外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险之间的关联性

目的探讨外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险的相关性。方法去将2018年4月~2019年4月在公安县人民医院就诊的缺血性脑卒中患者作为研究对象(观察组),对照组为在本院进行常规检查且年龄、性别满足研究标准者,使用实时定量PCR法测定患者外周全血let-7e-5p表达水平,深入剖析缺血性脑卒中患者miRNA表达水平与发病风险间的关联性。结果外周全血let-7e-5p表达水平上升时,患者发病风险也会随之出现快速升高的情况,校正处理传统风险和血脂水平以后,依然与之存在着直接的联系。在模型I里面,ROC曲线下,外周全血let-7e-5p表达水平的面积与传统危险因素的面积基本相同。纳入miRNA后,外周全血let-7e-5p表达水平的面积却出现了大幅度增加,表现出较强的差异性,且有统计学意义。结论缺血性脑卒中发病风险与let-7e-5p表达水平之间存在着明显的关联。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

Let-7e-5p调控Fas/FasL影响小鼠变应性鼻炎发病的机制研究

目的探讨let-7e-5p对小鼠变应性鼻炎的影响及机制。方法将18只BALB/c小鼠按随机数字表法均分为对照(Control)组、变应性鼻炎(AR)组、let-7e-5p激动剂阴性对照(AR+agomir-NC)组、let-7e-5p激动剂(AR+agomir)组、let-7e-5p抑制剂阴性对照(AR+antagomir-NC)组和let-7e-5p抑制剂(AR+antagomir)组。除Control组外,其余组应用卵白蛋白(OVA)致敏建立AR模型,AR+agomir组和AR+antagomir组同时给予let-7e-5p agomir或let-7e-5p antagomir进行干预,末次激发致敏后对小鼠变应性鼻炎进行评分,HE染色观察鼻黏膜组织,统计嗜酸性粒细胞数量,real-time PCR检测let-7e-5p、Fas、FasL m RNA表达,Western blot检测Fas、FasL蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测血清免疫球蛋白E(IgE)、特异性IgE(sIgE)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-13水平,双荧光素酶实验分析let-7e-5p和Fas、FasL的靶向关系。结果与Control组比较,AR组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增生明显,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平下降,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05)。与AR+agomir-NC组比较,AR+agomir组小鼠变应性鼻炎评分降低,鼻黏膜结构清晰,嗜酸性粒细胞数量减少,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平升高,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平下降(均P<0.05)。与AR+antagomir-NC组比较,AR+antagomir组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增厚,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达减少,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05),IL-12、IFN-γ水平差异无统计学意义。与NC+3’UTR-WT组比较,let-7e-5p agomir+3’UTR-WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。结论Let-7e-5p通过靶向调节Fas/FasL影响1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)平衡,从而参与AR小鼠变应性鼻炎发病的进展。

静原鸡let-7a-5p的靶基因预测及组织表达分析

【目的】了解let-7a-5p的生物学信息,初步探索其在静原鸡肌肉组织中的功能作用。【方法】利用生物信息学方法对转录组测序获得的静原鸡let-7a-5p的成熟序列进行保守性分析,使用miRDB、TargetScan和miRanda在线软件预测let-7a-5p的靶基因,取其交集进行GO功能和KEGG通路富集分析,并利用实时荧光定量PCR检测let-7a-5p在静原鸡公鸡和母鸡各组织中的表达水平。【结果】let-7a-5p的成熟序列在各物种间高度保守,共预测得到38个基因集合。在生物过程、细胞组分和分子功能中靶基因富集较多的GO条目有细胞过程、生物调节、细胞、结合和催化活性;靶基因显著富集于聚酮糖单元生物合成、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解、TGF-β信号通路和加压素调节的水重吸收信号通路,且富集最多的是代谢途径、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、泛素介导的蛋白水解和MAPK信号通路。let-7a-5p-靶基因互作主要通过作用于靶mRNA的3′-UTR抑制表达或使其降解。组织表达发现,let-7a-5p在静原鸡公、母鸡的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌和腿肌组织中均有表达,且在胸肌和腿肌中表达量均较高。【结论】let-7a-5p可能靶向调节靶基因的表达,从而参与静原鸡肌肉生长发育,为进一步探究let-7a-5p的功能和作用机制提供理论依据。

肺腺癌和膀胱癌let-7f-5p表达差异分析及功能研究

目的探讨let-7f-5p在肺腺癌和膀胱癌组织及对应肿瘤细胞系中的表达情况和功能差异。方法通过Star-Base调取肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)中let-7f-5p的表达数据,分析其在肺腺癌和膀胱癌这两种癌症组织中的表达情况;然后各选择2种肺腺癌和膀胱癌细胞系以及其对应正常上皮细胞(人正常肺上皮细胞BEAS-2B,人肺腺癌细胞系H1299和SPCA1,人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1,人膀胱癌细胞系5637和J82),并在细胞水平分析let-7f-5p在不同肿瘤细胞系中的表达差异;通过CCK-8法分别检测过表达let-7f-5p对H1299和5637细胞增殖的影响;通过Transwell实验分别检测过表达let-7f-5p对H1299和5637细胞迁移与细胞侵袭能力的影响。结果生物信息学分析结果显示,let-7f-5p在肺腺癌组织中的表达量与正常组织对照相比较低,而在膀胱癌组织中的表达量却显著高于正常对照组织。细胞水平的检测结果与组织表达结果一致,let-7f-5p在肺腺癌细胞H1299和SPCA1中的表达低于在正常肺上皮细胞中的表达(P=0.0002),而let-7f-5p在膀胱癌细胞5637和J82中的表达高于在正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中的表达,P=0.0005。Transwell迁移实验结果显示,肺腺癌细胞H1299过表达let-7f-5p迁移细胞数目(68±3)低于对照迁移数目(95±6),t=12.671,P=0.0267;而膀胱癌细胞5637过表达let-7f-5p迁移细胞数目(165±12)高于对照迁移数目(99±8),t=9.593,P=0.0062。Transwell侵袭实验结果显示,肺腺癌细胞H1299过表达let-7f-5p侵袭细胞数目(74±2)低于对照侵袭数目(101±3),t=4.781,P=0.0104;而膀胱癌细胞5637过表达let-7f-5p侵袭细胞数目(186±11)高于对照侵袭数目(107±8),t=13.135,P=0.0089。结论let-7f-5p在不同类型的肿瘤中表达特点不同,发挥的功能也可能不同。因此不能简单的认定let-7f-5p是一种促癌因子或者抑癌因子。let-7f-5p在其他肿瘤中的作用还有待进一步研究。