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稳定表达Caveolin-3基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株的构建
被引量:
1
1
作者
邓玉风
黄亿元
+2 位作者
尚丽娜
杨立会
黄勤
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第31期12-15,共4页
目的构建稳定表达Caveolin-3(CAV3)基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株。方法将野生型CAV3(CAV3-WT)、CAV3-P104L、CAV3-P47L装在带有GFP标签的质粒中,构建目的基因与GFP基因融合的表达质粒,以只含GFP的载体为对照。将C2C12细胞...
目的构建稳定表达Caveolin-3(CAV3)基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株。方法将野生型CAV3(CAV3-WT)、CAV3-P104L、CAV3-P47L装在带有GFP标签的质粒中,构建目的基因与GFP基因融合的表达质粒,以只含GFP的载体为对照。将C2C12细胞随机分为A、B、C、D组,分别转染对照空载体(NC)、CAV3-WT、CAV3-P47L及CAV3-P104L。以遗传霉素(G418)进行阳性克隆筛选,荧光显微镜下挑选稳定转染的细胞系,Western blotting法检测各组细胞中的CAV3-GFP融合蛋白,免疫荧光法检测各组细胞中的CAV3蛋白,以荧光强度代表目的蛋白相对表达量。结果经酶切和测序验证,证实4种表达质粒构建成功。B、C、D组细胞中测得CAV3-GFP融合蛋白,A组未测得融合蛋白。A、B、C、D组CAV3蛋白相对表达量分别为23.0±2.25、32.3±0.35、25.6±0.92、24.3±1.42,B组CAV3蛋白表达增强,与A组相比,P<0.01;A、C、D组CAV3蛋白表达下调,与B组相比,P均<0.01。结论成功构建了稳定表达CAV3-P47L和CAV3-P104L的C2C12细胞,两种细胞中CAV3蛋白表达下调。
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关键词
Caveolin-3
基因突变
2
型糖尿病
肢带型肌营养不良
下载PDF
职称材料
Miyoshi肌病致病基因的突变分析
2
作者
张炳峰
孙顺昌
樊绮诗
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期15-16,共2页
目的寻找Miyoshi肌病家系的DYSF基因的分子缺陷。方法用RT-PCR技术和序列分析筛查家系成员的DYSF基因的编码序列,确定患者的基因突变。结果患者DYSF基因的53号外显子存在6429del G突变。结论6429del G突变为一移码突变,它使dysferlin蛋...
目的寻找Miyoshi肌病家系的DYSF基因的分子缺陷。方法用RT-PCR技术和序列分析筛查家系成员的DYSF基因的编码序列,确定患者的基因突变。结果患者DYSF基因的53号外显子存在6429del G突变。结论6429del G突变为一移码突变,它使dysferlin蛋白的合成在2035密码子处提前终止,使其稳定性降低进而导致疾病的发生。
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关键词
DYSF基因
突变
MIYOSHI肌病
肢带
2
B型肌营养不良
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职称材料
题名
稳定表达Caveolin-3基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株的构建
被引量:
1
1
作者
邓玉风
黄亿元
尚丽娜
杨立会
黄勤
机构
右江民族医学院
广西医科大学
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2016年第31期12-15,共4页
文摘
目的构建稳定表达Caveolin-3(CAV3)基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株。方法将野生型CAV3(CAV3-WT)、CAV3-P104L、CAV3-P47L装在带有GFP标签的质粒中,构建目的基因与GFP基因融合的表达质粒,以只含GFP的载体为对照。将C2C12细胞随机分为A、B、C、D组,分别转染对照空载体(NC)、CAV3-WT、CAV3-P47L及CAV3-P104L。以遗传霉素(G418)进行阳性克隆筛选,荧光显微镜下挑选稳定转染的细胞系,Western blotting法检测各组细胞中的CAV3-GFP融合蛋白,免疫荧光法检测各组细胞中的CAV3蛋白,以荧光强度代表目的蛋白相对表达量。结果经酶切和测序验证,证实4种表达质粒构建成功。B、C、D组细胞中测得CAV3-GFP融合蛋白,A组未测得融合蛋白。A、B、C、D组CAV3蛋白相对表达量分别为23.0±2.25、32.3±0.35、25.6±0.92、24.3±1.42,B组CAV3蛋白表达增强,与A组相比,P<0.01;A、C、D组CAV3蛋白表达下调,与B组相比,P均<0.01。结论成功构建了稳定表达CAV3-P47L和CAV3-P104L的C2C12细胞,两种细胞中CAV3蛋白表达下调。
关键词
Caveolin-3
基因突变
2
型糖尿病
肢带型肌营养不良
Keywords
Caveolin-3
gene mutation
type
2
diabetes mellitus
limb girdle
muscular
dystrophy
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
Miyoshi肌病致病基因的突变分析
2
作者
张炳峰
孙顺昌
樊绮诗
机构
南京医科大学第一附属医院临床检验中心
上海第二医科大学附属瑞金医院临床实验诊断中心
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期15-16,共2页
文摘
目的寻找Miyoshi肌病家系的DYSF基因的分子缺陷。方法用RT-PCR技术和序列分析筛查家系成员的DYSF基因的编码序列,确定患者的基因突变。结果患者DYSF基因的53号外显子存在6429del G突变。结论6429del G突变为一移码突变,它使dysferlin蛋白的合成在2035密码子处提前终止,使其稳定性降低进而导致疾病的发生。
关键词
DYSF基因
突变
MIYOSHI肌病
肢带
2
B型肌营养不良
Keywords
DYSF gene
mutation
Miyoshi myopathy
limb-girdle
muscular
dystrophy
type
2 B
分类号
R596.1 [医药卫生—内科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
稳定表达Caveolin-3基因突变型P104L和P47L的C2C12骨骼肌细胞株的构建
邓玉风
黄亿元
尚丽娜
杨立会
黄勤
《山东医药》
CAS
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
Miyoshi肌病致病基因的突变分析
张炳峰
孙顺昌
樊绮诗
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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