Reversing effect of Tanshinone on malignant phenotypes of human hepatocarcinoma cell line

AIM To study the reversing effect of Chinese drug tanshinone on malignant phenotype of cancer cells.METHODS Human hepatocarcinoma cell line (SMMC-7721) was treated in vitro with 0.5mg/L tanshinone for 4 days, and variation in cell differentiation was detected.RESULTS The morphology of cancer cells was tended toward well differentiation and cell growth was markedly inhibited. BrdU uptake assay and immunohistochemical stain of PCNA showed that the BrdU labeling rate and PCNA positive rate were lower than the controls, but no difference was found statistically as compared with all transretinoic acid. Flow cytometric assay demonstrated that S phase cells decreased and G0/G1 phase cells increased. Expression of c-myc oncogene protein decreased but the c-fos oncogene protein markedly increased.CONCLUSION Tanshinone could reverse the inducing differentiation in human hepatocarcinoma cells (SMMC-7721). It may become a new prospective inducer of cell differentiation to treat cancers.

Evaluation of proliferative activities in Wilms′ tumor

目的 :评价 PCNA标记指数及 Ag NORs计数在肾母细胞瘤增殖活性判定中的意义。方法 :对 34例肾母细胞瘤标本进行 PCNA免疫组织化学染色及核仁组织区嗜银蛋白组织化学染色。结果 :PCNA- LI与病理学分型及临床分期无关 ,但 PCNA- LI≥ 2 5 %组的 S期细胞数、PI值及Ag NORs数量均显著高于 PCNA- LI<2 5 %组 ;Ag NORs计数与病理学分型及临床分期关系密切 ;PCNA- LI与 Ag NORs计数结合可准确反映肾母细胞瘤的增殖活性。结论 :目前肾母细胞瘤的病理学分型和临床分期可以反映其侵袭性 ,但并不充分 ;在准确评价肾母细胞瘤生物学特性方面 ,PCNA- LI与 Ag

三氧化二砷对人肝癌细胞的体外作用及其机制

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞BEL7402的体外作用及其机制。方法:采用MTT法观察As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期、凋亡相关蛋白bcl-2阳性细胞百分率、增殖细胞核抗原(PCNA)变化。结果:As2O3可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著(r=0.965 0,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)为4.93μmol.L-1;As2O3能显著下调PCNA蛋白表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期,但对bcl-2表达无影响(P>0.05)。结论:As2O3可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长,其机制可能与下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。

胃癌雌激素受体与PCNA的关系

目的探讨雌激素在胃癌发生、发展中的作用及临床意义.方法应用流式细胞术检测31例胃癌组织、10例正常胃组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)和细胞周期蛋白 D_1(cyclinD_1)表达量;应用免疫组织化学法检测31例胃肠癌组织、10例正常胃肠组织中 ER 和增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear,PCNA)蛋白表达.结果流式细胞术定量检测结果表明,胃癌组织 ER 表达量(FI,1.19±0.23)明显高于正常胃组织(FI,1.00±0.04,P<0.01);胃癌组织 cyclinD_1表达量(FI,1.33±0.17)明显高于正常胃组织(FI,1.00±0.09,P<0.01).胃癌组织 ER 表达量与 cyclinD_1表达量存在正相关关系(r_s=0.40,P<0.05).免疫组织化学染色结果表明,胃癌组织 ER 表达阳性率为45%(14/31),明显高于正常胃组织0%(0/10,P<0.01);胃癌组织 PCNA 蛋白表达阳性率为97%(30/31),明显高于正常胃组织0%(0/10,P<0.01),且胃癌组织 ER 表达等级与 PCNA 蛋白表达等级间存在正相关关系(r_s=0.44,P<0.05).结论雌激素在胃癌发生、发展中有促进细胞增殖的作用,部分胃癌很有可能是雌激素依赖性肿瘤.

大肠癌CD24的表达及其与肿瘤细胞增殖和血管形成的关系

目的:探讨CD24在大肠癌中的表达及其与细胞增殖、血管生成的关系.方法:运用流式细胞术直接免疫荧光法检测66例大肠癌肿瘤组织及相应正常大肠黏膜CD24的表达量.CD24蛋白表达量以阳性率(PPC)和平均荧光强度MFI值表示.运用免疫组织化学法检测肿瘤组织CD34,PCNA的表达情况,根据CD34的染色情况计算出大肠癌组织的微血管密度(microvessel density),根据PCNA染色情况计算出肿瘤细PCNA标记指数.结果:大肠癌肿瘤组织CD24阳性率90.40%(75.10%-96.35%)明显高于相应的癌旁组织36.15%(32.00%-53.28%)(χ2=6.877,P<0.001).大肠癌肿瘤组织CD24蛋白MFI值18.10(11.45-25.43),明显高于正常黏膜组织8.41(5.59-10.33)(χ2=6.934,P<0.001).浸润型、高Dukes分期、高pTNM分期及有淋巴结转移的癌组织中CD24蛋白的平均荧光强度显著高于对应组(P<0.05).浸润型、低分化、高Dukes分期、高pTNM分期及有淋巴结转移的癌组织中CD24蛋白阳性百分率显著高于对应组(P<0.05).在CD24阳性表达病例中,PCNA的表达随着CD24表达强度的升高而升高(P<0.05).大肠腺癌肿瘤细胞CD24阳性表达率与MVD呈正相关(r=0.243,P=0.050).而CD24蛋白平均荧光强度与MVD未见明显相关(r=0.115,P=0.358).结论:CD24在大肠腺癌中表达水平明显上调,并与肿瘤细胞增殖、血管生成密切相关.

白血病细胞的Ki-67表达与细胞周期的关系

用ABC方法检测白血病细胞Ki-67阳性率,并与同时用流式细胞仪检测的DNA倍体、S+G_2M细胞比例作比较,发现Ki-67阳性率与S+G_2M细胞比例关系十分密切;二者与DNA倍体之间都有非常显著关系。在白血病各亚型中,Ki-67阳性率与S+G_2M细胞比例表现一致。白血病组高于对照组;急性白血病组高于慢性白血病组;急性淋巴细胞白血病组高于急性非淋巴细胞白血病组。急性白血病中,治疗前Ki-67阳性率和S+G_2M细胞比例在缓解组低于未缓解组。因此,可以认为用ABC方法检测Ki-67阳性率与用流式细胞仪测定DNA单参数一样,作为白血病诊断、分析及预后判断的指标,而且更方便、价廉。

药物和缺血预处理对供肝细胞增殖周期的影响

目的了解供肝复流后细胞增殖周期的变化,明确药物预处理和缺血预处理对其的影响.方法建立大鼠三袖套法原位肝移植模型,观察移植肝细胞复流前后不同时间增殖细胞核抗原的表达情况;对供肝分别作药物预处理和缺血预处理,比较正常肝、预处理供肝和未预处理供肝复流2 h 后的增殖细胞核抗原、肝酶谱及肝细胞凋亡状况.结果移植肝细胞复流2 h 后增殖细胞核抗原表达显著增高,12 h 后恢复正常水平;正常肝、药物预处理供肝、缺血预处理供肝、未预处理供肝复流2 h 后的增殖细胞核抗原表达和肝酶谱依次升高,PCNA(%):2.1±0.1,4.3±0.2,7.0±0.4,9.4±0.4,AST(nKat·L^(-1)):3.5±1.6,28.1±11.9,53.8±12.3,75.2±24.1,ALT(nKat·L^(-1)):2.8±2.7,46.1±17.6,61.7±22.9,90.5±30.1,LDH(nKat·L^(-1)):49.6±7.6,61.4±15.3,95.4±23.2,148.3±30.1.结论供肝复流后肝细胞 G_1期缩短至2 h 以内,整个细胞周期时间缩短至20 h 左右.正常肝、药物预处理供肝、缺血预处理供肝、未预处理供肝肝损害程度依次加重,整个细胞周期时间依次缩短.

复明片对兔视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖的影响。方法用有色家兔96只设正常对照组(A组),制作视网膜脱离模型后分模型组(B组)、西药对照组(C组)、复明片组(D组)。并于造模后7、14、21 d分别取视网膜组织制备细胞悬液,流式细胞仪检测各兔增殖细胞核抗原(PCNA)在视网膜神经上皮层的表达。结果脱离后视网膜神经上皮层PCNA阳性细胞表达均呈上升趋势,7d后开始下降,且复明片组相较其余各组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论复明片通过恢复视网膜色素上皮与神经上皮之间的接触,阻止RPE的增殖即PCNA的表达。

激光流式细胞术定量分析增殖细胞核抗原表达的实验研究

为研究流式细胞术定量分析肿瘤细胞增殖细胞核抗原的表达，采用双参数流式细胞术检测方法和单克隆抗体免疫荧光染色技术定量分析增殖细胞核抗原表达。结果Ｅｃ８７１２、８１１３、７９０１三株细胞的ＰＣＮＡ平均表达量分别为３１．５６％，７８．１４％和７４．３５％，双参数检测结果表明，ＰＣＮＡ主要在Ｓ期和Ｇ２Ｍ期高表达。双参数流式劝胞术检测方法结合单克隆抗体免疫荧光染色技术能较准确地定量分析肿瘤基因蛋白的表达量。

大鼠非酒精性脂肪肝形成过程中肝细胞增殖的变化

目的 探讨大鼠非酒精性脂肪肝形成过程中肝细胞增殖的变化。方法 通过高脂饮食建立Wistar大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholicfattyliverdisease ,NAFLD)模型,同时设立正常饮食组作为对照,在实验第4、8、12周时分批收集肝脏标本。应用流式细胞术检测细胞周期,测定S期细胞比例(SPF)和增殖指数(PI) ,用免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达。结果 高脂4周组和高脂8周组与对照组各项指标均无差异。高脂12周时SPF和PI明显高于对照组(P <0 0 1) ,PCNA阳性率也明显升高(P <0 0 1)。结论 大鼠NAFLD形成过程中肝细胞增生,主要发生在非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis ,NASH)形成后,这可能是肝脏对NASH引起的炎症、坏死的代偿反应,但是否为肝癌发生的早期事件值得重视。

涂片免疫组化法及流式细胞术观察性激素对子宫内膜脱落细胞PCNA的影响

目的探索反映子宫内膜增殖状态的细胞学检测方法,评价其在激素替代治疗(HRT)时子宫内膜监测中的可行性。方法对象为正常月经周期妇女(增殖中晚期组10例,分泌中晚期组9例)、绝经期组妇女(13例)、绝经后短期序贯使用17-β雌二醇和安宫黄体酮妇女(HRT组10例)。内膜吸管获取宫腔收集液制成细胞悬液,经流式细胞术(FCM)测定增殖细胞核抗原(PCNA),以及制成涂片进行免疫组化染色测定PCNA。比较两种方法所反映的性激素对子宫内膜PCNA的影响与传统的内膜组织免疫组化法所反映的性激素对子宫内膜PCNA的影响是否一致。结果三种方法显示一致的变化趋势:月经周期增殖中晚期组PCNA指数高于月经周期分泌中晚期组及绝经期组(P<0.01);月经周期分泌中晚期组PCNA指数最低,与绝经期组接近(P>0.05);HRT组PCNA指数介于绝经期组和月经周期增殖中晚期组之间。结论经内膜吸管获取宫腔收集液,用涂片免疫组化法及FCM测定子宫内膜脱落细胞的PCNA,均可反映性激素对子宫内膜增殖状态的影响,在HRT时子宫内膜监测中是可行的。

PCNA含量及DNA含量联合检测在子宫内膜癌及癌前病变中诊断意义

目的 :说明PCNA含量及DNA含量联合检测在子宫内膜癌及癌前病变中的诊断意义 ;两种取材方法对结果的影响 ,以探讨临床工作采用新鲜标本作为早期诊断的辅助手段是可行的。方法 :采用流式细胞术联合检测 57例子宫内膜癌及各种增生的子宫内膜组织的PCNA及DNA含量。结果 :PCNA含量及DNA含量在正常子宫内膜、良性增生过长和不典型增生及内膜癌的差异有显著意义 (P <0 0 1) ,PCNA含量与DNA含量呈完全正相关 ,石蜡包埋标本及新鲜标本的两种取材方法PCNA含量、DNA含量比较无差异 (P >0 0 5)。结论 :PCNA含量及DNA含量、异倍体率随子宫内膜增生程度的加重呈递增趋势 ,其测定为内膜癌及癌前病变的早期诊断及鉴别诊断提供了一客观定量的指标。但两种检测值在各种病变之间均有部分病例有重叠交叉现象 ,联合检测可减少漏诊 ,并且采用新鲜标本作为早期诊断的辅助手段是可行的。

结肠癌nm23-H1和CD_(44)V_6及PCNA表达与DNA含量及转移潜能的相关性

目的 :探讨nm2 3 H1、CD44V6和PCNA和DNA含量在结肠癌生长、浸润、转移中的作用及其相互关系。方法 :采用免疫组化S P方法检测 15 2例结肠癌nm2 3 H1、CD44V6和PCNA。同时采用流式细胞光度术测定 6 0例结肠癌DNA含量。结果 :15 2例结肠癌nm2 3 H1阳性率与淋巴结转移 ,P <0 0 5、癌组织分化关系密切 ,P <0 0 1;CD44V6表达与Dukes分期 (P <0 0 5 )、肿瘤浸润深度 (P <0 0 5 )、癌组织分化 (P <0 0 5 )及淋巴结转移 (P <0 0 1)密切相关 ;PCNA表达与Dukes分期及肿瘤浸润深度有关 (P<0 0 5 ) ;nm2 3 H1和CD44V6表达 ,两者呈负相关 (P <0 0 1) ,CD44V6阳性nm2 3 H1阴性表达的患者淋巴结转移率高于CD44V6阴性nm2 3 H1阳性表达者 (P <0 0 5 )。伴淋巴结转移的结肠癌CD44V6和PC NA共同阳性表达率和异倍体癌的发生率高于无转移组 (P <0 0 5 )。异倍体癌CD44V6和PCNA过度表达 ,而nm2 3 H1低表达 (P <0 0 5 )。结论 :nm2 3 H1、CD44V6和PCNA及DNA含量在结肠癌中的表达与其发生发展、侵袭转移密切相关 ,尤其CD44V6和nm2 3 H1表达在结肠癌转移中起协调作用 。

儿童急性淋巴细胞白血病细胞诱导前后增殖性抗原的表达研究

用免疫荧光法结合流式细胞术对TPA和rIL-2体外诱导的儿童急性淋巴细胞白血病细胞进行诱导前后的CD25,CD34,CD71,Ki-67和PCNA等细胞增殖性抗原的表达检测,发现CD25和CD71的表达改变不明显,CD34,Ki-67和PCNA在诱导后的白血病细胞中,其表达率明显降低。我们认为TPA和rIL-2能诱导白血病细胞增殖活力的降低,对其增殖性抗原CD34,Ki-67和PCNA的检测是观察白血病细胞向成熟细胞分化的敏感性生物学指标。

热应激对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

目的探讨热应激对小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期情况的影响。方法 1月龄雄性小鼠随机分为6组(A^F),每组5只,A为对照组,B^F为实验组。对照组不进行热应激处理,实验组热应激(37℃)处理2h后恢复室温饲养,于恢复室温后0、2、6、10、20h依次取每组小鼠的胸腺。透射电子显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞术、苏木素-伊红(HE)染色分析热应激后不同时间点小鼠胸腺细胞的凋亡及细胞周期情况;免疫组织化学染色检测各时间点小鼠胸腺细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)的表达情况。结果热应激后2~10h电镜观察均可见典型的凋亡细胞形态;热应激后6h,胸腺细胞的凋亡率及S期细胞数量达到最高,而G0/G1、G2/M期细胞均降至最低,此时间点PCNA表达量较高。HSP70在热应激结束后0h即开始表达,2~6h表达量最高。结论热应激能够诱导小鼠胸腺细胞的凋亡,而HSP70则在凋亡过程中发挥保护作用。

人参皂苷Rg1抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞增殖

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的调控作用及其对活化的BV-2小胶质细胞增殖的调控作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞并分为空白对照组、LPS不同时间(1,3,6,8,12 h)处理组及Rg1不同浓度(10、20和50μmol/L)预处理组。采用Western blotting检测细胞增殖相关因子PCNA蛋白和cyclin D1蛋白的表达变化;RT-PCR检测细胞增殖相关因子PCNA和cyclin D1 mRNA的表达变化;免疫荧光染色法观察细胞内cyclin D1蛋白表达变化。采用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 LPS诱导BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1mRNA和蛋白表达上调,并呈时间依赖性;不同浓度Rg1预处理下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的mRNA和蛋白表达。结论Rg1通过下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的表达水平来调控细胞周期进而抑制活化的小胶质细胞的增殖。

RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原表达的影响。方法：应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞，用流式细胞仪分析ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣＤＮＡ百分含量及增殖细胞核抗原的变化。结果：与对照组相比，ＲＧ５０８６４处理组可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数（Ｐ＜０．００１），增加ＰＡＳＭＣ生长周期中的Ｇ０／Ｇ１期的ＤＮＡ百分含量，抑制Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．００１）。结论：ＲＧ５０８６４可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达，抑制ＰＡＳＭＣ周期Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量，阻止ＰＡＳＭＣ周期由Ｇ０／Ｇ１向ＤＮＡ合成的Ｓ期及Ｇ２Ｍ期转化。

大肠癌活化白细胞黏附分子的表达及其与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系

目的探讨活化白细胞黏附分子（ALCAM）在大肠癌中的表达及其与大肠癌血管生成、细胞增殖的关系。方法运用流式细胞术直接免疫荧光法检测66例原发性大肠癌肿瘤组织及相应癌旁大肠黏膜组织ALCAM的表达量。ALCAM蛋白表达量以阳性率和平均荧光强度（MFI）表示。运用免疫组织化学法检测肿瘤组织CD34、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况，根据CD34的染色情况计算大肠癌组织的微血管密度（MVD），根据PCNA染色情况计算肿瘤细胞PCNA标记指数。结果大肠癌肿瘤组织ALCAM阳性率48．20±20．68，明显高于癌旁黏膜组织10．58±2．03。肿瘤组织MFI10．05±4．47，明显高于癌旁黏膜4．56±2．10（t=9．832，P〈0．001）。ALCAM的表达增强与大肠癌的Dukes分期、pTNM分期、淋巴结转移呈正相关。随着ALCAM表达增强，细胞增殖指数也随之升高（P〈0．05）。大肠腺癌ALCAM蛋白MFI与MVD呈正相关（r=0．267，P〈0．05）。而ALCAM蛋白肿瘤细胞阳性表达率与MVD未见明显相关（r=0．234，P=0．059）。结论ALCAM在大肠腺癌中表达水平明显上调，并与肿瘤细胞增殖、血管生成密切相关，提示ALCAM可能在大肠癌发生发展中起重要作用。

雌激素与结肠癌细胞增殖调控相关性的研究

目的 探讨雌激素在结肠癌细胞增殖调控中的作用及临床意义。方法 应用流式细胞术(FCM)检测 30例结肠癌、10例正常结肠组织雌激素受体 (ER)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达量。同时 ,用免疫组化法检测ER和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达。结果 FCM定量检测表明 ,结肠癌组织ER表达量为 1.36± 0 .32 ,明显高于正常结肠组织 1.0 0± 0 .0 5 (P <0 .0 1) ;结肠癌组织CyclinD1表达量为 1.32± 0 .18,明显高于正常结肠组织 1.0 0± 0 .0 8(P <0 .0 1)。结肠癌组织ER表达量与CyclinD1表达量存在正相关关系 (r =0 .5 3 ,P <0 .0 1)。免疫组化染色表明 ,结肠癌组织ER表达阳性率为46 .7% (14/ 30例 ) ,明显高于正常结肠组织 (0 / 10例 ,P <0 .0 1) ;结肠癌组织PCNA蛋白表达阳性率为90 .0 % (2 7/ 30例 ) ,明显高于正常结肠组织 (0 / 10例 ,P <0 .0 1) ,且结肠癌组织ER表达等级与PCNA蛋白表达等级间存在正相关关系 (r=0 .43 ,P <0 .0 5 )。结论 雌激素在结肠癌发生、发展中有促进细胞增殖的作用 ,结肠癌很有可能是雌激素依赖性肿瘤。

CD24在肝癌中的表达及其与PCNA、CD34的关系

目的探讨CD24表达在肝细胞癌（hepataellular carcinoma，HCC）发生、发展中的作用及与细胞增殖、血管生成的关系。方法运用流式细胞术检测40例HCC、26例癌旁肝硬化、7例肝硬化、5例正常肝组织CD24表达量。运用免疫组织化学法检测该40例HCC增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）、CD34表达情况，根据CD34染色情况计算HCC微血管密度（microvessel density，MVD），根据PCNA染色情况计算PCNA指数。结果在HCC中，CD24阳性表达率及平均荧光强度均明显高于癌旁肝硬化、肝硬化和正常肝组织（P〈0．05）；CD24表达与HCC组织分化程度、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜及有否肝内转移有关，与HCC患者性别、肿瘤大小、癌肿数目无关；HCC中随着CD24表达水平增加，PCNA也随之升高，两者呈正相关；HCC中CD24表达与MVD未见明显相关。结论CD24过表达与HCC的发生、发展密切相关，并可促使肝癌细胞增殖，使肝癌细胞具有更强的侵袭力。