肠出血性大肠杆菌O157ler基因缺失突变株的构建及其特性

以肠出血性大肠杆菌O157∶H786～24为始发菌株,利用自杀性载体pCVD442,根据同源重组的原理敲除了染色体上的ler基因,构建了O157∶H7 ler基因缺失突变菌株,并对其生物学特性进行了初步研究。荧光定量PCR试验结果表明,始发菌株对HEp-2细胞的平均黏附数量是突变菌株的17倍。试验也证实了ler基因对LEE致病岛毒力基因的正调控作用,这为O157∶H7基因缺失突变弱毒疫苗株的建立奠定了基础。

肠致病性大肠杆菌O45ERIC/ler基因的克隆与序列分析

目的 测定肠致病性大肠杆菌O4 5株的ler基因及其上游ERIC序列 ,了解该菌株与其它种类的AEEC的ler基因及其上游ERIC序列有何差异 ,分析其亲缘关系 ,为研制AEEC的疫苗奠定基础。方法 用PCR方法扩增了PEPECO4 5的ler基因及其上游ERIC序列进行了测序 ,将其序列与另外四种AEEC的ler基因及上游序列进行序列分析比较 ,结果与结论 PEPECO4 5的ler基因及其上游序列与兔致病性大肠杆菌RDEC - 1和REPECO10 3的同源性最高 ,达到 97 9% ,而与EPECE2 348/ 6 9和EHECO15 7∶H7EDL933的同源性只有 78 9%。

大肠杆菌REPEC O103 ler基因缺失突变株的构建与免疫

目的 研究大肠杆菌致病岛LEE基因群中调节基因ler对细菌致病性和免疫原性的影响 ,评价基因缺失突变疫苗株的免疫效果 ,为人致病性和出血性大肠杆菌基因缺失突变疫苗的研制提供技术路线。方法 利用兔致病性大肠杆菌REPECO1 0 3为始发菌株 ,根据同源重组的原理 ,运用自杀性载体 pCVD442技术 ,敲除位于细菌染色体上的ler基因 ,构建ler基因缺失突变株 ,通过动物实验 ,检测基因缺失突变株的致病性和免疫保护作用。结果 构建了REPECO1 0 3ler基因缺失突变株 ,并证实ler基因细菌致病岛的正调控作用和对细菌生长的负调控作用。家兔实验研究表明 ,ler基因缺失突变株无致病性 ,但保留着良好的免疫原性。结论 首次揭示了ler调节基因与细菌致病性和免疫原性的关系 ,构建的REPECO1 0 3ler基因缺失突变株安全性好 ,具有良好的免疫保护作用 ,是理想的家兔的致弱疫苗候选株。