鸡毒支原体licA基因的真核表达

鸡毒支原体licA基因编码脂寡糖/脂多糖(lipooligosaccharide/lipopolysaccharide,LOS/LPS)合酶或胆碱激酶,催化合成磷酸胆碱。该产物是支原体表面脂质的主要组成部分,与其致病性密切相关。鸡毒支原体的licA基因位于hmw3-licA-mgc2-gapA-crmA-crmB-crmC粘附素基因簇内部。为深入研究licA基因及其产物的生物学活性,本研究对鸡毒支原体licA基因进行了真核表达,通过间接免疫荧光试验检测,结果发现LicA主要定位于杆状病毒和DF1细胞浆中,并不对sf9和DF1真核细胞具有明显的毒性。这为下一步在体外建立LicA生物学活性检测的模型奠定了基础。

鸡毒支原体LicA的原核表达及膜定位鉴定

利用overlap-PCR技术扩增获得鸡毒霉形体licA基因,将该基因经酶切克隆入原核表达载体pET32a(+)中,利用IPTG诱导进行原核表达,SDS-PAGE电泳结果显示,LicA呈现包涵体表达,利用His-Band Resin对包涵体进行纯化。将纯化产物作为免疫原腹腔注射BALB/c小鼠,制备获得LicA多克隆抗体。通过对鸡毒霉形体不同强弱毒株膜蛋白提取物进行Western-blot检测,发现在所有参试毒株中,LicA表达量恒定,并呈现膜定位特性。这一研究结果为进一步研究LicA生物学活性奠定了基础。