山丹（lilium pumilum）的组织培养和再生鳞茎的形态解剖学研究

取山丹鳞片，在附加不同激素水平的ＭＳ或ＬＳ培养基上培养，筛选出最适合山丹快速繁殖的培养基（ＭＳ＋ＢＡ＿０．ｓ＋ＮＡＡ＿０．５）．本文观察了再生鳞茎的外部形态，用石蜡切片法研究了愈伤组织和再生鳞茎的解剖结构。结果表明：再生鳞茎在形成后３０ｄ内形态结构正常，但随着培养时间的延长，鳞片上部发育成脆弱的条形叶；叶内细胞一部分解体，在叶肉内形成通气组织。

细叶百合低温解除休眠过程中鳞茎细胞淀粉粒及花芽分化的变化

以细叶百合为试材，通过低温（5℃）解除鳞茎休眠，研究了休眠解除过程中鳞茎细胞的淀粉粒的变化及细叶百合花芽分化的变化过程。通过石蜡切片和实体显微结构观察，结果表明，低温冷藏期间，顶芽生长锥的高度和宽度逐渐增加，细叶百合花芽分化主要分为4个时期，O～48d为小花原基分化期，60d为外轮花被原基分化期，72d为内轮花被原基分化期，84d为雄蕊和雌蕊原基分化期；鳞片及顶芽细胞内淀粉粒数量随着冷藏时间的延长逐渐减少。冷藏O～24d内，鳞茎细胞没有进行有丝分裂，冷藏36d以后细胞分裂数量逐渐增加，冷藏84d分裂期细胞数量增加到2．6个。

细叶百合冷藏过程中鳞茎保护酶活性与休眠解除的关系

以细叶百合为试材,通过冷藏（5℃）解除鳞茎休眠,研究了细叶百合鳞茎解除休眠过程中鳞茎保护酶活性与糖代谢的变化规律.结果表明,鳞片、顶芽及鳞茎盘SOD 活性在冷藏0～24d内下降,除顶芽外,鳞茎各部位POD活性在0～24d内呈下降趋势,外鳞片、顶芽及鳞茎盘中CAT 活性在冷藏0～12d 内下降,冷藏中后期,SOD、CAT、ASP 活性升高,鳞片中POD 的活性下降,顶芽及鳞茎盘POD、PPO 在冷藏中期上升.各种代谢相关酶在不同器官中的作用并不完全相同.在低温处理36～60d内,ASP、CAT 活性快速上升,后期趋于稳定.SOD 活性最低点出现在冷藏36～60d,鳞茎各部位淀粉与CAT、PPO、ASP均表现为负相关性,SOD、POD、PAL 与鳞片中淀粉表现为正相关性.36d是鳞茎解除休眠的起点,60d时鳞茎基本解除休眠.

细叶百合鳞茎花芽分化过程观察

以细叶百合（Lilium pumilum）鳞茎为试材,利用石蜡切片和扫描电子显微技术,对细叶百合鳞茎花芽分化全过程进行形态学和组织细胞学观察,研究细叶百合鳞茎在自然越冬状态下花芽的发生、发育进程。结果表明,细叶百合鳞茎芽顶端生长点9月中旬开始由营养茎端向生殖茎端转变,11月中旬封冻前,芽顶端生长点最下面1～2个小花原基已完成花被原基的分化,翌年春季解冻后,继续进行花芽分化,至5月中旬前,整个花序分化完成。整个花序分化历时8个月左右,形成4～7个花蕾,并可将百合花芽分化划分为未分化期、分化初期、小花原基分化期、花被原基分化期、雄蕊和雌蕊原基分化期、整个花序形成期6个时期。

百合鳞茎休眠解除过程中差异蛋白表达分析

通过低温处理打破细叶百合(Lilium pumilum)鳞茎休眠,利用荧光差异凝胶电泳和质谱技术,借助生物信息学分析手段,分析百合鳞茎休眠解除过程中蛋白质组的变化,以期进一步理解百合鳞茎休眠机制奠定基础。结果表明,分离得到31个差异表达蛋白点;相对于休眠鳞茎,休眠解除鳞茎中上调表达的蛋白点有15个,下调表达的蛋白点有16个;应用MS质谱成功鉴定12个差异蛋白点,按功能划分为6类,主要为胁迫类蛋白,可能涉及鳞茎内物质的代谢过程,进而调控鳞茎的休眠解除;根据细叶百合鳞茎休眠解除过程中差异蛋白表达谱比较,获得了几种与鳞茎休眠相关的蛋白质,鳞茎休眠时胁迫类蛋白高表达,休眠解除时蛋白水解酶类高表达。

细叶百合鳞茎多酚类物质组成及其抗氧化活性

对野生细叶百合(Lilium pumilum DC.)鳞茎多酚类物质组成及其抗氧化能力进行研究,为野生百合资源的合理利用提供科学依据。以宁夏罗山野生细叶百合鳞茎为材料,比较经D-101大孔树脂纯化处理前后细叶百合总多酚含量的变化,使用高效液相色谱法检测分析细叶百合鳞茎内多酚类物质的组成与含量,采用清除DPPH、超氧根离子和羟基自由基3种方法对百合多酚提取物的总抗氧化活性进行评价。结果表明,经D-101大孔树脂纯化后其多酚含量有所降低,但回收率高达92.51%;经高效液相检测分析,11种单体酚化合物在细叶百合鳞茎中被检出,其中杨梅酮和表儿茶素的含量相对较高,分别达到了4.48 mg/100 g和2.91 mg/100 g;细叶百合多酚提取物对DPPH、超氧根离子和羟自由基均具有良好的清除能力,可作为天然抗氧化剂被开发利用。

烯效唑对盆栽山丹丹生长发育的影响

以陕北野生山丹丹为试材,采用不同浓度的烯效唑(S3307)浸泡种球并结合喷施处理,研究S3307对盆栽山丹丹营养生长和生殖生长的影响。结果表明,S3307使山丹丹株型明显矮化、直径增粗、叶长缩短、叶片加宽、叶色加深,提高了观赏价值;不同浓度S3307处理使山丹丹出芽、现蕾、透红、盛花时间提前;随着处理浓度的增加,不同程度地缩短了山丹丹的花期。综合研究认为,S3307 20 mg·L-1处理效果最佳。

AB-8大孔树脂纯化山丹鳞茎总黄酮的研究

为研究AB-8大孔树脂对山丹鳞茎中总黄酮的纯化作用,采用静态和动态的吸附-洗脱试验,利用紫外可见分光光度计测量山丹鳞茎总黄酮的含量,研究不同的工艺条件对总黄酮纯化的影响。结果表明:原液浓度为3.165mg/m L,p H值为4,1.0m L/min的流速吸附,用70%的乙醇进行洗脱,可获得总黄酮纯度为35.13%。AB-8大孔树脂可较好的纯化山丹鳞茎中的总黄酮。

3种因素对山丹埋片繁殖的影响

[目的]对山丹埋片繁殖进行研究。[方法]以陕北山丹的鳞片为材料,研究了植物激素、消毒试剂和鳞片切割方式共3种因素分别对其埋片繁殖的影响。[结果]150 mg/L的吲哚丁酸(IBA)处理能显著提高鳞茎增殖率;0.1%HgCl2处理可有效防止鳞片腐烂率,但会降低鳞茎增殖率;与完整鳞片相比,切割鳞茎的腐烂率显著升高。[结论]该研究为山丹种球的商品化大规模繁育提供了理论依据。

细叶百合鳞茎冷藏过程中核酸及蛋白质的变化

以细叶百合为试材,通过冷藏（5℃）解除鳞茎休眠,研究了细叶百合鳞茎解除休眠过程中核酸及可溶性蛋白质的变化规律。结果表明,冷藏过程中顶芽与鳞茎盘中核酸含量发生了明显的变化,顶芽中DNA、RNA含量及RNA/DNA比值在鳞茎冷藏36 d时变化最为明显,贮藏36 d是内外鳞片DNA及核酸总含量的转折点;顶芽和鳞茎盘冷藏0-36 d内可溶性蛋白质的含量升高,鳞茎不同部位可溶性蛋白质含量在冷藏48 d后迅速降低也是鳞茎开始解除休眠的重要体现。

山丹百合鳞茎提取液中活性物质及其对樱桃番茄的保鲜效果

以山丹百合鳞茎和樱桃番茄‘碧姣’果实为材料,分析不同浓度(0~1.0 g/L,以不做任何处理为对照CK)百合鳞茎提取液在低温(5℃)和常温(20℃)贮藏期间对樱桃番茄果实感观品质、营养品质和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,并采用比色法、比浊法等方法测定提取液中活性成分含量及其抗氧化能力、抑菌活性,探究山丹百合鳞茎浸提液对采后樱桃番茄果实的保鲜效果及其机理。结果表明:(1)用0~1.0 g/L百合鳞茎提取液处理樱桃番茄果实,在常温和低温下果实分别可贮藏21 d和35 d,贮藏期分别比CK延长了3~6 d和7~14 d。(2)低温下适宜浓度(0.4~0.8 g/L)和常温下各浓度百合鳞茎提取液均能有效抑制番茄果实硬度下降,延缓质量损失率和色度的升高,而在常温和低温下均以0.8 g/L处理效果最佳;在贮藏结束时,常温(低温)贮藏的质量损失率和色度分别比CK显著降低了70.27%(58.82%)和93.44%(89.33%),硬度显著提高了81.11%(69.78%)。(3)低温下适宜浓度和常温下各浓度百合鳞茎提取液均能显著延缓番茄果实维生素C(Vc)和总酸(TA)的消耗,以及可溶性固形物(TSS)含量的升高,而在常温和低温下仍以0.8 g/L处理效果最佳;在贮藏结束时,常温(低温)贮藏果实TA和Vc含量分别比CK显著提高了65.59%(65.06%)和70.87%(53.44%),而TSS含量显著降低了93.49%(84.62%)。(4)低温下适宜浓度和常温下各浓度的百合鳞茎提取液能有效延缓番茄果实SOD活性的下降,而在常温和低温下均以0.8 g/L处理效果最佳,贮藏结束时,常温和低温下果实SOD活性分别比CK显著提高了66.42%和70.80%。(5)0.8 g/L百合鳞茎提取液中富含多糖、黄酮、黄烷醇、皂甙、总酚和生物碱等活性成分(0.34~2.41 mg/g),对DPPH自由基清除力和铜离子还原能力分别达到7.10和1.06μmol/g,并对番茄青霉菌生长具有明显的抑制作用,青霉菌数量较对照组显著下降了74.44%~79.76%。研究发现,百合鳞茎提取液中富含多糖、皂甙和多酚等活性成分,具有良好的抗氧化能力和抑菌活性;适宜浓度的百合鳞茎提取液能有效降低番茄果实质量损失率,保持番茄硬度和色度,维持维生素C、总酸和可溶性固形物等营养成分,并保持较高的SOD活性,明显延长贮藏时间,表现出良好的保鲜效果,并以0.8 g/L浓度的百合鳞茎提取液的保鲜效果最佳。

细叶百合的无性繁殖

以细叶百合 (LiliumpumilumDC .)的鳞片为材料 ,通过扦插繁殖方法 ,观察不同基质、鳞茎的不同生长年龄、鳞茎的外、中、内层及同一鳞片的上、中、下段对鳞片繁殖小鳞茎的影响。结果表明 :在扦插基质的选择实验中 ,用 3年生细叶百合做扦插材料 ,2 5℃ ,避光条件下 ,以草炭 +珍珠岩 (1:1)的混合物为基质时 ,鳞片产生的小鳞茎数最多 ,15 0片鳞片可产生 172个小鳞茎 ;从年龄效应和位置效应的实验观察 ,4年生细叶百合鳞片生成小鳞茎最多 ,小鳞茎的平均直径也较大 ;鳞茎的外、中层鳞片的下部在适宜的条件下比鳞片的中。

细叶百合中内源激素的变化

应用ELISA测定了细叶百合鳞茎中的吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)、脱落酸(ABA)的含量。结果表明,不同年龄、不同部位鳞片中三种激素含量均有较大差异:随着年龄的增加,IAA的含量呈上升趋势,ABA含量呈下降趋势;外层鳞片和鳞片下层IAA含量最高,ABA含量最少,且具有较高的IAA/ABA和GA/ABA值。

青海细叶百合鳞片诱导培养基筛选

选择青海省贵德县驯化3年以上的细叶百合鳞片做外植体,以MS作为基本培养基,采用2因素NAA(0、0.3、0.6、1.0 mg/L)、6-BA(0、0.5、1.0、1.5 mg/L)4水平随机区组设计,进行细叶百合鳞片不同激素浓度诱导分化培养基筛选试验。结果表明:MS+NAA0.3 mg/L+6-BA0.5 mg/L为细叶百合愈伤组织分化的最佳培养基;MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L可为细叶百合生根的适宜培养基。

抗氧化酶对百合鳞茎破眠的影响研究

该文主要研究了休眠的细叶百合鳞茎在低温5℃贮藏过程中,抗氧化酶及呼吸代谢与鳞茎休眠进程的关系。结果表明,鳞茎呼吸速率在冷藏2周后显著下降,2~12周随着贮藏时间的延长呼吸速率逐渐上升。SOD活性在冷藏2~6周呈下降趋势,6~12周后逐渐增加。CAT活性4周最高,POD活性在贮藏过程中逐渐降低。鳞茎ASP活性则表现为先升高后降低的趋势,PPO活性在贮藏初期平缓下降。4周后逐渐上升,整个冷藏期PAL活性平稳波动。鳞茎贮藏过程中呼吸速率与SOD、POD、PAL呈正相关性,呼吸速率与CAT、ASP、PPO均表现为负相关性。

RNA-seq揭示碱性盐(NaHCO3)对细叶百合鳞茎基因表达的影响

本研究旨在揭示细叶百合在盐碱逆境中的基因表达表达情况,为合理利用盐碱地和大面积种植百合提供理论基础。以一年生的细叶百合鳞茎为材料,经过20 mmol/L NaHCO3处理24 h后,用Illumina HiSeqTM2000测序平台进行转录组测序。共测得56828个mRNA的注释信息,其中,55433个Unigene被注释到Nr数据库,26973条Unigene被注释到KOG数据库,23610条Unigene被注释到GO数据库,13142条Unigene被注释到KEGG数据库的五大类中。共鉴定出390个差异表达基因。选取了9个与盐碱胁迫密切相关的基因进行qPCR验证,9个基因的表达结果与转录组的结果基本趋于一致。通过细叶百合在碳酸盐(NaHCO3)逆境下的转录组对比数据,提供了许多的基因表达通路和表达量的差异,为合理利用盐碱地和大面积种植百合提供理论基础。

山丹鳞茎总黄酮体外抗氧化及抑菌性的研究

本试验对山丹鳞茎中总黄酮的抗氧化性和抑菌性进行研究。试验利用三种体外抗氧化体系即超氧阴离子清除能力(O_2^-)、羟基自由基(OH)清除能力和二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)清除能力对山丹鳞茎总黄酮的体外抗氧化活性进行了综合评价,采用打孔法测定其抑菌活性。试验显示山丹鳞茎总黄酮对O_2^-的清除率为63.27%,对OH的清除率为70.36%,对DPPH的清除率为52.83%,在试验浓度范围内优于BHT的清除能力,并对9种菌均有不同程度的抑制作用,说明山丹鳞茎总黄酮适宜作为一种天然的抗氧化剂和抑菌剂而广泛利用。

细叶百合休眠与解除SSH文库构建及其调控基因的初步筛选

为了验证百合鳞茎休眠解除过程中基因表达的差异性,以细叶百合休眠鳞茎和休眠解除鳞茎为材料,利用抑制消减杂交技术构建了百合鳞茎休眠及解除正、反向抑制消减文库。文库富集了差异基因,消减效率符合要求,插入片段集中于250~1 000 bp之间。对正、反向文库随机挑选阳性克隆测序,各获得100个表达序列标签(EST),在NCBI上进行BLASTx分析,并用KOBAS系统将获得的unigene定位到Pathways中。分析结果表明,休眠文库ESTs功能主要涉及胁迫响应方面,如苯丙氨酸代谢途径、促分裂素原活化蛋白激酶途径等与休眠有关。休眠解除文库在糖代谢、激素响应及信号转导方面表达量较高,如亚油酸代谢途径、淀粉及蔗糖代谢途径等参与了休眠解除过程。

山丹鳞茎总皂苷体外抗氧化与抑菌活性的研究

本实验对山丹鳞茎中总皂苷的抗氧化性和抑菌活性进行研究。实验利用三种体外抗氧化体系即羟基自由基(OH)清除能力、超氧阴离子清除能力(O2-)和二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)清除能力对山丹鳞茎总皂苷的体外抗氧化活性进行了综合评价,采用滤纸片法测定其抑菌活性。实验表明:在实验浓度范围内,其对OH的清除率为59.68%,O2-的清除率为40.58%,对DPPH的清除率为76.06%,并对10种菌均有不同程度的抑制作用,说明山丹鳞茎总皂苷适宜作为一种天然的抗氧化剂和抑菌剂而广泛利用。