Let-7e-5p调控Fas/FasL影响小鼠变应性鼻炎发病的机制研究

目的探讨let-7e-5p对小鼠变应性鼻炎的影响及机制。方法将18只BALB/c小鼠按随机数字表法均分为对照(Control)组、变应性鼻炎(AR)组、let-7e-5p激动剂阴性对照(AR+agomir-NC)组、let-7e-5p激动剂(AR+agomir)组、let-7e-5p抑制剂阴性对照(AR+antagomir-NC)组和let-7e-5p抑制剂(AR+antagomir)组。除Control组外,其余组应用卵白蛋白(OVA)致敏建立AR模型,AR+agomir组和AR+antagomir组同时给予let-7e-5p agomir或let-7e-5p antagomir进行干预,末次激发致敏后对小鼠变应性鼻炎进行评分,HE染色观察鼻黏膜组织,统计嗜酸性粒细胞数量,real-time PCR检测let-7e-5p、Fas、FasL m RNA表达,Western blot检测Fas、FasL蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测血清免疫球蛋白E(IgE)、特异性IgE(sIgE)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-13水平,双荧光素酶实验分析let-7e-5p和Fas、FasL的靶向关系。结果与Control组比较,AR组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增生明显,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平下降,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05)。与AR+agomir-NC组比较,AR+agomir组小鼠变应性鼻炎评分降低,鼻黏膜结构清晰,嗜酸性粒细胞数量减少,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平升高,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平下降(均P<0.05)。与AR+antagomir-NC组比较,AR+antagomir组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增厚,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达减少,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05),IL-12、IFN-γ水平差异无统计学意义。与NC+3’UTR-WT组比较,let-7e-5p agomir+3’UTR-WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。结论Let-7e-5p通过靶向调节Fas/FasL影响1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)平衡,从而参与AR小鼠变应性鼻炎发病的进展。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

血浆miR-let-7e-5p、LncRNA NEAT1表达水平与2型糖尿病视网膜病变的关系

目的检测2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血浆中微小RNA-let-7e-5p(minute RNA-let-7e-5p,miR-let-7e-5p)和长链非编码核富含丰富的转录本1(lncRNA nuclear-enriched abundant transcript 1,LncRNA NEAT1)的表达水平,并讨论其与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法从我院选取收治的T2DM患者126例纳入研究,根据有无DR情况分为84例DR组和42例非DR组,根据DR分级标准分为31例非增生型DR(non-proliferative DR,NPDR)和53例增生型DR(proliferative DR,PDR)。采用荧光定量聚分酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测T2DM患者血浆中miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1的表达水平,比较各组间miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1表达水平的差异;Pearson相关系数分析DR组患者血浆miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1表达水平的相关性;ROC曲线检测miR-let-7e-5p、LncRNA NEAT1对DR的诊断价值。结果非DR患者相比,PDR和NPDR患者的血浆miR-let-7e-5p表达水平降低,LncRNA NEAT1表达水平增加(P<0.05);并且与NPDR组相比,PDR组的血浆miR-let-7e-5p表达水平降低,LncRNA NEAT1表达水平升高(P<0.05);DR患者血浆miR-let-7e-5p与LncRNA NEAT1呈负相关(r=-0.534,P<0.05);miR-let-7e-5p诊断DR的AUC为0.856(95%CI:0.789~0.924),敏感度为77.38%,特异度为80.95%;LncRNA NEAT1诊断DR的AUC为0.844(95%CI:0.778~0.910),敏感度为69.05%,特异度为95.24%;两者联合诊断DR的AUC为0.935(95%CI:0.891~0.978),敏感度为88.10%,特异度为92.86%,两者联合对DR患者具有较高的诊断能力。结论miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1与T2DM患者DR的发生和进展有关,可能作为诊断DR发生的一种潜在生物标志物,且两者联合的诊断能力更佳。

hsa-let-7e-5p对肺腺癌细胞迁移的影响

目的筛选肺腺癌中差异表达的环状非编码RNA(miRNA),并分析其对肺腺癌(LUAD)迁移的影响及潜在机制。方法通过miRNA芯片筛选出LUAD组织和正常肺组织中差异表达的miRNA并预测其潜在的生物学功能和信号通路;通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和癌症基因组图谱(TCGA)分析验证hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中的表达水平;通过划痕试验检测hsa-let-7e-5p对LUAD细胞迁移的影响;通过生物信息学分析和qRT-PCR验证hsa-let-7e-5p与基因DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57之间的靶向关系。结果miRNA芯片结果显示肺腺癌组织中347个miRNA下调而229个miRNA上调。hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中下调,过表达hsa-let-7e-5p可以抑制肺腺癌细胞迁移。结论hsa-let-7e-5p在肺腺癌中低表达并抑制肺腺癌细胞的迁移,DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57是hsa-let-7e-5p的潜在靶基因。

外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险之间的关联性

目的探讨外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险的相关性。方法去将2018年4月~2019年4月在公安县人民医院就诊的缺血性脑卒中患者作为研究对象(观察组),对照组为在本院进行常规检查且年龄、性别满足研究标准者,使用实时定量PCR法测定患者外周全血let-7e-5p表达水平,深入剖析缺血性脑卒中患者miRNA表达水平与发病风险间的关联性。结果外周全血let-7e-5p表达水平上升时,患者发病风险也会随之出现快速升高的情况,校正处理传统风险和血脂水平以后,依然与之存在着直接的联系。在模型I里面,ROC曲线下,外周全血let-7e-5p表达水平的面积与传统危险因素的面积基本相同。纳入miRNA后,外周全血let-7e-5p表达水平的面积却出现了大幅度增加,表现出较强的差异性,且有统计学意义。结论缺血性脑卒中发病风险与let-7e-5p表达水平之间存在着明显的关联。

参附注射液调控microRNA-let-7e-5p的表达改善大鼠心肌肥大

目的:研究参附注射液对大鼠心肌肥大模型microRNA-let-7e-5p的调控机制。方法:取健康SD大鼠行腹主动脉缩窄手术建立心肌肥大模型,分成3组:参附注射液组(SFI,6.0m L·kg-1·d-1);模型组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);假手术组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);腹腔注射相应药物,连续12周。采用茎环Realtime RT-PCR方法检测大鼠心肌microRNA-let-7e-5p的表达。利用生物信息学方法分析microRNA-let-7e-5p的候选靶基因,并用RT-PCR与Western Blot方法检测靶基因Caspase-3的m RNA与蛋白表达水平。结果:模型组大鼠心肌mi RNA-let-7e-5p下调,Caspase-3 m RNA及蛋白过表达;参附注射液组大鼠心肌microRNA-let-7e-5p表达量、Caspase-3 m RNA及蛋白表达水平与假手术组接近。结论:mi RNA-let-7e-5p在心肌肥大中可能发挥重要作用,参附注射液可能通过上调或维持mi RNA-let-7e-5p的表达,降低Caspase-3的水平,抑制腹主动脉缩窄大鼠心室重构,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大有明显的治疗作用。

外周血let-7e-5p作为缺血性脑卒中生物标志物的研究

目的探讨外周血let-7e-5 p的表达水平与缺血性脑卒中发病风险之间的关联,以及其作为缺血性脑卒中生物标记物的可行性。方法选择302例2013年在深圳市人民医院确诊的缺血性脑卒中初发病例,以及302例与之年龄性别相匹配的在医院做常规健康检查的对照,采用实时定量PCR检测外周全血let-7e-5 p的表达水平,多元logistic回归分析miRNA表达水平与缺血性脑卒中发生的关联,应用受试者工作特征曲线（ROC）和重新分类方法分析miRNA是否可作为判断缺血性脑卒中的依据。结果缺血性脑卒中病例外周血中let-7e-5 p的表达水平高于对照,差异有统计学意义（P〈0.05）。let-7e-5 p表达水平升高与缺血性脑卒中发病风险的增加存在显著关联性[OR=2.13,95%CI,1.75-2.59]。与传统危险因素模型相比,加入let-7e-5 p可以显著增加曲线下面积且差异有统计学意义（P〈0.05）,重分类改善幅度为16.76%（95%CI：11.16%-22.37%）,综合判别指数为0.10（95%CI：0.08-0.13）。另外,病例组中let-7e-5 p表达水平与血小板数量和血小板压积呈显著负相关关系（P〈0.05）。结论外周血let-7e-5 p的表达水平与缺血性脑卒中发生之间存在显著关联性,let-7e-5 p有望作为缺血性脑卒中的生物标记物。