LINC 01296/miR-1255 b-5 p促进非小细胞肺癌进展的研究

目的探究下调LINC 01296的表达对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)进展的影响,以及LINC 01296调控miR-1255 b-5 p在NSCLC发生发展中的分子机制。方法培养6种NSCLC细胞系;实时荧光定量聚合酶链反应法检测LINC 01296在NSCLC细胞系以及在48例患者样本中表达水平的高低;细胞计数试剂盒-8法检测稳转细胞株的细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞的生长以及增殖状况;划痕实验检测细胞的迁移情况;FITC-Annexin-V法检测细胞凋亡;动物实验,包括裸鼠尾静脉和皮下瘤注射,观察癌细胞的转移以及成瘤情况;双荧光素酶报告基因实验验证LINC 01296与miR-1255 b-5 p之间存在靶向结合关系。结果LINC 01296在NSCLC中高表达;LINC 01296基因敲低抑制NSCLC细胞生长、迁移;LINC 01296敲低抑制体内瘤体的生长和转移;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的之间存在海绵吸附作用;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的表达呈负相关。结论LINC 01296作为NSCLC的促癌分子,通过抑制miR-1255 b-5 p的表达水平,促进了NSCLC的发展。

一个线虫长非编码RNA的单细胞精度表达谱分析以及基因敲除研究

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)中长非编码RNA(long non-protein coding RNA gene,lncRNA)的结构和功能是近年来的研究热点之一。数据表明长非编码基因linc-5在线虫的胚胎和早期幼虫均有较高表达,提示其在线虫的胚胎发育过程中具有非常重要的作用。选取线虫两个物种C.elegans和C.briggsae为实验材料,构建启动子与荧光报告基因(mCherry)融合载体;通过基因枪整合到基因组上,得到纯合转基因线虫品系;结合在线虫中建立的单细胞精度的表达谱分析技术,对线虫两个物种幼虫L1时期的表达谱比较,说明linc-5在物种间具有非常强的保守性;在线虫中利用基因组编辑工具CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated system)技术成功敲除linc-5基因,为进一步研究linc-5的功能提供了良好基础。