结直肠癌组织中淋巴增强子结合因子1(LEF1)高表达及其临床意义

目的:探讨结肠癌患者癌组织中淋巴增强子结合因子1(lymphatic enhancer binding factor 1,LEF1)的表达水平及其临床意义。方法:免疫组化染色法结合Western blot观察结肠癌患者癌组织和癌旁组织中LEF1的表达情况,并对癌组织中LEF1的表达与结肠癌患者临床病理特征的相关性进行统计学分析。Kaplan-Meier生存分析LEF1的表达与结肠癌患者预后的关联,多因素COX回归分析影响结肠癌患者生存预后的危险因素。进一步分析TCGA数据库结肠癌患者癌和癌旁组织中LEF1的表达水平,及其表达与患者预后以及淋巴结转移的相关性。此外,细胞水平采用Western blot检测结肠癌细胞系中LEF1的蛋白表达情况,并通过转染LEF1 siRNA观察对结肠癌HCT116细胞生物学功能的影响。结果:结肠癌组织中LEF1的表达较癌旁组织显著增加(P<0.05),且其表达水平与肿瘤病理分期、分化程度和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与患者年龄、病理类型无关(P>0.05)。LEF1高表达结肠癌患者的生存期明显低于低表达患者(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示,LEF1高表达、肿瘤病理分期、肿瘤分化程度以及淋巴结转移是结肠癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。TCGA数据库分析结果显示,结肠癌组织中LEF1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),且其表达水平与患者预后呈负相关(P<0.05),而与患者淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。此外,细胞实验结果显示,人结肠癌细胞系中LEF1的表达水平显著高于正常结肠上皮细胞(P<0.05),敲减LEF1可有效降低结肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭能力,并抑制Wnt/β-catenin信号通路活性(P<0.05)。结论:LEF1高表达与结肠癌患者的短生存期和不良预后密切相关,可作为结肠癌患者术后复发和转移以及临床预后的重要生物标志物。

ABCB5和LEF1基因与高血压相关研究进展

动脉高血压的发病机制涉及许多因素和分子途径。最近有研究发现ATP结合盒超家族成员ABCB5与心血管相关疾病和WNT信号通路存在关联,有报告指出Wnt/β-catenin通路在高血压患者的病程和发展中的作用,且LEF1作为WNT信号通路中的关键转录因子可能通过相关机制引起高血压,本文就其相关性研究进行综述。

Research on the Influence Factors of Left-behind Children Happines

the left-behind children is appeared in our city in the process, there are many factors that influence the well-being, in this paper I conducted about the influence of left-behind children happiness questionnaire, focuses on the analysis of the influence factors from three aspects of environmental factors, personality factors and social factors. Based on the analys：is results, put forward and strengthen left-behind chi]dren well-being measures.

家蚕核型多角体病毒lef-8基因克隆及系统进化分析

【目的】了解云南省德宏州陇川县蚕区家蚕核型多角体病毒(BmNPV)株系的遗传地位和多样性,为厘清云南蚕区BmNPV的起源及科学防控家蚕血液型脓病提供参考依据。【方法】对分离自云南省德宏州陇川县蚕区的BmNPV进行lef-8基因克隆,通过ExPASy、SignalP 5.0、TMHMM 2.0、NetOGlyc 4.0、NetPhos 2.0及SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,并基于lef-8基因核苷酸序列相似性,采用MEGA7.0中的邻接法(NJ)构建系统发育进化树。【结果】云南省德宏州陇川县蚕区BmNPV-YNLC株的lef-8基因序列全长2631 bp,共编码876个氨基酸残基;其编码蛋白(LEF-8)无信号肽序列,也不存在跨膜结构域,蛋白分子量为101.63 kD,理论等电点(pI)为8.8;在第750~800位氨基酸残基区域具有较高的疏水性,部分氨基酸位点表现为亲水性,且具有较高抗原指数和表面可及性;存在6个潜在的N-糖基化位点,62个磷酸化位点(25个丝氨酸磷酸化位点,23个苏氨酸酸化位点,14个酪氨酸磷酸化位点),但不存在O-糖基化位点。BmNPV-YNLC株与BmNPV-T3株的lef-8基因核苷酸序列相似性为99.7%,BmNPV-YNLC株lef-8基因在第96~98位核苷酸序列上存在3个碱基(CAA)缺失;此外,还存在2个非同义突变(^(646)T→A和^(1895)C→G)和7个同义突变。基于lef-8基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,BmNPV-YNLC株与日本和韩国地区的BmNPV亲缘关系较近,而与我国流行的BmNPV遗传关系较远。【结论】lef-8基因在不同地区来源的BmNPV株系中高度保守,BmNPV-YNLC株与日本和韩国地区的BmNPV亲缘关系较近,但其LEF-8蛋白N端存在氨基酸缺失突变,说明BmNPVYNLC株为云南蚕区的新流行株系。

β-catenin、LEF1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达及临床意义

目的:观察宫颈鳞状细胞癌(SCC)及鳞状上皮内病变组织中β连环蛋白(β-catenin)、淋巴增强子结合蛋白1(LEF1)的表达并探讨其临床意义。方法:选取宫颈SCC组织55例、低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组织42例、高级别鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组织34例、正常宫颈组织21例,对上述组织进行β-catenin、LEF1免疫组化检测,分析两者在宫颈鳞状上皮病变中的表达、二者与病变的相关性及其与SCC临床病理参数的关系。结果:SCC、HSIL、LSIL、正常宫颈组织中β-catenin细胞质表达率分别为32.7%、29.4%、23.8%、4.8%,差异有统计学意义(P=0.003);在以上病变中,β-catenin细胞核表达率分别是41.8%、32.4%、28.6%、9.5%,差异有统计学意义(P=0.002);LEF1阳性率分别为69.0%、50.0%、26.2%、9.5%,差异有统计学意义(P<0.001)。β-catenin的异常表达与SCC分化程度(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.033)相关,LEF1的表达与FIGO分期(P=0.020)及淋巴结转移(P=0.024)相关。β-catenin(r s=0.375,P<0.001)及LEF1(r s=0.443,P<0.001)的表达情况与宫颈病变发展呈正相关,β-catenin与LEF1的表达在各组病变中呈正相关(r s=0.403,P<0.001)。结论:宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中β-catenin和LEF1蛋白异常表达,并与宫颈鳞状细胞癌的分化、淋巴结转移及FIGO分期相关。

LEF-1协助TCF-1决定蛋白免疫应答中滤泡辅助T细胞的功能

目的探讨在蛋白免疫应答中转录因子TCF-1与LEF-1在滤泡辅助T细胞的分化与功能中的地位。方法对他莫昔芬诱导的条件敲除Tcf7与Lef1小鼠采用NP-KLH联合铝佐剂免疫或者NP-CGG联合完全弗氏佐剂免疫,分析应答过程中滤泡辅助T细胞的分化与功能,检测蛋白免疫应答中T细胞与B细胞TCF-1与LEF-1的表达量,并用脾脏嵌合小鼠模型验证TCF-1与LEF-1对于滤泡辅助T细胞功能的重要性。结果Tcf7与Lef1敲除小鼠的滤泡辅助T细胞分化是正常的,而B细胞应答严重缺陷。同时,Tcf7敲除小鼠的B细胞应答也是缺陷的,而Lef1敲除小鼠的B细胞应答是完整的;TCF-1与LEF-1在滤泡辅助T细胞中大量表达,而在B细胞中不表达;脾脏嵌合小鼠模型提示,在有正常滤泡辅助T细胞的帮助下,B细胞中TCF-1与LEF-1的缺失不会导致B细胞应答缺陷。结论在蛋白免疫应答中,TCF-1与LEF-1对于滤泡辅助T细胞的分化是不重要的,LEF-1协助TCF-1通过影响滤泡辅助T细胞的功能而影响B细胞应答。

NGX6对Wnt/β-catenin通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响

目的:探讨NGX6基因对结肠癌Wnt信号转导通路β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响,明确NGX6在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用机制。方法:(1)构建β-catenin野生型真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT),(2)转染外源性pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)及pCMV-myc-NGX6于COS-7细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测转染NGX6前后TCF-4的转录活性。(3)无外源性β-cate-nin,pCMV-myc-NGX6单独转染COS-7细胞及结肠癌SW620细胞,TCF-4荧光素酶报告质粒检测TCF-4的转录活性,并采用Western blot的方法检测两组细胞核内β-catenin及TCF-4的表达。结果:(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT);(2)pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)与pCMV-myc-NGX6共转染COS-7细胞较pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT)单独转染时TCF-4荧光素酶活性明显下降(P<0.05);(3)无外源性β-catenin,pCMV-myc-NGX6转染COS-7及SW620细胞后TCF-4荧光素酶活性较空白质粒转染组下降(P<0.05);(4)NGX6转染COS-7及SW620后核内β-catenin及TCF-4的表达下降。结论:NGX6对结肠癌中Wnt/β-catenin通路的β-catenin/TCF/LEF转录活化具有负性调节作用,其作用机制可能与NGX6抑制β-catenin的核转位有关。

紫色球海胆Tcf／lef基因的生物信息学分析

利用生物信息学方法寻找与人类Ⅱ型糖尿病相关的Tcf7L2基因在紫色球海胆中的同源基因Tcf/lef,对该基因的序列、外显子信息、编码蛋白及其理化性质进行分析,并预测其编码蛋白的结构与功能,构建其同源基因的系统进化树,旨在为今后的研究提供一定的依据。

小鼠出生后背部毛囊发育与Lef-1表达的研究

旨在研究Lef-1在小鼠背部毛囊生长周期中的表达规律及其与毛囊生长更替的关系。本试验采用石蜡切片HE染色、Western blotting以及免疫组织化学方法,研究小鼠毛囊的周期性变化,检测Lef-1在小鼠毛囊生长的不同时期皮肤组织中的蛋白表达水平,并对其进行组织定位。结果,昆明系小鼠毛囊生长呈周期性变化,处于不同生长时期的毛囊具有各期的特殊结构;Western blotting结果显示,在各阶段皮肤组织中存在Lef-1蛋白的表达,其在毛囊生长初期的表达量显著高于中期和末期;免疫组织化学结果显示,Lef-1在不同毛囊生长时期的皮脂腺、根鞘和真皮乳头均有不同程度的表达。Lef-1的表达与毛囊的周期性变化存在相关性。

ie-1和lef-1基因dsRNA表达元件转染及转化细胞对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制

通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕BmN细胞中,瞬时表达结果显示转染了转基因RNAi载体的BmN细胞均对BmNPV有一定的抑制作用。IE dsRNA在病毒滴度为10-4时有抑制作用,在病毒滴度为10-5时有比较好的作用;LEF dsRNA则在病毒滴度为10-5时有抑制作用,在病毒滴度为10-6时有较好的抑制作用。通过转基因及G418筛选后,转基因IE dsRNA细胞在病毒滴度为10-4显示出一定的抑制作用,在病毒滴度为10-5表现了明显的抑制作用;而转基因LEF dsRNA细胞在病毒滴度为10-5有一定的抑制作用,但只维持了一个时段。

LEF1介导MDR1/P-gp调控人结肠癌细胞多药耐药的研究

目的通过调节人结肠癌细胞HCT116及HCT116/L多药耐药细胞中LEF1(lymphoid enhancer factor-1,LEF1)的表达,以探讨LEF1对人结肠癌细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响及其对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的调控作用。方法应用LEF1过表达质粒pc DNA-LEF1和LEF1 siRNA上调及沉默人结肠癌细胞HCT116和奥沙利铂耐药细胞HCT116/L中的LEF1的表达,MTT法检测LEF1对HCT116和HCT116/L细胞化疗药物敏感性的影响;应用MDR1过表达质粒pc DNA-MDR1和MDR1 siRNA上调及沉默人结肠癌细胞HCT116-LEF1细胞(过表达LEF1细胞株)和HCT116/L-si LEF1(沉默LEF1奥沙利铂耐药细胞株)的MDR1的表达,MTT法检测MDR1对HCT116-LEF1细胞和HCT116/L-si LEF1细胞化疗药物敏感性的影响;real time-PCR、Western blot等方法检测多药耐药基因MDR1和P-gp蛋白的表达。结果 HCT116/L细胞中奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的半数抑制浓度(IC_(50))高于HCT116细胞(P<0.05),其LEF1、MDR1 mRNA和P-gp蛋白的表达水平均高于HCT116细胞(P<0.05)。过表达LEF1后,HCT116细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC_(50)分别由(15.04±2.68)μmol/L和(5.89±2.77)μmol/L上升至(74.16±9.05)μmol/L和(35.02±6.19)μmol/L(P<0.05),P-pg的蛋白表达水平亦明显升高(P<0.05);沉默LEF1表达后,HCT116/L细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC_(50)分别由(511.89±37.79)μmol/L和(220.22±66.33)μmol/L下降至(253.56±71.42)μmol/L和(94.94±25.45)μmol/L(P<0.05),P-gp的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。沉默MDR1表达后,HCT116-LEF1细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC_(50)分别由(85.68±8.46)μmol/L和(36.92±3.02)μmol/L下降至(29.86±5.93)μmol/L和(7.61±1.47)μmol/L(P<0.05)。过表达MDR1后,HCT116/L-si LEF1细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC_(50)分别由(216.55±49.63)μmol/L和(101.48±17.93)μmol/L上升至(351.46±23.31)μmol/L和(175.23±28.25)μmol/L(P<0.05)。结论 LEF1通过介导MDR1/P-gp的表达调控人结肠癌细胞HCT116对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的耐药,抑制LEF1过表达对于逆转结肠癌多药耐药具有重要意义。

LEF1和Jagged1在人结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,LEF1)和Jagged1在人结直肠癌组织中的表达及其意义。方法采取免疫组化SP法检测184例人结直肠癌组织及184例癌旁正常组织中LEF1和Jagged1的表达,分析两者与人结直肠癌临床病理因素之间的关系。结果 LEF1和Jagged1在人结直肠癌组织中的阳性表达率分别为68.5%和65.8%,均明显高于癌旁正常组织(P<0.001)。LEF1的表达与患者的淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P<0.05);Jagged1的表达与患者的组织分化程度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P<0.05)。LEF1和Jagged1在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.373,P<0.001)。结论 LEF1和Jagged1的高表达与结直肠癌发生发展以及转移密切相关,两者联合检测对人结直肠癌的早期诊断及判断预后具有一定的参考价值。

杆状病毒LEF-11蛋白自身相互作用关键区域的鉴定

【目的】家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)是蚕业上最常见且危害最为严重的病原微生物之一,其晚期表达因子(late expression factor,lef)LEF-11对病毒的增殖具有重要作用,相关研究证明LEF-11蛋白能够发生自身相互作用形成寡聚体,本研究通过逐步截短探究LEF-11蛋白自身相互作用的关键区域。【方法】利用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation)技术和荧光定位(fluorescent co-location)技术,首先根据Bm NVP lef-11及各个截短片段序列和荧光蛋白序列设计引物,通过PCR技术扩增回收得到所有片段以及荧光标签片段,并且通过限制性内切酶处理回收后,将荧光标签片段分别连接到昆虫细胞表达载体p IZ/V5-His上,构建p IZ-Ds Red和p IZ-EGFP质粒,然后用相同方法构建LEF-11全长和逐步截短的LEF-11红色荧光融合蛋白载体,分别与p IZ-LEF11-GFP共同转染到家蚕Bm N-SWU1细胞中,更换普通培养基48 h后固定细胞并制片,最后在荧光共聚焦显微镜下观察荧光融合蛋白表达及定位情况,鉴定LEF-11蛋白自身相互作用的关键区域;荧光双分子互补试验相关载体的构建步骤与荧光融合表达载体构建方法一致,转染处理及荧光观察方法也相同。【结果】杆状病毒LEF-11蛋白2—61和62—112端均能与LEF-11蛋白全长发生相互作用,分别共定位于细胞质和细胞核;逐步截短过程中,LEF-11蛋白N-端2—61、12—61、22—61、32—61、42—61和2—51均能与LEF-11蛋白全长共同定位于细胞质中,但其52—61、2—41未发生共定位;C-端截短片段能够与LEF-11蛋白全长发生共定位的有62—112、72—112、82—112、72—101和72—91,但92—112和72—81区域未发现共定位现象;双分子荧光互补试验结果验证LEF-11蛋白N-端片段与LEF-11蛋白全长相互作用的有2—61、12—61、22—61、32—61、42—61、2—51,而2—41、52—61截短突变体则不能,与N-端片段荧光共定位结果保持一致。【结论】鉴定到了杆状病毒LEF-11蛋白的42-51和82-91区域为其自身相互作用关键区域,可用于LEF-11相关功能研究。

棉铃虫核多角体病毒lef-3基因的序列分析

在棉铃虫核多角体病毒 (HelicoverpaarmigeraSingle nucleocapsidNucleopolyhedrovirus ,HaSNPV)基因组中发现了lef 3基因 ,该基因位于病毒基因组的BamHⅠ F片段上 ,全长 114 0bp ,编码 379个氨基酸 ,预计蛋白质分子量为 4 4kD ,启动子区具有TATAbox ,位于起始密码子ATG上游 4 0～ 4 3nt处 ,在终止密码子下游具典型的 poly(A)终止信号AATAAA。并且在它的氨基酸序列的N

IFITM1和Wnt/β-catenin信号通路在结肠癌发生发展中的作用

目的探究干扰素诱导跨膜蛋白1(IFITM1)在结肠癌中的表达以及其在结肠癌中发挥的作用。方法应用生物信息学分析IFITM1在结肠癌中的表达情况和预后情况,并分析IFITM1与β-连环蛋白的相关性。免疫组化观察IFITM1和β-catenin在结肠癌及癌旁组织中的表达情况。构建IFITM1过表达细胞模型,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,双荧光素酶报告基因检测TCF/LEF转录因子的激活情况,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路上关键蛋白β-catenin、C-myc、CyclinD1的表达情况。结果在线数据库分析结果显示,IFITM1在结肠癌中高表达(P<0.05),且与患者的预后不良显著相关;IFITM1与β-catenin之间存在正相关关系。免疫组化染色结果显示,IFITM1和β-catenin在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织,IFITM1的表达同肿瘤直径大小及组织浸润程度有关(P<0.05),与其他因素无关(P>0.05);β-catenin的表达与仅与肿瘤直径大小有关(P<0.05),与其余因素无关(P>0.05),且二者之间存在正向相关性。在结肠癌细胞HCT-15中过表达IFITM1后,OE-IFITM1组细胞的增殖能力显著高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组和MOCK组之间无差异(P>0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,OE-IFITM1组的启动子活性高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组与MOCK组之间无差异(P>0.05)。Western blot结果显示,OE-IFITM1组的β-catenin,CyclinD1,C-myc的表达量高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组和MOCK组之间蛋白表达无差异(P>0.05)。结论IFITM1在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织,并可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进细胞增殖。

中晚期食管癌AKR1C3、LEF1表达与放疗敏感性及预后的关系分析

目的研究中晚期食管癌醛固酮类还原酶家族1成员C3(AKR1C3)、淋巴细胞增强结合因子1(LEF1)表达与放疗敏感性及预后的关系。方法回顾性选择2017年1~12月期间唐山市人民医院收治的中晚期食管癌并接受调强放疗的患者作为研究对象。采用免疫组织化学检测食管癌中AKR1C3、LEF1的表达。放疗4周后,根据疗效评估结果分为放疗敏感组49例,放疗抵抗组25例。比较放疗敏感组与放疗抵抗组AKR1C3及LEF1表达、临床病理特征的差异。Logistics回归分析放疗敏感性影响因素。随访生存情况,比较不同AKR1C3、LEF1表达的食管癌患者预后差异。结果放疗抵抗组患者食管癌中AKR1C3及LEF1的阳性率、肿瘤最大横径≥4 cm及低未分化的患者比率分别为80.00%、84.00%、48.00%、56.00%,显著高于放疗敏感组(44.90%、48.98%、22.45%、30.61%),差异有统计学意义(P<0.05);经Logistics回归分析,AKR1C3、LEF1、肿瘤最大横径、分化程度是放疗敏感性的影响因素(P<0.05);经Kaplan-Meier曲线分析,AKR1C3及LEF1阳性表达的食管癌患者累积生存率低于AKR1C3、LEF1阴性表达的食管癌(P<0.05)。结论中晚期食管癌中AKR1C3、LEF1阳性表达与放疗抵抗及生存时间缩短有关。

LEF1在成人急性淋巴细胞白血病中的突变和表达及其临床意义

淋巴增强因子1(1ymphoid enhancer factor 1,LEF1)是Wingless-type(Wnt)信号通路中的重要转录因子。本研究旨在探讨成人急性淋巴细胞白血病(acute Lymphocytic Leukemia,ALL)中LEF1基因突变、表达特征及其临床意义。采用基因组DNA扩增、测序和荧光定量PCR等方法研究131例初发成人ALL患者中LEF1基因突变和表达,及其与临床预后参数和生存时间的相关性。结果显示,本组131例成人ALL患者中LEF1突变率3.1%(4/131),均为点突变(位于外显子2和3);初诊时外周血中位白细胞计数和中位原始幼稚淋巴细胞百分比在LEF1高表达组明显高于低表达组(70.6×109/L vs 26.2×109/L,P=0.010;81.0%vs 57.0%,P=0.014);费城染色体阳性ALL和高危患者比例LEF1高表达组显著高于低表达组(66.7%vs 36.5%,P=0.038;79.2%vs 56.2%,P=0.044)。结论:LEF1高表达在成人ALL的发病机制中可能具有重要意义。

白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-3p和Bcl-2表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;LEF1-AS1可靶向调控miR-23b-3p;转染si-LEF1-AS1可降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平以及凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-LEF1-AS1能够逆转白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性因子及凋亡的作用。结论白果内酯可通过调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性反应及凋亡,进而减轻细胞损伤。

β-catenin、LEF-1和PTEN在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨β-链蛋白(β-catenin)、淋巴增强因子-1(LEF-1)和PTEN在乳腺癌组织中的表达情况,并分析三者表达的相关性及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测65例乳腺癌组织、30例乳腺纤维腺瘤组织和30例癌旁组织中β-catenin、LEF-1和PTEN的表达,分析三者在乳腺癌组织中表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果在癌旁组织、乳腺纤维腺瘤组织及乳腺癌组织中β-catenin的阳性表达率分别为26.7%(8/30)、33.3%(10/30)、61.5%(40/65),LEF-1的阳性表达率分别为10.0%(3/30)、23.3%(7/30)、56.9%(37/65);PTEN的阳性表达率分别为90.0%(27/30)、83.3%(25/30)、41.5%(27/65),差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中三种蛋白的表达与年龄、肿瘤大小和肿瘤部位均无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。乳腺癌组织中β-catenin与LEF-1的表达呈正相关(r=0.845,P<0.05),β-catenin与PTEN的表达呈负相关(r=-0.874,P<0.05)。结论β-catenin、LEF-1和PTEN的异常表达与乳腺癌发生、发展、浸润、转移密切相关,三者的联合检测可能对判断乳腺癌生物学行为具有重要意义。