let-7/miR-98家族对IL-6的调节作用

目的探索微小RNA对IL-6的调节作用。方法通过生物信息学预测发现let-7/miR-98家族可以调控IL-6基因,采用聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫法检测其对IL-6基因表达的影响,采用定点突变和双荧光报告基因系统来验证let-7/miR-98家族对IL-6基因的直接调节作用。结果 miR-98可以抑制IL-6蛋白的表达,miR-98对IL-6 mRNA也有抑制作用,let-7/miR-98可直接调节IL-6基因3'UTR。结论 let-7/miR-98家族可以直接调节IL-6基因的表达,提示let-7/miR-98家族可能成为干预IL-6参与的相关疾病的一种新药物。

let-7/miR-98家族对Fas基因的调节作用

Fas在自身免疫病及肿瘤中发挥重要的作用。微小RNA是一种起负调控作用的分子。本研究旨在探索微小RNA对Fas基因的调节作用。生物信息学分析可能调节Fas基因表达的微小RNA,并通过聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测其对Fas基因表达的影响。利用定点突变和双荧光报告基因系统来验证微小RNA对Fas基因的直接调节作用。最后通过流式细胞术检测微小RNA对Fas介导的细胞凋亡的影响。结果,生物信息学分析发现let-7/miR-98家族可以调节Fas基因的表达。过表达miR-98可以降低Fas基因蛋白和mRNA水平的表达,反之,抑制miR-98可以增加Fas基因的表达。双荧光报告基因系统及定点突变实验显示:let-7/miR-98家族可直接调节Fas基因3'UTR。细胞凋亡检测显示:过表达miR-98可抑制Fas介导的细胞凋亡,抑制miR-98可以增加Fas介导的细胞凋亡。这说明let-7/miR-98家族可以直接调节Fas基因的表达并影响Fas介导的细胞凋亡,并可能成为干预Fas参与的相关疾病的一种新药物。

MiR-183及let-7家族在肝癌患者血清中的表达

目的:检测肝癌及良性肝病患者血清中miR-182、miR-96及let-7a、let-7b、let-7c、let-7e的表达量及其临床意义。方法:收集肝癌、肝硬化、肝炎患者和健康对照组的血清标本各58例、30例、40例、40例,采用荧光定量PCR分析各组间6种miRNA的相对表达量,分析肝癌组的相对表达量与临床病理因素间有无关系。结果:肝癌患者血清中miR-182和miR-96表达量均高于肝硬化血清、肝炎血清以及正常对照组(P<0.01);肝硬化组血清miR-182和miR-96水平均大于肝炎组及正常对照组(P<0.01)。肝炎组血清miR-96大于正常对照组(P<0.01)。肝癌组血清中let-7a的表达量低于肝硬化组、肝炎组及正常对照组(P<0.01)。肝癌组血清let-7c表达量大于肝炎组(P<0.01)。肝癌血清中let-7e的表达量大于肝硬化组(P<0.05)。结论:血清中miR-182及miR-96可能对肝癌有诊断价值,并可能预测肝癌的恶性程度及预后;血清中let-7家族对肝癌的诊断意义不显著。

miR-98和let-7bb抑制乳腺癌细胞的增殖影响

目的检测miR-98和let-7b在乳腺癌细胞中的表达水平,并研究其对乳腺癌细胞增殖的影响。方法收集乳腺癌患者和健康人对照的临床组织标本,RT-PCR检测其中miR-98和let-7b的表达水平。培养SKBR3细胞系,分别加入miR-98和let-7b的mimic或inhibitor,MTT法检测细胞增殖水平的变化。结果乳腺癌患者中miR-98和let-7b表达水平显著低于健康人的组织标本。加入miR-98和let-7b的mimic后,SKBR3细胞增殖受到抑制,而加入miR-98和let-7b的inhibitor后,乳腺癌细胞的增殖受到促进。结论miR-98和let-7b在乳腺癌中下调,并抑制乳腺癌细胞的增殖。

miRNAs对293T细胞IL-10表达调控的研究

目的探讨体外hsa-let-7、hsa-miR-98、hsa-miR-4458、hsa-miR-4500、hsa-miR-27a和hsa-miR-27b对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)表达的影响。方法通过生物信息学分析预测IL-10靶向的miRNAs。在体外培养的293T细胞中瞬时转染候选miRNAs类似体,提取总RNAs,应用real time PCR检测IL-10的表达。结果在293T细胞中上调let-7、miR-98、miR-27a和miR-27b的表达,IL-10表达分别下调了46.72%、58.57%、65.29%和57.37%(P<0.01)。上调miR-4458及miR-4500水平,IL-10表达无明显下调(P>0.05)。结论 let-7、miR-98和miR-27a/b对293T细胞中IL-10的表达存在负调控功能,IL-10可能为其靶基因。