific sugar moieties on the surface of pathogens. In the present study, a novel C-type lecitn(termed Mj Lectin) from kuruma shrimp Marsupenaeus japonicus was identified. The full-length c DNA of Mj Lectin was 1 245 bp with a 1 011 bp open reading frame(ORF) that encoded a polypeptide of 336 amino acid residues. Mj Lectin consisted of two tandemly arrayed carbohydrate-recognition domains(CRDs), unlike other reported M. japonicus C-type lectins with only one CRD. It showed a high similarity to other shrimp dual-CRD lectins. Among the Ca2+-binding Site 2, the tripeptide motif dictating the carbohydrate binding specificity was exhibited as a rare mutant LPN(Leu134-Pro135-Asn136) in CRD1 and a traditional EPN(Glu299-Pro300-Asn301) in CRD2, respectively. Mj Lectin showed a specific expression pattern in both tissue and cellular levels, for its m RNA transcript was mainly expressed in the F-cells of the hepatopancreas. After white spot syndrome virus(WSSV) challenge(3.6×108 virions/μL), the expression of Mj Lectin in the hepatopancreas was up-regulated significantly at 48 h(P〈0.01) compared with the control group. These results suggested that Mj Lectin might be involved in the innate immune defense against WSSV infection. 展开更多
关键词 C-type lectin Marsupenaeus japonicus carbohydrate-recognition domain(CRD) gene expression white spot syndrome virus(WSSV)
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MBL2 Gene Polymorphism and the Association with Neonatal Sepsis in Egyptian Neonates, a Case Control Study
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作者 Ghada El-Saeed Mashaly Amr Mohamed El-Sabbagh +1 位作者 Samah Sabry El-Kazzaz Islam Nour 《Open Journal of Immunology》 2016年第3期111-119,共10页
Mannose binding lectin (MBL) is an important component of innate immunity particularly in neonates whose adaptive immunity is not fully developed. Polymorphism in MBL2 gene promoter and exon1 determines MBL serum leve... Mannose binding lectin (MBL) is an important component of innate immunity particularly in neonates whose adaptive immunity is not fully developed. Polymorphism in MBL2 gene promoter and exon1 determines MBL serum level and function. The aim of this study was to investigate the frequency of different MBL2 genotypes in neonatal sepsis among patients of neonatal intensive care unit (NICU). Two hundred and forty-five neonates were enrolled in this study (127 infected and 118 uninfected controls). Multiplex PCR and double amplification refractory mutation system (dARMS) were used for typing of MBL2 exon1 and promoter respectively. Klebsiella species were the most frequently isolated organisms (22.8%). There is no statistical significance difference in the distribution of different expression genotypes between infected group and controls (P = 0.11). However, prevalence of low MBL2 expression genotypes (XA/O and O/O) was higher in infected patients compared to control group (patients 25.2% and controls 15.3%). Low and medium MBL2 expression genotypes were mostly associated with Gram-negative bacterial infections (18.9% and 22.8%) respectively. A statistically significant association of Gram-negative bacterial infections with low MBL2 expression genotypes was found (P = 0.02). Higher frequency of AB and BB genotypes was observed (31.5% and 7.9%) in patients group compared to control, but without statistical significant difference. 展开更多
关键词 Mannose Binding lectin (MBL) Neonatal Sepsis gene Polymorphism Multiplex PCR geneotype HAPLOTYPE
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Molecular cloning and chracterization of a c-Rel induced lectin-like receptor and its alternative splice isoforms
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作者 HUI LING BAI YUAN FANG MA +1 位作者 WEN ZHI TIAN HSIOU-CHI LIOU 《Journal of Microbiology and Immunology》 2005年第4期280-287,共8页
The NF-κB family member, c-Rel plays a critical role in the regulation of immune function. It was found that mice with c-Rel deficiency exhibited extensive defects in the survival of lymphocytes and cell cycle progre... The NF-κB family member, c-Rel plays a critical role in the regulation of immune function. It was found that mice with c-Rel deficiency exhibited extensive defects in the survival of lymphocytes and cell cycle progression, and were tolerant to allografts. To further characterize the regulatory function of c-Rel, a representational difference analysis (RDA) was performed on mRNAs derived from B lymphocytes of wild type and the c-Rel knockout mice. By using this approach, a novel gene designated as lymphocyte-derived C-type lectin-1 (LCL-1) was identified, whose expression was dependent on the intact c-Rel molecule. In the present study, LCL-1 was demonstrated to be a type Ⅱ transmembrane protein with a single extracellular carbohydrate recognition domain (CRD) that exhibited significant degree of homology to C-type lectin-like receptors, including CD69. This LCL-1 gene was found to be located at the NK gene complex (NKC) on mouse chromosome 6 and could encode at least 4 alternatively spliced isoforms. In addition to its expression on B lymphocytes, it was also expressed on immature as well as mature dendritic cells (DCs), especially with higher expression level on mature DCs. Together, our findings explore one new member of the NKC family and demonstrate for the first time that a lectin-like receptor of the the NKC family is the target gene of c-Rel. 展开更多
关键词 克隆技术 凝集素 对碘氧基苯甲醚 生物学
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辣椒中L型凝集素类受体激酶CaLecRKs鉴定及其对辣椒疫霉的响应
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作者 金庆敏 徐小万 +2 位作者 衡周 王恒明 徐晓美 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期122-130,193,共10页
L型凝集素类受体激酶(LecRKs)广泛参与植物的先天免疫过程。目前未见在辣椒Capsicum annuum中全基因组鉴定LecRKs的报道。本研究对辣椒中的CaLecRK进行了全基因组鉴定,并在接种辣椒疫霉Phytophthora capsici条件下通过基因表达分析探究... L型凝集素类受体激酶(LecRKs)广泛参与植物的先天免疫过程。目前未见在辣椒Capsicum annuum中全基因组鉴定LecRKs的报道。本研究对辣椒中的CaLecRK进行了全基因组鉴定,并在接种辣椒疫霉Phytophthora capsici条件下通过基因表达分析探究其对辣椒疫霉的响应情况,旨在挖掘参与辣椒抗疫病防御反应的CaLecRK基因。研究结果表明,辣椒基因组中共鉴定出24个CaLecRK,以其构建系统发育树发现,可将24个CaLecRK分为7个分支。基因表达分析结果显示,有4个CaLecRK基因(CaLecRK 2.2、CaLecRK 3.2、CaLecRK 8.1和CaLecRK 10.1)受辣椒疫霉诱导,和接菌后0 h相比,接菌处理后12 h或36 h基因表达差异显著,推测其在辣椒抗疫病防御反应中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 辣椒 L型凝集素类受体激酶 辣椒疫霉 基因表达 诱导
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2个烟草青枯病菌菌株的致病力差异与基因组比较分析
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作者 管成伟 胡利伟 +4 位作者 冯小虎 张超群 秦言敏 张志高 王利兵 《广东农业科学》 CAS 2023年第8期85-93,共9页
【目的】探索比较2个不同青枯病菌菌株之间致病力差异和基因组差异,分析影响菌株致病力差异的关键基因,为烟草青枯病的防治提供理论参考。【方法】从烟草青枯病发病烟株上分离获得不同的青枯病菌菌株并进行鉴定,通过侵染试验比较2个菌... 【目的】探索比较2个不同青枯病菌菌株之间致病力差异和基因组差异,分析影响菌株致病力差异的关键基因,为烟草青枯病的防治提供理论参考。【方法】从烟草青枯病发病烟株上分离获得不同的青枯病菌菌株并进行鉴定,通过侵染试验比较2个菌株之间的致病力差异,并对2个菌株的基因组进行测序,比较二者之间基因组序列差异,分析影响菌株致病力差异的基因。【结果】从江西省抚州市广昌县和南丰县分离到2株青枯病菌菌株RsTP2和RsTY2,egl测序表明菌株RsTP2和RsTY2均属于亚洲分支演化型Ⅰ中的序列变种13,其中菌株RsTP2对云烟87致病力较强,而菌株RsTY2致病力较弱。通过对2个菌株进行基因组测序,获得二者的基因组框架图,其基因组大小分别为5.43MB和5.23MB。将获得的基因和蛋白序列与相关数据库进行比对,获得基因的功能及物种注释信息。通过分析发现,菌株RsTY2有52个蛋白和菌株RsTP2的44个蛋白比对后序列存在差异,其相似度在50.00%~99.88%,其中存在较大差异的编码蛋白主要是凝集素类蛋白,其次是细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白。【结论】通过比较不同致病力青枯病菌株RsTP2和RsTY2的基因组序列差异,发现二者基因组中编码凝集素类蛋白、细胞溶素分泌激活蛋白和穿孔素家族蛋白等蛋白序列差异较大,这类编码蛋白主要参与细菌的黏附、膜溶解、穿透等功能,与细菌侵入宿主细胞的能力关系密切。这几类编码蛋白的差异推测是导致菌株RsTP2和RsTY2致病力差异的重要因素之一。 展开更多
关键词 烟草青枯病菌 序列变种 致病力 基因组测序 凝集素蛋白
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国产大蒜凝集素基因的克隆与生物信息学分析
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作者 刘琴 胡曼 +2 位作者 朱颖 陈伟达 陈禅友 《江汉大学学报(自然科学版)》 2023年第1期28-35,共8页
为了获得国产大蒜新的凝集素家族基因,根据NCBI数据库中已公布的大蒜凝集素基因序列设计引物,从国产大蒜的鳞茎中提取总RNA,采用RT-PCR技术分离克隆出一个大蒜凝集素基因,命名为ASA-C。ASA-C全长546 bp,包含1个471 bp的ORF,编码156个氨... 为了获得国产大蒜新的凝集素家族基因,根据NCBI数据库中已公布的大蒜凝集素基因序列设计引物,从国产大蒜的鳞茎中提取总RNA,采用RT-PCR技术分离克隆出一个大蒜凝集素基因,命名为ASA-C。ASA-C全长546 bp,包含1个471 bp的ORF,编码156个氨基酸的多肽。利用网站和分析软件对其进行生物信息学分析。结果 表明:ASA-C与已公布的同源二聚体大蒜凝集素ASAⅡ基因具有较高同源性;推测该基因编码多肽的N端有一典型跨膜结构域的信号肽,多肽序列上有3个甘露糖特异性结合凝集素共有基序(Q-D-N-V-Y)。多重序列比对以及系统进化树的结果 表明大蒜凝集素的保守性很强,这为进一步开发利用大蒜凝集素蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大蒜 凝集素基因 克隆 生物信息学分析
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农杆菌介导GNA基因转化菜薹 被引量:8
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作者 张扬勇 李汉霞 +2 位作者 叶志彪 卢永恩 陆芽春 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期473-475,共3页
以菜薹带柄子叶为外植体 ,采用农杆菌介导法将特异启动子PRSs-1与雪花莲凝集素 (GNA)基因构建的嵌合基因转化菜薹 ,获得 2 6株Km抗性植株 ,经过PCR检测和PCR
关键词 农杆菌介导 GNA基因 基因转化 菜薹 带柄子叶 外植体 雪花莲凝集素 基因构建 嵌合基因
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雪花莲外源凝集素基因转化番茄 被引量:43
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作者 吴昌银 叶志彪 +1 位作者 李汉霞 唐克轩 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第7期719-723,共5页
将含有雪花莲外源凝集素基因 (GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)菌株LBA44 0 4中。采用叶盘法转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)栽培品种“C8”、“A3 9”和“A... 将含有雪花莲外源凝集素基因 (GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)菌株LBA44 0 4中。采用叶盘法转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)栽培品种“C8”、“A3 9”和“A53 ” ,获得了含GNA基因的 43株转化植株。通过卡那霉素抗性鉴定、NPTⅡ基因PCR和GNA基因Southernblot分析表明 ,GNA基因已整合到番茄的基因组中。初步抗蚜虫 (MyzuspersicaeSulzer)试验证明 ,转基因番茄有一定的抗蚜虫效果。 3株转基因植株的NPTⅡ基因在自交子代中的分离比例符合 3∶1孟德尔遗传规律。 展开更多
关键词 番茄 蚜虫 GAN 抗虫育种 基因转化
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文蛤(Meretrix meretrix)C-型凝集素基因的分子克隆及表达分析 被引量:11
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作者 李猛 周素明 +2 位作者 刘璐 彭頔 王国良 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1186-1192,共7页
C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)c DNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。Smart软件预测Mm-CTL的糖识别结构域(CRD)... C-型凝集素是一种重要的模式识别蛋白,本研究以文蛤为材料。利用PCR扩增和RACE技术首次获得了编码文蛤C-型凝集素的基因(Mm-CTL)c DNA序列,全长为1855bp,其开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。Smart软件预测Mm-CTL的糖识别结构域(CRD)从第34个氨基酸到第168个氨基酸。BLASTP序列相似性分析显示,Mm-CTL与大竹蛏氨基酸序列同源性最高,相似性为56.5%,与其它无脊椎动物的相似性为13.5%—23.9%。系统进化树分析与同源分析结果一致,其中Mm-CTL与双壳类C-型凝集素聚在一起,与大竹蛏亲缘性最近。环境胁迫实验显示,溶藻弧菌感染6h时Mm-CTL表达量明显上升,在12h时达到最高值,随后有所下降。盐度胁迫时Mm-CTL在盐度5时表达量相对较低,在盐度10—20中的表达量相对较高。温度胁迫时Mm-CTL在35°C时表达量相对最高,10°C时表达量明显较低。研究结果表明,文蛤应对环境因子影响可通过调节Mm-CTL的表达来应答免疫反应。本研究将为贝类先天性免疫因子研究以及病害的防控奠定基础。 展开更多
关键词 文蛤 C-型凝集素 基因克隆 生物信息学 环境因子
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凡纳滨对虾C-型凝集素LvLec2对不同刺激的免疫应答 被引量:9
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作者 罗展 张继泉 +2 位作者 李富花 柳承璋 相建海 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期103-110,共8页
克隆获得了与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)C-type lectin 3同源的C-型凝集素LvLec2基因序列,并通过Real-time PCR研究了其在脂多糖(lipopolysaccharide,简称LPS)、灭活溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和白斑综合症病毒(... 克隆获得了与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)C-type lectin 3同源的C-型凝集素LvLec2基因序列,并通过Real-time PCR研究了其在脂多糖(lipopolysaccharide,简称LPS)、灭活溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,简称WSSV)刺激后的转录表达变化。结果表明,LvLec2编码157个氨基酸,含有1个糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,简称CRD),其CRD结构域中具有决定糖结合特异性的基序"EPS"(Glu118-Pro119-Ser120)序列。系统进化树分析表明LvLec2与已发表的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)C-型凝集素亲缘较远。LPS、灭活溶壁微球菌和WSSV刺激后,LvLec2基因在肝胰脏中的转录表达有明显的变化但表达模式不同。LvLec2可能作为模式识别受体参与了对虾对病原的识别或防御。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) C-型凝集素 基因克隆 不同刺激 免疫应答
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蜡梅凝集素基因克隆及其对蚜虫、蛞蝓抗性分析 被引量:8
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作者 眭顺照 李琳莉 +2 位作者 祝钦泷 马婧 李名扬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期358-368,共11页
【目的】克隆蜡梅凝集素基因并研究其抗蚜虫和抗蛞蝓活性,为植物抗虫基因工程提供理论依据和试验材料。【方法】通过随机挑选克隆测序的方法,从蜡梅花cDNA文库中克隆蜡梅凝集素基因,并构建植物表达载体,用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,... 【目的】克隆蜡梅凝集素基因并研究其抗蚜虫和抗蛞蝓活性,为植物抗虫基因工程提供理论依据和试验材料。【方法】通过随机挑选克隆测序的方法,从蜡梅花cDNA文库中克隆蜡梅凝集素基因,并构建植物表达载体,用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,并对转基因植株进行抗蚜和抗蛞蝓试验。【结果】从蜡梅花cDNA文库中克隆到了一个凝集素基因CpLEC(GenBank登录号:DQ352145),该基因全长871 bp,ORF框长558 bp,编码185个氨基酸。该基因DNA分析表明其不含内含子。具有单子叶植物甘露糖凝集素基因家族的特征,有2个典型的甘露糖结合位点(QXDXNXVXY),和1个变异的可能结合位点(HXGXNXVXY)。Southern杂交表明,该基因在蜡梅基因组中为多拷贝。构建了35S启动子控制下的CpLEC基因的植物表达载体pBI121-CpLEC,利用根癌农杆菌介导法转化烟草获得抗卡那霉素的植株。PCR和半定量RT-PCR分析表明,CpLEC基因已经整合到植物基因组中并在转录水平上得到了有效表达。抗蚜虫鉴定表明,转基因植株及其离体叶片有效地抑制了蚜虫的群体增长率,平均抑制率分别为60%和68%。抗蛞蝓试验结果表明转基因植株有明显的抗蛞蝓活性,转基因烟草虫害指数为0.17,远低于非转基因烟草的虫害指数0.96。【结论】克隆获得了蜡梅凝集素基因CpLEC,通过转基因手段分析其抗蚜和抗蛞蝓活性,结果表明该基因对抗虫基因工程有重要的应用价值。 展开更多
关键词 蜡梅凝集素基因 转基因烟草 抗性 蚜虫 蛞蝓
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根癌农杆菌介导北海道黄杨遗传转化体系的建立 被引量:11
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作者 尚爱芹 田传卫 +1 位作者 赵梁军 田颖川 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期409-414,共6页
在建立北海道黄杨(Euonymus japonicus ‘CuZhi’)再生体系的基础上,建立其遗传转化体系,以获得转雪花莲外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因植株。采用根癌农杆菌(Agr-robacterium tumefaciens,LBA4404菌株)介导法,研究... 在建立北海道黄杨(Euonymus japonicus ‘CuZhi’)再生体系的基础上,建立其遗传转化体系,以获得转雪花莲外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因植株。采用根癌农杆菌(Agr-robacterium tumefaciens,LBA4404菌株)介导法,研究影响北海道黄杨遗传转化的若干因素。结果表明,预培养与否、菌液浓度、侵染时间、共培养时间等对转化频率都有一定的影响。在遗传转化过程中,不经预培养,根癌农杆菌浓度OD600=0.6,侵染下胚轴40min,再共培养3d,有利于获得最高遗传转化效率。抗性植株经PCR和DNA-Southern blot检测表明,目的基因已整合到北海道黄杨基因组中。 展开更多
关键词 北海道黄杨 雪花莲外源凝集素基因 遗传转化
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高效的水稻基因枪转化和可育转基因植株再生 被引量:11
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作者 许新萍 胡明 +2 位作者 蚁乐洲 卫剑文 李宝键 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期691-696,共6页
从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3~4周的愈伤组织,经过1~3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组... 从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3~4周的愈伤组织,经过1~3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组织,在含30~50mg/L潮霉素的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养.使用干燥处理来增加再生频率和出苗数,并摸索出移栽再生小植株的有效方法.从接种到获得转化小植株只需要13~21周.三次转化实验共轰击536块胚性愈伤组织,获得199个系的2783株潮霉素抗性植株.DNA点杂交检测表明73.4%的抗性植株同时含有GNA基因和hpt基因,Southern杂交分析进一步证实了GNA基因在转基因水稻基因组中的整合.89.3%的转基因植株可育.分子证据表明GNA基因和hpt基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离. 展开更多
关键词 水稻 胚性愈伤组织 基因枪转让 hpt基因
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9种大豆制品中转基因成分定性PCR检测 被引量:6
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作者 孙红炜 路兴波 +3 位作者 杨崇良 尚佑芬 赵玖华 王升吉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期234-237,共4页
本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆... 本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆腐、豆皮、豆豉中含有转基因成分,而其它产品中未发现转基因成分存在。 展开更多
关键词 大豆制品 转基因成分定性检测 lectin基因 CaMV35S基因 Cp4-epsps基因
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豌豆凝集素和血红蛋白基因对水稻的转化和表达(英文) 被引量:6
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作者 张静娴 王忆平 +4 位作者 沈世华 王逸群 高越峰 单雪琴 荆玉祥 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第3期267-274,共8页
为了扩大根瘤菌的宿主范围和试探根瘤菌在非豆科植物上的固氮作用 ,将豌豆凝集素基因 (pl)和Parasponiaandersonii血红蛋白基因 (phb)构建在同一个植物表达载体上 ,用基因枪法将其导入水稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)。经PCR扩增和S... 为了扩大根瘤菌的宿主范围和试探根瘤菌在非豆科植物上的固氮作用 ,将豌豆凝集素基因 (pl)和Parasponiaandersonii血红蛋白基因 (phb)构建在同一个植物表达载体上 ,用基因枪法将其导入水稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)。经PCR扩增和Southern杂交分析 ,证明外源目的基因已整合到水稻基因组中。GUS组织化学染色及豌豆凝集素基因的Western印迹实验和表达产物的原位杂交 ,证实外源基因在转基因水稻中表达。在 40个转化植株中 18株有pl和phb基因的PCR产物 ,得率为 45 %。再用 18株植物做pl基因的Westernblot检测 ,有 3株有翻译表达 ,占 40株的 7.5 % ,18株的 17%。 展开更多
关键词 Parasponia andersonii血红蛋白基因 豌豆凝集素基因 基因枪 转化作用 基因表达 转基因水稻 表达
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