MoMLVgag-pol基因在NIH3T3细胞中的表达和鉴定

目的:构建含MoMLVgag-pol基因的重组表达载体,实现其在NIH3T3细胞中稳定表达。方法:应用RT-PCR方法反转录并扩增gag-pol基因,克隆入真核表达载体pcDNA4/HisMaxA上,构建重组表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol,用脂质体法转染NIH3T3细胞,Zeocin筛选稳定表达细胞株,通过SDS-PAGE分析检测表明,gag-pol基因在NIH3T3细胞实现了表达,产物相对分子质量(kDa)为194.78×103。然后,将逆转录病毒载体导入此细胞系,包装逆转录病毒。用PCR与标记基因补救分析法检测野生型辅助病毒。结果:酶切鉴定的片段大小分别为5.2kb,与预期大小一致,经Zeocin筛选后获得稳定表达细胞株,SDS-PAGE实验表明产物融合蛋白相对分子质量(kDa)为194.78×103,与预期相符。脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒。结论:构建的融合表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol及其在NIH3T3细胞中的表达,构建成功具有靶向性的逆转录病毒包装细胞系,该细胞系能够包装出高滴度的逆转录病毒,为肝细胞的基因治疗提供了一种新的基因转移系统。

白细胞介素24对急性白血病骨髓单个核细胞生长的影响

目的:探讨白细胞介素24(IL-24)对成人急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)体外生长的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:随机选择在石河子大学一附院住院的急性白血病患者15例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,其中确诊未治的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者5例,成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者10例。取患者骨髓,分离单个核细胞,以不同浓度IL-24作用于成人急性白血病BMMNC。应用四氮唑蓝(MTT)比色还原法,检测IL-24对急性白血病BMMNC体外生长的影响;采用AnnexinV-FITC染色流式细胞术,观察检测IL-24对急性白血病BMMNC增殖状况的影响;利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测IL-24对急性白血病BMMNC中caspase-3和bcl-2表达的影响。结果:MTT法发现IL-24对体外培养的白血病BMMNC有明显的生长抑制作用,且呈时间、剂量依赖性,与阴性对照组相比差异有显著性(P<0.05)。IL-24浓度50 ng/mL作用于急性白血病BMMNC 48 h后,Annexin V-PI检测结果显示凋亡率为(39.21±5.79)%,高于对照组(P<0.01)。RT-PCR检测显示,不同浓度IL-24处理白血病BMMNC,能够增加caspase-3 mRNA的表达,降低bcl-2 mRNA的表达。结论:IL-24对体外培养的成人急性白血病BMMNC,有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。IL-24可以上调caspase-3 mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,可能是IL-24抑制急性白血病BMMNC生长作用的重要机制。

MCL-1蛋白在B细胞非霍奇金淋巴瘤的表达及临床意义

目的:分析髓细胞白血病1(MCL-1)蛋白在B细胞非霍奇金淋瘤(B-NHL)的表达,探讨其与细胞凋亡和增殖的相互关系及其潜在的临床意义。方法:用免疫组织化学SP法检测43例不同类型的B-NHL的淋巴结组织以及结外肿瘤组织和10例反应增生淋巴结(RH)中的MCL-1蛋白表达。结果:43例不同类型的B-NHL的MCL-1蛋白的表达中,弥漫大B细胞淋巴瘤的阳性率最高为70.04%(19/27),侵袭性B-NHL表达的频率和强度明显高于惰性B-NHL70.00%vs30.76%,P<0.05,而10例RH的MCL-1蛋白无阳性表达。MCL-1蛋白的表达与B细胞NHL的亚型密切相关(P<0.001),与临床分期无明显相关,MCL-1蛋白的表达阳性组与细胞增殖指数(PI)呈正相关(P=0.002),与凋亡指数(AI)无相关。结论:MCL-1蛋白在侵袭性B-NHL易于表达,其表达与B-NHL亚型相关,并与淋巴瘤细胞的侵袭性和增殖状态有关,推测MCL-1蛋白在B-NHL发生发展中具有潜在作用。

血液系统恶性肿瘤血小板计数及血小板聚集功能的变化

血液系统恶性肿瘤血小板计数及血小板聚集功能的变化研究已为国内外学者所关注,Dameskek 1958报道ALL血小板减少与自身抗血小板抗体的形成有关。Rasenthal报道AML血小板减少的发生率高达95%,Ginsburg和Iuker等分别报道5例和4例CML病人,除1例外其余血小板聚集试验PAgT全部正常。他们认为:这一结果有助于CML与骨髓增生性疾病的PAgT表现异常加以鉴别,用于临床诊断。

高压氧对大脑中动脉阻塞模型大鼠脑组织中Mcl-1表达的影响及其脑组织损伤作用机制

目的:探讨高压氧(HBO)对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠脑组织抗凋亡蛋白髓细胞白血病因子1(Mcl-1)表达的影响,阐述高压氧对受损脑组织的损伤作用机制。方法:随机选取20只健康雄性Wistar大鼠,分为假手术(Sham)组6只、模型(MCAO)组和HBO组各7只。采用线栓法制作MCAO模型。Sham组仅进行血管分离,MCAO组缺血90min进行再灌注,HBO组在MCAO组的基础上,于再灌注3h时,给予3.0绝对大气压(ATA)高压纯氧治疗1h;所有大鼠于再灌注24h后处死。取脑组织冠状切片,用1%红四氮唑(TTC)染色检测并计算梗死面积;取大脑皮层梗死边缘区组织提取RNA和蛋白质,采用RT-PCR法检测Mcl-1mRNA表达水平,Western blotting法检测Mcl-1蛋白表达水平。结果:与MCAO组比较,HBO组大鼠脑梗死面积比明显增加(P<0.01)。与Sham组比较,MCAO组大鼠脑组织中Mcl-1mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与MCAO组比较,HBO组大鼠脑组织中Mcl-1mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。与Sham组比较,HBO组和MCAO组大鼠脑组织中的Mcl-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);HBO组与MCAO组Mcl-1蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与MCAO组比较,HBO组Bax/Mcl-1水平明显升高(P<0.01)。结论:高压氧可能通过促进Mcl-1的降解,引起Bax/Mcl-1平衡失调,导致神经细胞凋亡而加剧组织损伤。

3种急性非淋巴细胞白血病血细胞分析中血小板平均体积和血小板体积分布宽度变化的临床意义

目的探讨血小板平均体积(MPV)和血小板体积分布宽度(PDW)在(M2、M3、M5)3种急性非淋巴细胞白血病(ANLL)疾病诊疗中的临床意义。方法采用SysmexNE—1500全自动血细胞分析仪对(M2、M3、M5)3种ANLL患者的MPV和PDW进行测定。并以128名健康人的MPV和PDW的结果作对照。结果疾病组与健康对照组的MPV和PDW的结果差异有统计学意义,MPV(P<0.05)、PDW(P<0.01)。结论MPV和PDW在(M2、M3、M5)3种ANLL疾病的治疗过程监测和预后效果追踪都有着重要的临床意义。

siRNA抑制Mcl-1基因表达对胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响

目的探讨siRNA抑制Mcl-1基因表达后对胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法合成针对Mcl-1的靶向siRNA(Mcl-1 siRNA组),以空白细胞(空白对照组)和分别转染脂质体试剂(脂质体对照组)及阴性对照siRNA(阴性对照组)作为对照组。噻唑蓝(MTT)实验检测Mcl-1 siRNA对MGC-803细胞增殖能力的影响;流式细胞术观察各组细胞凋亡及周期变化情况;转染48 h后应用Transwell小室分析细胞侵袭、迁移能力的变化。结果 Mcl-1 siRNA组转染后24 h、48 h、72 h的A值低于3个对照组(P<0.05),其细胞增殖抑制率分别为8.9%、21.6%和18.8%。转染48 h后,Mcl-1 siRNA组细胞凋亡率高于空白对照组、脂质体对照组和阴性对照组(%:19.61±1.66 vs3.69±0.37 vs 3.54±0.47 vs 3.68±0.55,F=12.230,P<0.05)。Mcl-1 siRNA组G0/G1[(41.03±1.86)%]、G2/M期[(1.80±0.46)%]比例均低于3个对照组,S期比例[(57.17±1.72)%]高于3个对照组(均P<0.05)。Mcl-1 siRNA组侵袭、迁移实验中的穿膜细胞数(分别是42.00±4.00、76.33±3.51)均低于空白对照组(分别是79.33±3.51、108.00±3.61)、脂质体对照组(分别是74.67±2.52、110.67±4.04)和阴性对照组(分别是77.33±3.06、109.33±4.51)。以上指标在3个对照组间差异均无统计学意义。结论抑制Mcl-1表达可有效降低胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,并促进肿瘤细胞凋亡。

白介素24对单个核细胞bcl-2表达的影响

为探讨白细胞介素24(IL-24)对成人急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)体外生长的影响,并初步研究其作用机制。随机选取急性白血病住院患者15例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,其中确诊未治的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者5例,成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者10例。取患者骨髓,分离单个核细胞并培养,将不同浓度IL-24作用于BMMNC。应用四氮唑蓝(MTT)比色还原法、AnnexinV-FITC染色流式细胞术及逆转录-聚合酶联反应(RTPCR),分别检测IL-24对急性白血病BMMNC体外细胞增殖与凋亡及bcl-2表达的影响。结果显示,IL-24对体外培养的白血病BMMNC有明显的生长抑制作用,且呈时间、剂量依赖性,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。IL-24浓度50 ng/mL作用急性白血病BMMNC,48 h后凋亡率为39.21%±5.79%,高于对照组(P<0.01)。不同浓度IL-24处理白血病BMMNC,能够降低bcl-2 mRNA的表达。IL-24体外培养的成人急性白血病BMMNC,有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。由此可知,IL-24可以下调bcl-2 mRNA表达,可能是IL-24抑制急性白血病BMMNC生长作用的重要机制。

IL-6、IL-6R及MCL-1在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义

目的:分析白细胞介素-6(IL-6)及其受体(IL-6R)、髓样细胞白血病蛋白-1(MCL-1)在多发性骨髓瘤(MM)患者中表达水平的变化及其临床意义。方法:选取2014年1月-2019年1月期间唐山市工人医院和唐山市人民医院收治的多发性骨髓瘤患者98例,根据DS分期将患者分为3组:Ⅰ期27例,Ⅱ期34例,Ⅲ期37例。比较不同DS分期患者的IL-6、IL-6R及MCL-1的表达水平,并分析患者预后的相关因素。结果:3组患者IL-6及MCL-1表达水平随着DS分期升高而升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05),3组患者IL-6R表达水平无明显差异(P>0.05)。比较不同IL-6及MCL-1表达水平患者的预后,结果显示,IL-6≥80 pg/ml的患者(41例)的中位生存时间为33.0个月,<80 pg/ml的患者(57例)的中位生存时间为33.5个月,差异无统计学意义(P>0.05)。MCL-1≥200 pg/ml的患者(45例)的中位生存时间为30.5个月,<200 pg/ml患者(53例)的中位生存时间为37.0个月,差异具有统计学意义(P<0.05)。性别、年龄、β2-MG及Hb与患者预后无明显相关性(P>0.05),而DS分期、IL-6及MCL-1与预后相关(r=0.857,r=0.764,r=0.802)。结论:多发性骨髓瘤患者的IL-6及MCL-1水平与患者的DS分期及预后相关。

凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及意义

目的:探讨凋亡素诱导肝癌细胞HepG2凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及其意义。方法:经脂质体介导将pCDNA3.0-VP3转入HepG2细胞内,48h后采用Western blotting检测凋亡素、Mcl-1和细胞色素C,实时定量RT-PCR检测细胞内的Mcl-1mRNA。结果:VP3基因成功地转入HepG2细胞内并稳定表达凋亡素。与空白对照相比,表达凋亡素的细胞出现Mcl-1 mRNA含量减少(0.09%±0.00%vs0.41%±0.14%,P<0.05),细胞内Mcl-1水平下降(0.43%±0.01%vs0.90%±0.04%,P<0.01),线粒体释放细胞色素C增加(0.98%±0.02%vs0.62%±0.03%,P<0.01)。结论:凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中存在细胞内Mcl-1 mRNA和蛋白水平的下降,以及线粒体细胞色素C的释放增加。凋亡素诱导的细胞凋亡可能与其下调细胞内Mcl-1 mRNA与蛋白水平有关。

白血病抑制因子(LIF)对繁殖能力的影响

白血病抑制因子是一种具有多种生物活性的细胞因子 ,对胚胎干细胞的生长、增殖与分化有广泛的作用 ,与胚胎发育、卵泡的发育、胚泡着床和性激素的分泌相关 ,并与流产有关。这表明LIF对繁殖功能起着重要的作用。

miR-142-5p靶向MCL-1对胆管癌细胞上皮-间质转化及吉西他滨化疗敏感性的影响

目的探讨miR-142-5p靶向髓细胞白血病因子1(myeloid cell leukemin-1,MCL-1)对人胆管癌细胞QBC939上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及吉西他滨(Gemcitabine,GEM)化疗敏感性的影响。方法体外培养胆管癌细胞QBC939及人正常胆管上皮细胞HIBEC,随机分为对照组、miR-142-5p阴性对照(NC)组和miR-142-5p模拟物(mimics)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组QBC939细胞和HIBEC细胞中miR-142-5p和MCL-1 mRNA表达情况;划痕实验和Transwell实验分别检测各组QBC939细胞迁移和侵袭变化情况;蛋白印迹分析法检测各组QBC939细胞上皮型钙黏蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-142-5p与MCL-1的靶向关系;使用浓度为0.625μg/mL GEM处理转染miR-142-5p后的QBC939细胞,同时设置对照组,MTT检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。结果与人正常胆管细胞HIBEC相比,胆管癌细胞QBC939中miR-142-5p呈低表达,MCL-1 mRNA呈高表达。经Targetscan Human数据库预测显示,miR-142-5p与MCL-1 mRNA 3′UTR区有结合位点。与MCL-1-3′UTR-WT+miR-142-5p NC组比较,MCL-1-3′UTR-WT+miR-142-5p mimics组荧光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组和miR-142-5p NC组相比,miR-142-5p mimics组QBC939细胞miR-142-5p表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MCL-1 mRNA和蛋白表达、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞迁移、侵袭能力显著减弱(P<0.05);与miR-142-5p NC+GEM组相比,miR-142-5p mimics+GEM组QBC939细胞存活率显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。结论过表达miR-142-5p可通过靶向抑制MCL-1表达从而抑制人胆管癌细胞的EMT、增加胆管癌细胞对GEM的化疗敏感性。

MCL-1及其抑制剂在乳腺癌中的应用

髓样细胞白血病(MCL)-1蛋白是一种抗凋亡蛋白,已被证实在多种癌症如多发性骨髓瘤、肺癌、急性髓系白血病及乳腺癌中发挥重要作用。有研究表明,MCL-1在多种类型乳腺癌中高表达,是导致乳腺癌患者预后不良及对化疗药产生耐药的重要因素之一。同时,MCL-1也是三阴性乳腺癌的重要生存蛋白,因此MCL-1可作为抗乳腺癌药物的作用靶点。目前多个研究证实MCL-1抑制剂如S63845、EU-5346、JY-1-106及VU661013对多种类型的乳腺癌细胞有良好的抑制作用。

白血病患者脑脊液中可溶性白介素2受体、白介素6水平的测定及其临床意义

目的 探讨可溶性白介素 2受体 (sIL 2R)、白介素 6 (IL 6 )在急性淋巴细胞性白血病(ALL)的脑脊液 (CSF)中的表达及意义。方法 用双抗夹心ELISA法测定 30例ALL患者CSF中sIL 2R、IL 6水平 ,并与 10名正常者进行对照。结果 ALL合并中枢神经系统白血病 (CNS L)组较CNS L已缓解及未合并CNS L组二者水平显著升高 (P <0 .0 1) ;CNS L已缓解组二者水平接近对照组 (P >0 .0 5 ) ;骨髓缓解及好转组二者水平低于治疗无效组。结论 监测二者水平变化有助于CNS L早期诊断、评估疗效及预后。