小白菊内酯通过LINC00299/miR-590-3p对阿尔茨海默病模型细胞损伤的影响

目的探讨小白菊内酯调控LINC00299/微小RNA(miR)-590-3p途径对阿尔茨海默病(AD)模型细胞损伤的影响。方法用Aβ_(1~42)处理SK-N-SH细胞复制AD细胞模型。CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00299和miR-590-3p表达。采用上述方法观察抑制LINC00299对AD模型细胞损伤的影响。双荧光素酶报告实验验证LINC00299和miR-590-3p靶向关系。结果Aβ_(1~42)处理后,SK-N-SH细胞活力、miR-590-3p表达量、SOD活性明显降低,凋亡率、LINC00299表达量、MDA含量、LDH释放量明显升高(P<0.05)。小白菊内酯处理后,Aβ_(1~42)诱导的SK-N-SH细胞活力、miR-590-3p表达量、SOD活性明显升高,凋亡率、LINC00299表达量、MDA含量、LDH释放量明显降低(P<0.05)。LINC00299过表达逆转了小白菊内酯对Aβ_(1~42)诱导的SK-N-SH细胞凋亡和氧化损伤的影响。miR-590-3p与LINC00299序列直接结合。结论小白菊内酯可能通过调控LINC00299/miR-590-3p通路进而保护AD模型细胞损伤。

LINC00310在胰腺癌中的高表达及其靶向功能预测

目的:探讨长链间非编码RNA 310(LINC00310)在胰腺癌中的差异表达与其靶向功能的预测。方法:分析727例胰腺导管腺癌及548例周围正常胰腺组织对照样本中的LINC00310表达量。将LINC00310靶向的微小RNA(miRNA)与信使RNA(mRNA)分别与胰腺癌差异表达的miRNA与mRNA取交集后,使用Cytoscape v3.9.0构建长链非编码RNA(lncRNA)-miRNA-mRNA调控网络。利用“clusterProfiler”对LINC00310-miRNA-mRNA调控网络的基因功能进行注释分析。结果:LINC00310表达水平在胰腺癌中呈高表达,其标准平均差(SMD)值为0.17[0.06,0.29]。作为LINC00310预测调控的miRNA,miR-346,miR-596,miR-103a-2-5p,miR-661,miR-384及miR-15a-5p呈高表达,miR-4284及miR-1182呈低表达。根据miRNA预调控差异表达mRNA有46个(下调15个及上调31个)。LINC00310竞争性内源性RNA(ceRNA)可能参与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路。结论:LINC00310作为临床胰腺癌诊断潜在分子标志物,可以为胰腺癌靶向治疗提供新的方案及思路。

LINC01535在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:检测LINC01535基因在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)组织及细胞株中的表达情况及其与患者临床病理和预后的关系,探讨LINC01535对上皮性卵巢癌细胞CAOV3增殖、侵袭及EMT的影响。方法:基于GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析LINC01535在上皮性卵巢癌组织表达情况及对卵巢癌患者生存期的影响,应用实时荧光定量qRT-PCR(qRT-PCR)的方法检测上皮性卵巢癌组织和正常组织以及三种上皮性卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780、和CAOV3)中LINC01535基因的表达水平,分析LINC01535基因表达与临床病理参数及预后的关系;应用siRNA瞬时转染上皮性卵巢癌细胞CAOV3干扰LINC01535基因的表达后,MTS和Transwell小室迁移和侵袭实验检测LINC01535基因异常表达对上皮性卵巢癌细胞CAOV3增殖、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR法和Western blot法检测LINC01535对于EMT过程相关标志物(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)表达水平的影响。结果:应用GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库发现LINC01535在上皮性卵巢癌肿瘤组织中的表达显著高于正常卵巢组织(P<0.01),LINC01535高表达组的总体生存率显著低于LINC01535低表达组(P<0.01);LINC01535基因在89例上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),并与大网膜转移、淋巴结转移、FIGO分期及生存期相关(P<0.01或P<0.05),敲低LINC01535基因后可以抑制上皮性卵巢癌细胞系CAOV3的体外增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程(P<0.01或P<0.05)。结论:LINC01535基因在上皮性卵巢癌中可能发挥癌基因的作用,其高表达可能促进了上皮性卵巢癌细胞的增殖、侵袭及EMT进程,并有望成为上皮性卵巢癌患者预后评估的候选分子标记物。

LncRNA LINC01137通过诱导CD8^(+)T细胞耗竭促进非小细胞肺癌进展的机制研究

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LINC01137在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)免疫逃逸中的生物学功能及其潜在的调节机制。方法采集24例健康志愿者和24例NSCLC患者血液样本,并收集NSCLC肿瘤组织和癌旁组织检测LINC01137水平。利用Starbase数据库预测LINC01137与miR-22-3p的结合位点,荧光素酶报告基因分析进行验证。采用A549细胞来源的外泌体和/或sh-LINC01137干扰序列转染A549细胞,检测细胞增殖和侵袭能力;收集转染后的细胞上清液培养CD8^(+)T细胞,检测CD8^(+)T细胞耗竭标志物干扰素-γ(interfereron-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒霉素B(granzyme B)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平,以及PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比。采用外泌体和/或miR-22-3p模拟物(miR-22-3p mimic)转染CD8^(+)T细胞,检测PD-1蛋白水平。结果与癌旁组织相比,NSCLC肿瘤组织中LINC01137表达(3.357±0.548 vs 1.011±0.371)明显升高;与健康志愿者相比,NSCLC患者外周血LINC01137表达(3.216±0.342 vs 1.007±0.313)亦明显升高,差异具有统计学意义(t=-17.367,-17.147,均P<0.001)。肿瘤组织LINC01137表达与外周血中LINC01137表达呈正相关(r=0.755,P<0.05)。在A549细胞来源的外泌体中LINC01137显著富集。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组细胞活力(65.852%±4.715%vs 100.153%±11.934%)及细胞侵袭(21.464%±3.481%vs 43.126%±1.447%)能力显著降低,差异具有统计学意义(t=4.630,9.953,均P<0.01)。NSCLC患者外周血中LINC01137表达和CD8^(+)T细胞百分比呈负相关(r=-0.520,P<0.05)。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组IFN-γ(3865.314±543.852 pg/ml vs 1786.971±105.982 pg/ml),TNF-α(4631.930±510.715pg/ml vs 1973.242±379.623pg/ml),Granzyme B(3876.496±312.438pg/ml vs 1879.439±287.584pg/ml)和IL-2 mRNA水平(3.286±0.437 vs 1.015±0.314)升高,PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比(7.680%±2.185%vs 18.952%±3.216%)降低,差异具有统计学意义(t=-6.497,-7.237,-8.146,-7.310,5.021,均P<0.01)。miR-22-3p是LINC01137的靶基因。与Exo+NC mimic组相比,Exo+miR-22-3p组PD-1蛋白水平(0.384±0.087 vs 1.003±0.147)显著降低,差异有统计学意义(t=6.277,P<0.01)。结论NSCLC患者肿瘤组织及外周血中LINC01137表达显著上调;NSCLC细胞来源的外泌体中LINC01137通过靶向CD8^(+)T细胞中miR-22-3p并抑制其表达,诱导CD8^(+)T细胞耗竭,促进NSCLC细胞免疫逃逸。

长链非编码RNA LINC00265在先天性巨结肠转录水平的研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00265在先天性巨结肠(Hirschsprung′s disease,HD)病变狭窄段及正常段肠管中的定位及表达,为揭示HD的发病机制提供新的思路。方法:收集2017年1月—2019年1月间HD患儿12例的狭窄段、正常段结肠肠壁全层组织,常规处理制作石蜡切片,采用CY3标记的寡核苷酸探针进行荧光原位杂交,对同一倍数下的视野进行阳性细胞计数;运用miranda、PITA和Targetscan预测软件构建LINC00265 ceRNA网络图预测LINC00265的靶基因,并筛选出与神经营养因子通路及神经元生长迁移相关的基因。结果:荧光原位杂交结果显示LINC00265主要定位在肠管的黏膜层和肌层细胞的胞质中,狭窄段表达量明显少于正常段肠管,同一倍数高倍镜下狭窄段及正常段肠管中的阳性细胞计数分别为(3.67±1.30)、(10.33±2.46)个,差异有统计学意义(P<0.05),相关的下调靶基因有97个,其中血管紧张素转换酶、鸟嘌呤核苷酸交换因子蛋白、微管运动蛋白、与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)相关。结论:LINC00265可能通过调控BDNF的表达量改变肠壁微环境,进而干扰肠神经嵴干细胞的迁移、增殖,与HD的发生具有一定的相关性。

LINC00115靶向miR-874-3p调控肝癌细胞生物学行为以及紫杉醇敏感性

目的 探讨LINC00115靶向miR-874-3p对肝癌细胞生物学行为和紫杉醇敏感性的影响。方法 qRT-PCR检测LINC00115和miR-874-3p在肝癌组织、细胞系中的表达情况。将si-NC、si-LINC00115、miR-NC、miR-874-3p、pcDNA、pcDNA-LINC00115、anti-miR-NC+si-LINC00115、anti-miR-874-3p+si-LINC00115分别转染肝癌细胞MHCC97H。采用CCK-8法测定细胞活力和对紫杉醇的IC50值。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验确定LINC00115和miR-874-3p的关系。结果 肝癌组织、细胞系中LINC00115呈高表达(均P<0.05),miR-874-3p呈低表达(均P<0.05)。下调LINC00115表达后细胞吸光度(A)值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著降低(均P<0.05),而miR-874-3p表达显著增加(均P<0.05)。上调miR-874-3p表达后细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭显著减少(均P<0.05)。上调LINC00115表达后miR-874-3p表达显著减少(P<0.05)。LINC00115与miR-874-3p直接结合。下调miR-874-3p表达显著减弱LINC00115对肝癌细胞A值、对紫杉醇IC50值、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论 下调LINC00115通过促进miR-874-3p表达来抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭行为,增加其对紫杉醇的敏感性。

LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌转移的恶性进展

目的探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控结直肠癌恶性进展及其潜在的分子机制。方法选取2021年6月11日至2023年6月11日在河南大学淮河医院确诊为结直肠癌的患者96例为研究对象,分别取患者的癌组织和癌旁正常组织。体外培养结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、DLD-1、LOVO、Caco-2)和结直肠正常细胞(NCM460),qRT-PCR检测结直肠癌组织和细胞系中LINC00626、KHSRP的表达情况。筛选出慢病毒感染细胞系,SW620和HCT116细胞系分别转染敲降慢病毒及其对照,HT29和DLD-1细胞系分别转染过表达慢病毒及其对照。选取稳定转染的细胞系进行细胞功能实验,检测增殖、迁移、侵袭能力。小鼠活体动物实验检测LINC00626对结直肠癌肿瘤生长和迁移的影响。Western blot法检测稳染细胞中KHSRP蛋白的表达水平。拯救实验研究LINC00626与KHSRP的调控关系。结果qRT-PCR显示,在结直肠癌组织和细胞系中LINC00626低表达,而KHSRP高表达。细胞功能实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组在SW620和HCT116细胞促进细胞增殖、细胞迁移、侵袭,过表达组则反之。细胞拯救实验显示,LINC00626+KHSRP可显著逆转敲降LINC00626对细胞增殖、细胞迁移、侵袭的促进作用。裸鼠实验中,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组裸鼠肿瘤体积和重量、细胞增殖率和结直肠癌肺转移病灶数目明显增加;过表达结果相反。信号通路实验显示,与sh-NC组相比,sh-LINC00626组JAK1、STAT3mRNA的表达量显著上调,过表达组结果相反。结论LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴,抑制结直肠癌转移的恶性进程。

LINC01503在喉鳞癌中表达增高并促进喉鳞癌进展

目的:探讨长链非编码RNA LINC01503在喉鳞癌中的表达及其促癌作用。方法:通过qRT-PCR的方法检测LINC01503在喉鳞癌组织及细胞中的表达水平,并分析其表达水平与临床参数的关系,通过CCK-8、克隆形成实验检测LINC01503对喉鳞癌细胞增殖能力的影响,通过Transwell小室迁移及侵袭实验检测LINC01503对细胞迁移及侵袭能力的影响,通过裸鼠动物模型进行体内实验,进一步验证LINC01503促进喉鳞癌进展的生物学作用。结果:LINC01503在喉鳞癌中表达增高,其表达水平与喉鳞癌患者的临床分期、组织病理分化程度及颈部淋巴结是否转移有关。体内体外研究证实,通过质粒转染过表达LINC01503,能够促进喉鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,能够促进裸鼠体内荷瘤的生长,而敲低LINC01503的表达能获得相反的结果。结论:LINC01503在喉鳞癌中表达增高,作为促癌基因,能够促进喉鳞癌的增殖、迁移及侵袭能力等恶性表型的进展。

长链非编码RNA LINC00987通过细胞色素P450途径促进AML细胞凋亡的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00987在抗肿瘤药物诱导的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡中的作用及分子机制。方法:通过RT-qPCR检测AML中的LINC00987表达水平。构建稳定敲减LINC00987基因的Molm13细胞(shLINC00987),通过Annexin V/PI检测LINC00987低表达对阿糖胞苷诱导AML细胞凋亡的影响。对LINC00987共表达基因进行信号通路富集,分析LINC00987的表达对细胞色素家族基因的影响。结果:与健康对照组相比,lncRNA LINC00987在AML细胞系和AML病人标本中均显著降低,而在抗AML治疗后缓解组中高表达;此外,低表达LINC00987与AML患者预后不良有关。抗肿瘤药物阿糖胞苷、阿霉素、三氧化二砷和维奈托克可显著诱导AML细胞系Molm13和MV411的LINC00987表达。下调LINC00987的表达可抑制阿糖胞苷诱导的Molm13细胞凋亡。进一步研究发现,LINC00987共表达基因可富集于细胞色素P450(cytochrome,P450,CYP450)介导的氧化应激通路/网络,且LINC00987的表达与CYP450家族基因CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的表达水平呈正相关。下调LINC00987的表达则可抑制阿糖胞苷诱导的CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的mRNA表达。结论:LINC00987可以作为AML的预后标志物,其可能通过CYP450介导的氧化应激途径促进阿糖胞苷诱导的AML细胞凋亡。

基于TCGA数据集分析LINC00900在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的研究甲状腺乳头状癌(PTC)中长链非编码RNA00900(LINC00900)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法利用美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集PTC数据资料,下载基因表达谱资料和PTC临床病例信息资料。比较PTC癌组织和癌旁甲状腺组织中LINC00900的表达。分析LINC00900表达与患者临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier生存曲线分析LINC00900表达与PTC患者生存时间的关系。通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)预测与LINC00900相关的蛋白编码基因(PCGs),利用注释、可视化和集成发现数据库(DAVID)在线注释工具对筛选出的PCGs进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果LINC00900在PTC癌组织的表达水平显著高于癌旁正常甲状腺组织(P<0.001)。不同年龄、病理T分期、组织学类型PTC患者的LINC00900表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);≥55岁PTC患者LINC00900表达水平明显低于<55岁组(P<0.01);T3~T4期PTC患者的LINC00900表达水平明显低于T1~T2期(P<0.01);高细胞亚型PTC患者LINC00900表达水平低于经典型、滤泡型和其他型(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,LINC00900高表达组PTC患者的生存率明显高于低表达组(Log-rankχ^(2)=6.691,P<0.05)。功能富集分析结果显示,LINC00900可能通过核小体装配、mRNA的剪接、组蛋白H3甲基化的修饰、染色体绑定、组蛋白乙酰转移酶调节因子活性调节、鞘氨醇-1-磷酸磷酸酶活性调节、黏蛋白型O-聚糖生物合成等通路影响PTC的进展及预后。结论在PTC中,LINC00900高表达是一种预后保护因素,可作为辅助判断PTC预后的有效生物标志物之一。

LINC00894通过miR-205-5p/ZEB1轴对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的 探究长链非编码RNA 00894(LINC00894)基因对人胃癌细胞增殖、转移的影响,验证LINC00894、miR-205-5p、ZEB1在胃癌中的调控关系。方法 采用RT-qPCR检测LINC00894在胃癌细胞系、正常胃细胞系、临床胃癌及正常胃组织样本中的表达水平;通过随访,探究LINC00894的表达水平与胃癌患者预后的关系;构建LINC00894敲减细胞系和过表达细胞系,并采用RT-qPCR检测敲减及过表达效率;通过CCK-8、克隆形成和Transwell实验检测细胞增殖与转移能力;采用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR实验和Western blot实验检测LINC00894、miR-205-5p和ZEB1的靶向调控关系。结果 LINC00894基因在胃癌组织或细胞中的表达量明显高于胃正常组织或细胞,且LINC00894基因高表达的胃癌患者预后更差;LINC00894基因的敲减抑制了胃癌细胞的活力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力,相反,LINC00894基因的过表达得到相反地结果;LINC00894通过靶向miR-205-5p并下调其表达,从而促进ZEB1的表达。结论 LINC00894在胃癌中扮演癌基因的角色,可能通过miR-205-5p/ZEB1轴促进胃癌细胞增殖和转移。

LINC00475在多发性骨髓瘤中的表达与临床意义

目的:探讨LINC00475在多发性骨髓瘤(MM)患者血清中的相对表达水平及临床意义。方法:用实时荧光定量PCR技术检测108例MM患者血清及RPMI 8226、NCI-H929、U266、OPM2、CAG这5个MM细胞系中LINC00475的表达情况,受试者工作特征曲线评估其对MM的诊断价值,并结合患者的临床资料分析LINC00475与患者临床特征的关系。结果:与健康对照组相比,MM患者血清及MM细胞系中LINC00475的表达明显上调(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,LINC00475的最佳截断值为262.4,曲线下面积为0.924(95%CI:0.884-0.964),灵敏度83.3%,特异度91.7%,表明LINC00475在MM患者中具有良好的评估价值。与LINC00475低表达组的MM患者相比,高表达组的患者具有较高水平的β2-微球蛋白和胱抑素C(均P<0.05),但白蛋白水平较低(P<0.05)。与ISS分期Ⅰ期的MM患者相比,Ⅱ期和Ⅲ期患者LINC00475的表达水平均明显增高(均P<0.05)。结论:检测LINC00475的相对表达水平有助于区分MM患者和正常人群,其相对表达水平与MM患者的β2-微球蛋白、白蛋白、ISS分期等预后指标相关。

长链非编码RNA Linc00467在肿瘤中的作用研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度大于200 nt的不编码蛋白质的RNA分子,其在肿瘤发展过程中的作用目前正被广泛研究。lncRNA Linc00467是一种新发现的lncRNA,且已被证实在肝癌、胃癌、肺癌、结直肠癌等多种肿瘤中均有异常表达。其可调节肿瘤细胞的恶性进程,并影响患者的生存及预后,是与多种恶性肿瘤相关的癌基因。笔者结合目前已有报道,对Linc00467在恶性肿瘤中的作用及其机制研究进展作一综述,以期为Linc00467更全面的研究提供帮助。

LncRNA LINC00665通过miR-9-5p调节ATF1表达促进甲状腺乳头状癌进展

目的 探究LncRNA LINC00665通过miR-9-5p调节转录激活因子(ATF)1表达,促进甲状腺乳头状癌(PTC)的进展。方法 收集手术切除的PTC组织及癌旁组织80例,qRT-聚合酶链反应(PCR)分析PTC组织及癌旁组织、PTC细胞系中LINC00665与miR-9-5p的相对表达,分析LINC00665与miR-9-5p在PTC中的相关性。B-CPAP细胞分为对照组、阴性对照组、shLINC00665组和shLINC00665+miR-9-5p-inhibitor组,进行对应转染。Target Scan Human预测和双荧光素酶报告基因检测分析LINC00665、ATF1和miR-9-5p的靶向调节关系。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式检测细胞凋亡,Western印迹检测PTC及癌旁组织ATF1和细胞ATF1、凝血酶敏感蛋白(TSP)-1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,体内异种移植实验检测肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤ATF1表达。结果 与癌旁组织相比,PTC组织中LncRNA LINC00665、ATF1表达量显著升高,LncRNA LINC00665与miR-9-5p水平呈显著负相关(P<0.05)。与Nthy-ori3-1相比,TPC-1、KTC-1、B-CPAP、HTori-3的LINC00665表达量均显著升高,miR-9-5p表达量均显著降低(P<0.05)。LINC00665与miR-9-5p、miR-9-5p与ATF1存在结合位点,LINC00665靶向抑制miR-9-5p, miR-9-5p靶向抑制ATF1。与对照组相比,shLINC00665组细胞增殖活性、迁移与侵袭能力、Bcl-2表达量、皮下肿瘤生长速度与ATF1表达量显著降低,凋亡率、TSP-1、Bax表达量显著升高(P<0.05);与shLINC00665组相比,shLINC00665+miR-9-5p-inhibitor组细胞增殖活性、迁移与侵袭能力、Bcl-2表达量、皮下肿瘤生长速度与ATF1表达量显著提升,凋亡率、TSP-1、Bax表达量显著下降(P<0.05)。结论 LncRNA LINC00665能够靶向调控miR-9-5p表达,降低miR-9-5p对ATF1的抑制,促进PTC发展。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

LINC00240调节miR-124-3p/UHRF1轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨LINC00240调节miR-124-3p/环指域泛素样蛋白1(UHRF1)轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测食管鳞状癌(ESCC)组织与癌旁组织,ESCC细胞系(ECA109、TE-13、EC9706和KYSE-150)与正常食管上皮HET-1A细胞中LINC00240、miR-124-3p、UHRF1 mRNA表达水平;以ECA109细胞为研究对象,分组分别为shRNA-NC组(转染shRNA阴性对照)、sh-LINC00240组(转染LINC00240 shRNA)、sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组(共转染sh-LINC00240与miR-124-3p-inhibitor)、sh-LINC00240+inhibitor-NC组(共转染sh-LINC00240与inhibitor-NC),并以未经处理的ECA109细胞为对照组,Western Blot检测P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、UHRF1蛋白表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭及迁移;双荧光素酶验证miR-124-3p与LINC00240、UHRF1关系。通过裸鼠注射ECA109细胞建立裸鼠移植瘤实验,单细胞悬液(4×10^(6)细胞/ml)用一次性无菌注射器皮下注射到裸鼠背部,并依次分为模型组、NC组、干扰LINC00240组,分离肿瘤,分析肿瘤质量及成瘤个数。结果ESCC组织及细胞中LINC00240、UHRF1 mRNA表达显著增加,miR-124-3p表达显著降低(P<0.05)。sh-LINC00240组增殖率、侵袭与迁移数、LINC00240、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较对照组、shRNA-NC组显著降低,P21、miR-124-3p表达显著增加(P<0.05);sh-LINC00240+miR-124-3p-inhibitor组增殖率、侵袭与迁移数、MMP-2、UHRF1 mRNA及蛋白表达较sh-LINC00240+inhibitor-NC组显著增加,P21、miR-124-3p表达显著降低(P<0.05),LINC00240表达差异无统计意义(P>0.05)。miR-124-3p与LINC00240、UHRF1具有靶向关系。干扰LINC00240组较模型组、NC组肿瘤质量、成瘤个数显著减少(P<0.05)。结论干扰LINC00240可抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与上调miR-124-3p/UHRF1轴有关。

N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

Linc-smad7通过靶向miR-125b/SIRT1轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA smad7(long non-coding RNA smad7,Linc-smad7)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞侵袭、迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测PC组织及细胞系中Linc-smad7的表达;Transwell小室观察过表达Linc-smad7对PaCa-2细胞迁移、侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因检测Linc-smad7对miR-125b,以及miR-125b对沉默调节蛋白1(Sirtuin1,SIRT1)的结合作用;qRT-PCR检测Linc-smad7在PaCa-2细胞中对miR-125b表达的调控作用,qRT-PCR、Western blotting检测miR-125b对SIRT1表达的调控作用。结果Linc-smad7在PC组织及细胞系中明显升高;Linc-smad7表达上调的PaCa-2细胞迁移、侵袭能力增强,miR-125b表达下降;miR-125b表达上调后,SIRT1表达显著下降;荧光素酶报告基因结果提示Linc-smad7直接靶向结合miR-125b,miR-125b直接结合SIRT1;过表达Linc-smad7或是下调miR-125b表达可逆转SIRT1沉默对PaCa-2细胞侵袭、迁移能力的影响。结论Linc-smad7通过miR-125b/SIRT1轴促进PaCa-2细胞侵袭和迁移。

肿瘤中长链非编码RNA LINC01503的表达及分子调控研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA,在染色体修饰、转录调控以及转录后加工等水平调控基因的表达,从而影响肿瘤的发生发展,探究lncRNA在肿瘤中的分子调控机制是近几年来研究热点之一。现有研究证实LINC01503是一种在鳞状细胞癌研究中新近发现的长链非编码RNA,在结直肠癌、卵巢癌、肺癌及胶质瘤等诸多人类肿瘤中呈现显著高表达,其异常表达常与患者不良预后密切相关,并且能够通过ceRNA机制、上皮间质转化、参与多种相关信号通路以及表观遗传修饰等途径促进肿瘤细胞的恶性生物学行为,包括细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡等;对LINC01503作用的研究有助于相关肿瘤的诊断、治疗及评估预后。本文就LINC01503在肿瘤中的表达及分子调控研究进展进行综述。

LINC00324对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制

目的探讨LINC00324对黑色素瘤增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法基于基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)数据库分析LINC00324在黑色素瘤组织和癌旁组织中的表达水平以及对患者预后的影响。在黑色素瘤细胞株SK-MEL-2中转染LINC00324过表达载体和siRNA,并标记为过表达阴性对照组(NC组)、过表达组(OE组)、沉默阴性对照组(si-NC组)和沉默组(si-LINC00324组);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00324转染效率以及Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot实验检测关键蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,LINC00324在黑色素瘤组织中低表达(P<0.05),且低表达患者的预后较差。qRT-PCR结果显示,LINC00324的过表达载体和siRNA在黑色素瘤细胞中转染成功(P<0.01)。与NC组相比,OE组SK-MEL-2细胞增殖、迁移以及侵袭能力明显减弱(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组SK-MEL-2细胞增殖、迁移能力提高(P<0.01)。与NC组相比,OE组细胞中Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA水平下调(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组细胞中Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA水平上调(P<0.01)。Western blot结果显示,与NC组相比,OE组细胞中p62和Bcl-2的蛋白水平上调(P<0.05),LC3BⅡ蛋白水平下调(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组细胞中p62和Bcl-2的蛋白水平下调(P<0.05),LC3BⅡ蛋白水平上调(P<0.05)。结论LINC00324在黑色素瘤组织和细胞系中低表达,可以通过上调Bcl-2抑制自噬影响黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。