LINC00472、LINC00969表达与非小细胞肺癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探究LINC00472、LINC00969表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年9月至2020年9月在河南大学第一附属医院接受治疗的120例NSCLC患者为研究对象,收集患者手术切除的癌组织及癌旁组织,根据患者预后情况分为生存组(n=73)和死亡组(n=47)。采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测纳入患者LINC00472、LINC00969水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LINC00472、LINC00969水平对NSCLC患者预后的预测价值;采用Kaplan-Meier法分析NSCLC患者LINC00472、LINC00969水平与预后的关系;采用COX回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织相比,NSCLC患者癌组织中LINC00472水平降低,LINC00969水平升高(P<0.05)。与生存组相比,死亡组患者中LINC00472表达水平降低,LINC00969表达水平升高(P<0.05)。不同TNM分期、淋巴结转移、分化程度的NSCLC患者LINC00472、LINC00969表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00472低表达、LINC00969高表达的NSCLC患者3年生存率低于LINC00472高表达、LINC00969低表达的患者(χ2=6.728、10.996,P=0.009、0.001)。LINC00472、LINC00969、TNM分期、分化程度、淋巴结转移是NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。LINC00472、LINC00969二者联合检测NSCLC患者预后的曲线下面积(AUC)最高,优于二者单独预测(P<0.05)。结论LINC00472、LINC 00969与NSCLC患者临床病理特征有关,且二者联合检测对患者预后的预测效能较高。

大黄灵仙方调控外泌体LINC00311抑制胆道系统结石形成的影响

目的探讨大黄灵仙方调控外泌体LINC00311抑制结石形成,防治胆石病的机制。方法70只SD雄性小鼠随机分为:空白对照组、模型组、熊去氧胆酸组、大黄灵仙组、模型+基因阻滞组(模型KO组)、熊去氧胆酸+基因阻滞组(熊去氧胆酸KO组)、大黄灵仙+基因阻滞组(大黄灵仙KO组),每组10只。采用高胆固醇、高热量致石饲料诱发的方式建立胆石病小鼠模型,再按体内转染实验法建立LINC00311基因敲除小鼠模型。连续干预6周后,记录各组小鼠成石率,电镜观察胆管组织内细胞超微结构的变化,RT-PCR检测LINC00311及TGF-β1/Smads信号通路中关键因子的表达,核磁共振氢谱技术检测胆汁内代谢产物表达情况。结果大黄灵仙组的成石率为0%,低于模型组、模型KO组、大黄灵仙KO组(P<0.002)。电镜检测显示大黄灵仙组细胞器形态结构完整,优于模型组、模型KO组、大黄灵仙KO组。RT-PCR显示与模型组、模型KO组、大黄灵仙KO组相比,大黄灵仙组的LINC00311、Smad4、Smad7升高(P<0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3降低(P<0.05)。核磁共振氢谱检测显示与模型组相比,大黄灵仙组胆汁中有9种代谢产物具有明显的差异性。结论大黄灵仙方能促进外泌体LINC00311在胆道系统内的聚集,改善细胞结构,调节炎症反应和纤维化,稳定胆汁代谢,具有防治胆石病的作用。

结直肠癌组织LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达及与预后的关系

目的分析结直肠癌组织长链非编码RNA(LncRNA)LINC00342、微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)表达水平与患者术后5年内预后的关系。方法采集133例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达;术后随访5年记录患者生存和死亡情况。比较不同情况下LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达及临床病理参数。分析结直肠癌组织中LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达的相关性、与预后的关系及对预后的预测价值。结果结直肠癌组织中LncRNA LINC00342表达水平高于癌旁组织,miR-203a-3p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中LncRNA LINC00342与miR-203a-3p表达水平呈负相关(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例分别高于LncRNA LINC00342低表达组和miR-203a-3p高表达组(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组术后5年总生存率更低(P<0.05)。死亡组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例、LncRNA LINC00342表达水平高于存活组,miR-203a-3p表达水平低于存活组(P<0.05)。肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移、LncRNA LINC00342高表达、miR-203a-3p低表达是影响患者术后5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。LncRNA LINC00342和miR-203a-3p联合对预后的预测价值高于单独预测。结论结直肠癌组织中LncRNA LINC00342呈高表达,miR-203a-3p呈低表达,二者联合检测有望成为预测术后生存的临床评估指标。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

TNFAIP3和LINC00887在透明细胞肾细胞癌中的表达及临床预后意义

目的检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)和LINC00887在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)组织中的表达水平,并研究其表达水平与临床病理参数和预后的关系。方法选取2013年1月至2018年10月该院收治的101例ccRCC患者,检测TNFAIP3和LINC00887分别在ccRCC癌组织和配对的癌旁组织中的表达水平,分析TNFAIP3、LINC00887表达水平与ccRCC患者临床病理参数和预后关系,并分析ccRCC患者预后不良的影响因素。采用Spearman相关系数分析TNFAIP3、LINC00887表达水平的相关性。结果TNFAIP3在ccRCC中的阳性率(37.62%)显著低于癌旁组织(52.48%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.500,P=0.034)。LINC00887在ccRCC中表达水平(1.38±0.61)显著高于在癌旁组织中的表达水平(1.03±0.43),差异有统计学意义(t=5.396,P<0.001)。TNFAIP3蛋白阳性率在肿瘤最大径≥4.5 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者中低于在肿瘤最大径<4.5 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00887在肿瘤最大径≥4.5 cm、病理分级Ⅲ~Ⅳ级、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者中表达高于肿瘤最大径<4.5 cm、病理分级Ⅰ~Ⅱ级、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNFAIP3高表达组相比,TNFAIP3低表达组ccRCC患者预后较差,差异有统计学意义(χ^(2)=5.118,P=0.024);与LINC00887低表达组相比,LINC00887高表达组ccRCC患者预后较差,差异有统计学意义(χ^(2)=4.638,P=0.031)。TNFAIP3低表达,LINC00887高表达,病理分级Ⅲ~Ⅳ级和TNM分期Ⅲ~Ⅳ期是ccRCC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果,TNFAIP3、LINC00887表达水平在ccRCC中呈负相关(r=-0.638,P=0.012)。结论ccRCC癌组织中TNFAIP3表达水平下调、LINC00887表达水平上调,且呈负相关性,二者可能共同调控ccRCC发生发展,具有成为评估ccRCC患者预后肿瘤标志物的潜力。

小白菊内酯通过LINC00299/miR-590-3p对阿尔茨海默病模型细胞损伤的影响

目的探讨小白菊内酯调控LINC00299/微小RNA(miR)-590-3p途径对阿尔茨海默病(AD)模型细胞损伤的影响。方法用Aβ_(1~42)处理SK-N-SH细胞复制AD细胞模型。CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00299和miR-590-3p表达。采用上述方法观察抑制LINC00299对AD模型细胞损伤的影响。双荧光素酶报告实验验证LINC00299和miR-590-3p靶向关系。结果Aβ_(1~42)处理后,SK-N-SH细胞活力、miR-590-3p表达量、SOD活性明显降低,凋亡率、LINC00299表达量、MDA含量、LDH释放量明显升高(P<0.05)。小白菊内酯处理后,Aβ_(1~42)诱导的SK-N-SH细胞活力、miR-590-3p表达量、SOD活性明显升高,凋亡率、LINC00299表达量、MDA含量、LDH释放量明显降低(P<0.05)。LINC00299过表达逆转了小白菊内酯对Aβ_(1~42)诱导的SK-N-SH细胞凋亡和氧化损伤的影响。miR-590-3p与LINC00299序列直接结合。结论小白菊内酯可能通过调控LINC00299/miR-590-3p通路进而保护AD模型细胞损伤。

LINC00310在胰腺癌中的高表达及其靶向功能预测

目的:探讨长链间非编码RNA 310(LINC00310)在胰腺癌中的差异表达与其靶向功能的预测。方法:分析727例胰腺导管腺癌及548例周围正常胰腺组织对照样本中的LINC00310表达量。将LINC00310靶向的微小RNA(miRNA)与信使RNA(mRNA)分别与胰腺癌差异表达的miRNA与mRNA取交集后,使用Cytoscape v3.9.0构建长链非编码RNA(lncRNA)-miRNA-mRNA调控网络。利用“clusterProfiler”对LINC00310-miRNA-mRNA调控网络的基因功能进行注释分析。结果:LINC00310表达水平在胰腺癌中呈高表达,其标准平均差(SMD)值为0.17[0.06,0.29]。作为LINC00310预测调控的miRNA,miR-346,miR-596,miR-103a-2-5p,miR-661,miR-384及miR-15a-5p呈高表达,miR-4284及miR-1182呈低表达。根据miRNA预调控差异表达mRNA有46个(下调15个及上调31个)。LINC00310竞争性内源性RNA(ceRNA)可能参与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路。结论:LINC00310作为临床胰腺癌诊断潜在分子标志物,可以为胰腺癌靶向治疗提供新的方案及思路。

长链非编码RNALINC00184调控老年高血压血管内皮细胞的增殖与迁移

目的高血压是老年人动脉粥样硬化发生和发展的重要致病因素。血管内皮细胞的损伤和衰老加速动脉粥样硬化的发生和发展。作为基因转录和翻译的重要调控元件,长链非编码RNA(lncRNA)已经被证实在多种生物学过程中发挥重要作用,但其在高血压引起动脉粥样硬化以及血管内皮损伤中的作用和分子机制远未了解清楚。方法回顾性收集上海交通大学医学院附属仁济医院2019年5月—2020年12月老年医学科门诊具备完整病史资料的老年患者(≥60岁)共51例,根据血压及颈动脉内膜中层厚度(CIMT)分为3组:高血压伴动脉粥样硬化组、高血压不伴动脉粥样硬化组和无高血压的动脉粥样硬化组。通过荧光定量PCR检测高血压以及高血压伴动脉粥样硬化患者血液中的lncRNA的表达。在人血管内皮细胞中,通过转染siRNA的方式敲减LINC00184,通过免疫荧光等形态学方法检测内皮细胞的增殖与迁移是否受到影响。利用荧光素酶报告基因、免疫印迹等方法,明确LINC00184参与调控血管内皮细胞的作用机制。结果3组间的CIMT、收缩压和舒张压有显著差异(P<0.05);LINC00184在老年高血压患者的血浆中高表达;LINC00184在人血管内皮细胞中高表达,且主要分布于细胞质中;敲减LINC00184导致血管内皮细胞增殖和迁移能力增强;LINC00184通过影响miR-17调控PTEN的表达参与血管内皮细胞的功能。结论老年高血压相关LINC00184参与调控血管内皮细胞的增殖和迁移,为进一步探究高血压导致的靶器官损伤的分子机制提供理论依据。

鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261的表达及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP69细胞,分为空白对照组、shRNA-NC组(转染SNHG15对照)、SNHG15-shRNA组(转染SNHG15)、pcDNA-NC组(转染LINC00261对照)、LINC00261-pcDNA组(转染LINC00261);采用RT-qPCR检测SNHG15和LINC00261表达水平;采用CCK-8和克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;采用Pearson法分析组织中SNHG15和LINC00261表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261表达水平与患者预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响鼻咽癌患者预后的相关因素。结果:鼻咽癌组织中SNHG15表达水平高于癌旁组织,LINC00261表达水平则低于癌旁组织;鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达水平呈负相关。CNE-1细胞中SNHG15表达水平高于NP69细胞,LINC00261表达水平则低于NP69细胞;SNHG15-shRNA组和LINC00261-pcDNA组CNE-1细胞克隆形成数量均低于空白对照组、shRNA-NC组及pcDNA-NC组,细胞增殖能力降低。不同SNHG15和LINC00261表达水平的鼻咽癌患者年龄、肿瘤直径及组织学类型差异无统计学意义,而SNHG15高表达组及LINC00261低表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的患者所占比例显著高于SNHG15低表达组及LINC00261高表达组;SNHG15低表达患者3年生存率(84.78%)显著高于SNHG15高表达患者(65.95%),LINC00261低表达患者3年生存率(63.04%)显著低于LINC00261高表达患者(87.23%)。结论:鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达与患者临床病理特征及预后密切相关,淋巴结转移、TNM分期及SNHG15是鼻咽癌患者死亡的危险因素,而LINC00261是鼻咽癌患者死亡的保护因素。

LINC01535在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:检测LINC01535基因在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)组织及细胞株中的表达情况及其与患者临床病理和预后的关系,探讨LINC01535对上皮性卵巢癌细胞CAOV3增殖、侵袭及EMT的影响。方法:基于GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析LINC01535在上皮性卵巢癌组织表达情况及对卵巢癌患者生存期的影响,应用实时荧光定量qRT-PCR(qRT-PCR)的方法检测上皮性卵巢癌组织和正常组织以及三种上皮性卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780、和CAOV3)中LINC01535基因的表达水平,分析LINC01535基因表达与临床病理参数及预后的关系;应用siRNA瞬时转染上皮性卵巢癌细胞CAOV3干扰LINC01535基因的表达后,MTS和Transwell小室迁移和侵袭实验检测LINC01535基因异常表达对上皮性卵巢癌细胞CAOV3增殖、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR法和Western blot法检测LINC01535对于EMT过程相关标志物(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)表达水平的影响。结果:应用GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库发现LINC01535在上皮性卵巢癌肿瘤组织中的表达显著高于正常卵巢组织(P<0.01),LINC01535高表达组的总体生存率显著低于LINC01535低表达组(P<0.01);LINC01535基因在89例上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),并与大网膜转移、淋巴结转移、FIGO分期及生存期相关(P<0.01或P<0.05),敲低LINC01535基因后可以抑制上皮性卵巢癌细胞系CAOV3的体外增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程(P<0.01或P<0.05)。结论:LINC01535基因在上皮性卵巢癌中可能发挥癌基因的作用,其高表达可能促进了上皮性卵巢癌细胞的增殖、侵袭及EMT进程,并有望成为上皮性卵巢癌患者预后评估的候选分子标记物。

LncRNA LINC01137通过诱导CD8^(+)T细胞耗竭促进非小细胞肺癌进展的机制研究

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LINC01137在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)免疫逃逸中的生物学功能及其潜在的调节机制。方法采集24例健康志愿者和24例NSCLC患者血液样本,并收集NSCLC肿瘤组织和癌旁组织检测LINC01137水平。利用Starbase数据库预测LINC01137与miR-22-3p的结合位点,荧光素酶报告基因分析进行验证。采用A549细胞来源的外泌体和/或sh-LINC01137干扰序列转染A549细胞,检测细胞增殖和侵袭能力;收集转染后的细胞上清液培养CD8^(+)T细胞,检测CD8^(+)T细胞耗竭标志物干扰素-γ(interfereron-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒霉素B(granzyme B)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平,以及PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比。采用外泌体和/或miR-22-3p模拟物(miR-22-3p mimic)转染CD8^(+)T细胞,检测PD-1蛋白水平。结果与癌旁组织相比,NSCLC肿瘤组织中LINC01137表达(3.357±0.548 vs 1.011±0.371)明显升高;与健康志愿者相比,NSCLC患者外周血LINC01137表达(3.216±0.342 vs 1.007±0.313)亦明显升高,差异具有统计学意义(t=-17.367,-17.147,均P<0.001)。肿瘤组织LINC01137表达与外周血中LINC01137表达呈正相关(r=0.755,P<0.05)。在A549细胞来源的外泌体中LINC01137显著富集。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组细胞活力(65.852%±4.715%vs 100.153%±11.934%)及细胞侵袭(21.464%±3.481%vs 43.126%±1.447%)能力显著降低,差异具有统计学意义(t=4.630,9.953,均P<0.01)。NSCLC患者外周血中LINC01137表达和CD8^(+)T细胞百分比呈负相关(r=-0.520,P<0.05)。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组IFN-γ(3865.314±543.852 pg/ml vs 1786.971±105.982 pg/ml),TNF-α(4631.930±510.715pg/ml vs 1973.242±379.623pg/ml),Granzyme B(3876.496±312.438pg/ml vs 1879.439±287.584pg/ml)和IL-2 mRNA水平(3.286±0.437 vs 1.015±0.314)升高,PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比(7.680%±2.185%vs 18.952%±3.216%)降低,差异具有统计学意义(t=-6.497,-7.237,-8.146,-7.310,5.021,均P<0.01)。miR-22-3p是LINC01137的靶基因。与Exo+NC mimic组相比,Exo+miR-22-3p组PD-1蛋白水平(0.384±0.087 vs 1.003±0.147)显著降低,差异有统计学意义(t=6.277,P<0.01)。结论NSCLC患者肿瘤组织及外周血中LINC01137表达显著上调;NSCLC细胞来源的外泌体中LINC01137通过靶向CD8^(+)T细胞中miR-22-3p并抑制其表达,诱导CD8^(+)T细胞耗竭,促进NSCLC细胞免疫逃逸。

长链非编码RNA LINC00265在先天性巨结肠转录水平的研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00265在先天性巨结肠(Hirschsprung′s disease,HD)病变狭窄段及正常段肠管中的定位及表达,为揭示HD的发病机制提供新的思路。方法:收集2017年1月—2019年1月间HD患儿12例的狭窄段、正常段结肠肠壁全层组织,常规处理制作石蜡切片,采用CY3标记的寡核苷酸探针进行荧光原位杂交,对同一倍数下的视野进行阳性细胞计数;运用miranda、PITA和Targetscan预测软件构建LINC00265 ceRNA网络图预测LINC00265的靶基因,并筛选出与神经营养因子通路及神经元生长迁移相关的基因。结果:荧光原位杂交结果显示LINC00265主要定位在肠管的黏膜层和肌层细胞的胞质中,狭窄段表达量明显少于正常段肠管,同一倍数高倍镜下狭窄段及正常段肠管中的阳性细胞计数分别为(3.67±1.30)、(10.33±2.46)个,差异有统计学意义(P<0.05),相关的下调靶基因有97个,其中血管紧张素转换酶、鸟嘌呤核苷酸交换因子蛋白、微管运动蛋白、与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)相关。结论:LINC00265可能通过调控BDNF的表达量改变肠壁微环境,进而干扰肠神经嵴干细胞的迁移、增殖,与HD的发生具有一定的相关性。

LINC00115靶向miR-874-3p调控肝癌细胞生物学行为以及紫杉醇敏感性

目的 探讨LINC00115靶向miR-874-3p对肝癌细胞生物学行为和紫杉醇敏感性的影响。方法 qRT-PCR检测LINC00115和miR-874-3p在肝癌组织、细胞系中的表达情况。将si-NC、si-LINC00115、miR-NC、miR-874-3p、pcDNA、pcDNA-LINC00115、anti-miR-NC+si-LINC00115、anti-miR-874-3p+si-LINC00115分别转染肝癌细胞MHCC97H。采用CCK-8法测定细胞活力和对紫杉醇的IC50值。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验确定LINC00115和miR-874-3p的关系。结果 肝癌组织、细胞系中LINC00115呈高表达(均P<0.05),miR-874-3p呈低表达(均P<0.05)。下调LINC00115表达后细胞吸光度(A)值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著降低(均P<0.05),而miR-874-3p表达显著增加(均P<0.05)。上调miR-874-3p表达后细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著减少(均P<0.05)。上调LINC00115表达后miR-874-3p表达显著减少(P<0.05)。LINC00115与miR-874-3p直接结合。下调miR-874-3p表达显著减弱LINC00115对肝癌细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论 下调LINC00115通过促进miR-874-3p表达来抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭行为,增加其对紫杉醇的敏感性。

LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌转移的恶性进展

目的探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌恶性进展及其潜在的分子机制。方法选取2021年6月11日至2023年6月11日在河南大学淮河医院确诊为结直肠癌的患者96例为研究对象,分别取患者的癌组织和癌旁正常组织。体外培养结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、DLD-1、LOVO、Caco-2)和结直肠正常细胞(NCM460),qRT-PCR检测结直肠癌组织和细胞系中LINC00626、KHSRP的表达情况。筛选出慢病毒感染细胞系,SW620和HCT116细胞系分别转染敲降慢病毒及其对照,HT29和DLD-1细胞系分别转染过表达慢病毒及其对照。选取稳定转染的细胞系进行细胞功能实验,检测增殖、迁移、侵袭能力。小鼠活体动物实验检测LINC00626对结直肠癌肿瘤生长和迁移的影响。Western blot法检测稳染细胞中KHSRP蛋白的表达水平。拯救实验研究LINC00626与KHSRP的调控关系。结果qRT-PCR显示,在结直肠癌组织和细胞系中LINC00626低表达,而KHSRP高表达。细胞功能实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组在SW620和HCT116细胞促进细胞增殖、细胞迁移、侵袭,过表达组则反之。细胞拯救实验显示,LINC00626+KHSRP可显著逆转敲降LINC00626对细胞增殖、细胞迁移、侵袭的促进作用。裸鼠实验中,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组裸鼠肿瘤体积和重量、细胞增殖率和结直肠癌肺转移病灶数目明显增加;过表达结果相反。信号通路实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组JAK1、STAT3mRNA的表达量显著上调,过表达组结果相反。结论LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴,抑制结直肠癌转移的恶性进程。

LINC00240调节miR-124-3p/UHRF1轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LINC00240调节miR-124-3p/环指域泛素样蛋白1(UHRF1)轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测食管鳞状癌(ESCC)组织与癌旁组织,ESCC细胞系(ECA109、TE-13、EC9706和KYSE-150)与正常食管上皮HET-1A细胞中LINC00240、miR-124-3p、UHRF1 mRNA表达水平;以ECA109细胞为研究对象,分组分别为shRNA-NC组(转染shRNA阴性对照)、sh-LINC00240组(转染LINC00240 shRNA)、sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组(共转染sh-LINC00240与miR-124-3p-inhibitor)、sh-LINC00240+inhibitor-NC组(共转染sh-LINC00240与inhibitor-NC),并以未经处理的ECA109细胞为对照组,Western Blot检测P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、UHRF1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭及迁移;双荧光素酶验证miR-124-3p与LINC00240、UHRF1关系。通过裸鼠注射ECA109细胞建立裸鼠移植瘤实验,单细胞悬液(4×10^(6)细胞/ml)用一次性无菌注射器皮下注射到裸鼠背部,并依次分为模型组、NC组、干扰LINC00240组,分离肿瘤,分析肿瘤质量及成瘤个数。结果ESCC组织及细胞中LINC00240、UHRF1 mRNA表达显著增加,miR-124-3p表达显著降低(P<0.05)。sh-LINC00240组增殖率、侵袭与迁移数、LINC00240、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较对照组、shRNA-NC组显著降低,P21、miR-124-3p表达显著增加(P<0.05);sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组增殖率、侵袭与迁移数、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较sh-LINC00240+inhibitor-NC组显著增加,P21、miR-124-3p表达显著降低(P<0.05),LINC00240表达差异无统计意义(P>0.05)。miR-124-3p与LINC00240、UHRF1具有靶向关系。干扰LINC00240组较模型组、NC组肿瘤质量、成瘤个数显著减少(P<0.05)。结论干扰LINC00240可抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与上调miR-124-3p/UHRF1轴有关。

N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

LINC01503在喉鳞癌中表达增高并促进喉鳞癌进展

目的:探讨长链非编码RNA LINC01503在喉鳞癌中的表达及其促癌作用。方法:通过qRT-PCR的方法检测LINC01503在喉鳞癌组织及细胞中的表达水平,并分析其表达水平与临床参数的关系,通过CCK-8、克隆形成实验检测LINC01503对喉鳞癌细胞增殖能力的影响,通过Transwell小室迁移及侵袭实验检测LINC01503对细胞迁移及侵袭能力的影响,通过裸鼠动物模型进行体内实验,进一步验证LINC01503促进喉鳞癌进展的生物学作用。结果:LINC01503在喉鳞癌中表达增高,其表达水平与喉鳞癌患者的临床分期、组织病理分化程度及颈部淋巴结是否转移有关。体内体外研究证实,通过质粒转染过表达LINC01503,能够促进喉鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,能够促进裸鼠体内荷瘤的生长,而敲低LINC01503的表达能获得相反的结果。结论:LINC01503在喉鳞癌中表达增高,作为促癌基因,能够促进喉鳞癌的增殖、迁移及侵袭能力等恶性表型的进展。

长链非编码RNA LINC00987通过细胞色素P450途径促进AML细胞凋亡的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00987在抗肿瘤药物诱导的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡中的作用及分子机制。方法:通过RT-qPCR检测AML中的LINC00987表达水平。构建稳定敲减LINC00987基因的Molm13细胞(shLINC00987),通过Annexin V/PI检测LINC00987低表达对阿糖胞苷诱导AML细胞凋亡的影响。对LINC00987共表达基因进行信号通路富集,分析LINC00987的表达对细胞色素家族基因的影响。结果:与健康对照组相比,lncRNA LINC00987在AML细胞系和AML病人标本中均显著降低,而在抗AML治疗后缓解组中高表达;此外,低表达LINC00987与AML患者预后不良有关。抗肿瘤药物阿糖胞苷、阿霉素、三氧化二砷和维奈托克可显著诱导AML细胞系Molm13和MV411的LINC00987表达。下调LINC00987的表达可抑制阿糖胞苷诱导的Molm13细胞凋亡。进一步研究发现,LINC00987共表达基因可富集于细胞色素P450(cytochrome,P450,CYP450)介导的氧化应激通路/网络,且LINC00987的表达与CYP450家族基因CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的表达水平呈正相关。下调LINC00987的表达则可抑制阿糖胞苷诱导的CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的mRNA表达。结论:LINC00987可以作为AML的预后标志物,其可能通过CYP450介导的氧化应激途径促进阿糖胞苷诱导的AML细胞凋亡。

lncRNA LINC00339调控细胞自噬抑制BMSC成骨的机制研究

目的探讨lncRNA LINC00339调控细胞自噬并抑制骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSC)成骨分化的可能机制。方法以大鼠原代BMSC为研究对象,根据给予的处理因素不同,分为以下4组:敲减LINC00339组、敲减BECN1组、空载对照组、敲减LINC00339+敲减BECN1组。分别应用ELISA检测试剂盒检测细胞上清液中ALP、BGP、PICP;Western blot检测成骨相关指标BMP2、Osterix、Runx2以及自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;应用茜素红染色技术检测成骨分化;通过免疫荧光检测LC3斑点。结果与对照组相比,ELISA法检测结果显示siLINC00339组ALP、BGP、PICP显著增高;Western blot结果显示成骨相关蛋白BMP2、Osterix、Runx2和自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白表达上调;茜素红染色后细胞视野可见成骨明显增多;免疫荧光观察LC3蛋白明显增多,以上结果差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,siBECN1组ALP、BGP、PICP显著下降,成骨相关基因BMP2、Osterix、Runx2和自噬相关蛋白BECN1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62表达下调,茜素红染色后细胞视野可见成骨明显减少,免疫荧光观察LC3蛋白明显减少,以上结果差异均有统计学意义(P<0.05);而双基因操作的siLINC00339+siBECN1组以上各检测结果分别与siLINC00339组和siBECN1组相比差异均有统计学意义(P<0.05),但与对照组相比均无统计学意义(P>0.05)。结论lncRNA LINC00339可抑制BMSC成骨分化,其机制可能与调控了BECN1参与的细胞自噬现象有关。

参苓白术散通过Linc01615/miR-491-5p对结直肠癌细胞的影响

目的探索参苓白术散通过Linc01615/miR-491-5p对结直肠癌细胞凋亡、细胞周期和侵袭作用的影响。方法通过细胞转染构建分组:空白对照组、参苓白术散组、参苓白术散组+siRNA Linc01615、参苓白术散组+oe Linc01615、参苓白术散组+miR-491-5p mimics、参苓白术散组+miR-491-5p抑制剂组、参苓白术散组+miR-491-5p mimics+oe Linc01615,加入相应的血清进行干预。经相应的血清处理后,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期分布情况,transwell实验检测细胞侵袭情况。结果参苓白术散处理细胞后,抑制细胞增殖、侵袭及细胞周期的G0/G1期并促进凋亡,在分别加入siRNA Linc01615和miR-491-5p mimics后效果更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论参苓白术散可能通过Linc01615/miR-491-5p抑制LoVo细胞的侵袭,促进凋亡并将细胞周期阻滞于G0/G1期。