非小细胞肺癌组织中let-7、K-ras基因的表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌组织中let-7、K-ras基因的表达变化,并探讨其意义。方法采用实时定量PCR技术检测30例非小细胞肺癌组织及其癌旁正常组织中的let-7、K-ras基因。结果 let-7基因在非小细胞肺癌组织中的表达量为0.761 6±0.388 3,低于癌旁正常组织的2.279 0±1.163 1(P<0.01),K-ras基因在非小细胞肺癌组织中的表达量为3.296 6±1.328 4,高于癌旁正常组织的1.387 3±0.681 2(P<0.01)。非小细胞肺癌组织中let-7与K-ras基因的表达呈负相关(r=-0.834 3,P<0.01)。结论非小细胞肺癌组织中let-7表达下降而K-ras基因表达上升,两者共同参与了非小细胞肺癌的发生、发展过程。

卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a、Let-7a表达变化及与患者预后的关系

目的观察卵巢浆液性囊腺癌组织中微小RNA-20a(miR-20a)和Let-7a的表达变化,并探讨二者与患者预后的关系。方法卵巢浆液性囊腺癌患者93例,术中留取肿瘤组织。分别留取同期手术治疗的卵巢交界性肿瘤患者(43例)及卵巢浆液性囊腺瘤患者(48例)的肿瘤组织,留取正常卵巢组织(40例份)。采用real-time PCR技术检测不同组织中的miR-20a和Let-7a。采用Kaplan-Meier法分析卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a、Let-7a表达与患者预后的关系。结果各种卵巢肿瘤组织中miR-20a表达量高于正常卵巢组织、Let-7a表达量低于正常卵巢组织(P均<0.05);卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a表达量高于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织、Let-7a表达量低于卵巢交界性肿瘤组织及卵巢浆液性囊腺瘤组织(P均<0.05)。miR-20a、Let-7a与卵巢浆液性囊腺癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移和远处转移发生情况有关(P均<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a与Let-7a表达呈负相关关系(r=-0.489,P<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌患者随访至2014年2月28日,miR-20a表达量>1.42者中位生存时间短于miR-20a表达量≤1.42者,Let-7a表达量<0.98者中位生存时间短于Let-7a表达量≥0.98者(P均<0.05)。结论卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-20a呈高表达、Let-7a呈低表达,二者可能共同参与了卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展,并与患者预后有关。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的:探讨Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达情况及与各种临床病理特征的关系。方法:采用茎环RT-PCR方法检测40例乳腺浸润性导管癌及其对应的正常乳腺组织中Let-7c的表达,分析Let-7c表达与临床分期、淋巴结转移、增殖指数等临床病理特征的关系。结果:用茎环RT-PCR方法检测Let-7c表达的敏感性和特异性良好;Let-7c在乳腺癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.05);Let-7c的表达与乳腺癌的增殖指数有关(P<0.05),与雌孕激素受体状态亦有关,与是否绝经、乳腺癌的TNM分期、淋巴结转移未见显著统计学意义(P>0.05)。在高增殖指数、雌孕激素受体阴性的肿瘤组Let-7c表达明显降低。结论:Let-7c在乳腺浸润性导管癌中的表达异常,可能和乳腺癌的发生和发展有关,有望成为乳腺癌新的预后指标及治疗靶点。

颞叶癫痫大鼠癫痫持续状态后海马组织中let-7e和miR-23的表达变化

目的观察颞叶癫痫大鼠海马组织中let-7e和miR-23在癫痫持续状态（SE）后不同时间点的表达变化。方法 160只大鼠,随机分为生理盐水对照组10只、癫痫模型组150只,癫痫模型组制备氯化锂-匹罗卡品诱导的颞叶癫痫大鼠模型,并将SE后不同时间点（0 h、1 h、6 h、12 h、1天、2天、7天、10天、30天、50天）分为10个组,每组15只。采用荧光实时定量PCR检测各组大鼠海马组织let-7e和miR-23。结果癫痫模型组SE后0 h、1 h、6 h、12 h、1天、2天、7天、10天、30天、50天let-7e相对表达量分别为0.61、0.84、0.85、1.40、10.74、0.71、0.65、1.52、1.69、0.13,miR-23相对表达量分别为0.27、0.31、0.41、0.39、4.49、0.21、0.18、0.12、0.83、2.40,与生理盐水对照组比较,P均〈0.05。结论颞叶癫痫大鼠SE后海马组织中let-7e和miR-23均先出现表达水平上调,24 h达到峰值后表达水平下调,let-7e在10～30天表达水平再次升高,miR-23在30～50天表达水平再次升高。

微小核糖核酸let-7c对肝癌细胞增殖的影响及其靶基因分析

目的分析微小核糖核酸(mi RNA)let-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抑制肝癌细胞增殖的临床意义,并探讨其对肝癌细胞增殖的影响以及靶基因。方法选取人低转移肝癌细胞-97L(MHCC-97L)、人高转移肝癌细胞(HCCLM3)、人肝癌组织(HepG2)、人肝癌细胞-7721(SMMC-7721)、人肝细胞LO2、小鼠抗人细胞周期蛋白依赖激酶抗体等进行细胞培养,利用Western blot检测转染后小鼠CDK6表达情况,转染48 h后应用细胞裂解液对三组蛋白进行提取,将材料分为观察组、对照组、空白组,观察组转染let-7c,对照组转染阴性对照miRNA,空白组未进行转染处理;应用二喹啉甲酸法对各孔细胞蛋白浓度进行测定。结果let-7c对肝癌细胞HCCLM3增殖结果显示,于450 nm处观察组、对照组转染后24 h吸光度值差异无统计学意义(P>0.05);转染48 h后观察组、对照组HCCLM3细胞中CDK6蛋白含量发生较大变化,观察组的CDK6蛋白表达量为(0.58±0.05),均低于对照组的(0.81±0.08)与空白组(0.85±0.09)(t=10.107、13.876,均P<0.05);转染后72 h,观察组细胞处于G1期比例为(56.21±3.25)%,明显高于对照组的(45.21±1.56)%与空白组的(46.24±1.98)%,差异均有统计学意义(t=16.146、13.862,均P=0.000)。结论肝癌细胞中let-7c呈低表达,将let-7c上调可有效调控CDK6,从而抑制癌细胞生长,对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用。

脂氧素A4对高氧损伤小鼠肺上皮细胞的保护机制研究

目的 探讨脂氧素A4（lipoxin A4,LXA4）通过let-7c基因/转化生长因子 β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）信号通路保护高氧损伤小鼠肺上皮细胞MLE-12的作用机制.方法 体外传代培养MLE-12细胞,待其生长至接近融合状态时,随机分为高氧空白组、LXA4组、let-7c过表达组、let-7c沉默组、let-7c沉默＋LXA4组.各实验组均暴露于85%氧气中,LXA4组给予LXA4干预,let-7c过表达组和let-7c沉默组分别利用脂质体3000转染建立let-7c过表达或let-7c沉默细胞株.let-7c沉默＋LXA4组给予LXA4干预let-7c沉默细胞株.实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞外基质,包括 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagenⅠ,COL-Ⅰ）、TGF-β1信号通路及相关下游基因Smad 2、Smad 3、Smad 4、转化生长因子β1受体（TGF-βR1）、转化生长因子 β2受体（TGF-βR2）mRNA水平.Western blot检测TGF-β1信号蛋白Smad 2、Smad 3、Smad 4、p-Smad 2、p-Smad 3和TGF-βR1的表达.结果 LXA4组和let-7c过表达组细胞α-SMA、COL-Ⅰ、Smad 3、Smad 4、TGF-βR1、TGF-βR2 mRNA（＆#215;10-4）[LXA4组：（24.3±2.1）、（14.6±0.2）、（17.0±0.0）、（14.9±0.1）、（20.8±0.1）、（9.0±0.0）,let-7c过表达组：（12.2±0.5）、（3.0±0.0）、（3.1±0.0）、（9.6±0.4）、（28.5±0.2）、（7.6±0.1）]低于高氧空白组[（51.4±0.5）、（32.0±0.1）、（40.6±0.2）、（16.3±0.1）、（89.1±1.1）、（19.3±0.2）],let-7c沉默组和let-7c沉默＋LXA4组[let-7c沉默组：（87.3±7.0）、（38.5±0.3）、（48.0±0.2）、（56.5±0.2）、（126.0±0.9）、（33.1±1.0）,let-7c沉默＋LXA4组：（144.5±12.9）、（86.3±3.0）、（91.5±4.7）、（86.5±3.3）、（109.0±4.5）、（45.6±1.6）]高于高氧空白组;LXA4组和let-7c过表达组细胞Smad 2、Smad 3、Smad 4、p-Smad 2、p-Smad 3、TGF-βR1蛋白低于高氧空白组,let-7c沉默＋LXA4组p-Smad 2、p-Smad 3高于高氧空白组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 LXA4可能通过let-7c/TGF-β1信号通路发挥对高氧损伤小鼠肺上皮细胞的保护作用.