FLT3^-的AML细胞对PKC412体外敏感性的初步研究

目的:探索PKC412(midostaurin,米哚妥林)在FLT3^-AM L患者治疗中的价值。方法:无菌采集21例FLT3^-的初治AML患者骨髓血或外周血肝素抗凝,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,采用三磷酸腺苷生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP bioluminescence-tumor chemosensitivity assay,ATP-TCA)测定白血病细胞体外对8种浓度PKC412的敏感性,并分析其体外药敏结果、危险度分层及临床疗效三者之间的关系。结果:21例AML患者的白血病细胞在体外对PKC412的反应不相同,体外敏感率为42.9%,体外敏感浓度为1-5μmol/L。PKC412体外药敏结果与患者危险度分层之间无相关性,与临床疗效之间也无相关性。低、中危组患者的存活率著优于高危组患者(P=0.015)。结论:PKC412可能是FLT3^-初治AML的有效治疗手段之一;白血病细胞对PKC412的敏感性有可能成为判断PKC421疗效的独立预测指标。

米哚妥林对急性白血病细胞株HL-60细胞抑制效应的研究

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂米哚妥林(PKC412)对HL-60细胞株增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度PKC412对HL-60细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法鉴定PKC412对HL-60细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测BCL-2、P53基因的mRNA表达,Western blot检测BCL-2、P53蛋白的表达;以尾静脉注射HL-60细胞构建急性白血病小鼠模型,以PKC41231.25nmol/kg尾静脉给药,生理盐水组作为对照组,研究PKC412在小鼠体内对HL-60细胞的抑制;ELISA法检测PKC412对肿瘤小鼠细胞因子TNF-α和TGF-β分泌的影响。结果:PKC412抑制HL-60细胞株细胞增殖,呈剂量依赖性(r=0.9973),其中IC50=0.31μmol/L;并能诱导HL-60细胞凋亡。PKC412作用HL-60细胞株48 h后,与对照组比较BCL-2基因mRNA表达下调(0.417±0.044 vs 0.933±0.033,t=9.347,P<0.001),P53基因mRNA表达上调(1.533±0.145 vs 1.050±0.161,t=2.231,P>0.05);BCL-2蛋白表达量下降,P53蛋白表达量升高。PKC412在体内可抑制HL-60肿瘤细胞生长,给药后小鼠生存率为50%,与对照组比较体重增加(18.02±0.403 g vs 16.44±0.562 g,t=2.272,P=0.0356)。PKC412组血清及脾细胞中TNF-α和TGF-β细胞因子较对照组分泌明显减少(P<0.05)。结论:PKC412能通过抑制BCL-2基因表达水平诱导HL-60细胞凋亡,体内给药可抑制肿瘤的生长。

米哚妥林衍生物5'''-methoxyfradcarbazole A对小鼠白血病CB3细胞的作用及机制研究

目的研究米哚妥林衍生物5'''-methoxyfradcarbazole A对小鼠白血病细胞CB3生长抑制的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测化合物5'''-methoxyfradcarbazole A对小鼠白血病细胞CB3细胞增殖的影响,并测定其生长抑制曲线;利用流式细胞术测定细胞凋亡、周期和分化的结果;Western blot分析5'''-methoxyfradcarbazole A对细胞周期、凋亡相关蛋白的影响。结果化合物5'''-methoxyfradcarbazole A对小鼠白血病细胞具有显著的生长抑制作用,其IC50值为(0.587±0.135)μmol·L-1;5'''-methoxyfradcarbazole A能够诱导CB3细胞产生早期凋亡和晚期凋亡,并表现出时间和浓度的依赖性;其还能影响CB3的细胞周期,明显增高G2期比例;5'''-methoxyfradcarbazole A促进血小板分化标志物CD41和红细胞分化标志物Ter119表达的增加;此外,5'''-methoxyfradcarbazole A作用CB3细胞后显著增加凋亡相关蛋白Bim、PARP1和细胞周期蛋白P21的表达,降低磷酸化ERK蛋白的表达。结论5'''-methoxyfradcarbazole A通过促进凋亡蛋白Bim的表达增加小鼠白血病细胞CB3的凋亡,通过增加细胞周期蛋白P21的表达使CB3细胞发生G2期阻滞;此外,PARP1及磷酸化的ERK蛋白表达水平变化也在一定程度上解释了5'''-methoxyfradcarbazole A对CB3细胞的生长抑制作用。