长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/YAP信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌药物敏感性中的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA LINC-PINT通过Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路在缺氧诱导的头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)药物敏感性中的作用。方法 CCK-8法检测低氧环境中HNSCC细胞系(AGZY-973、HN4和HN30细胞)及正常人口腔角质形成细胞(NHOKs)增殖变化;取状态较好的HN30细胞,设置为正常组、低氧组、低氧+LINC-PINT过表达组、低氧+过表达阴性对照组。qRT-PCR检测HN30细胞中LINC-PINT表达水平;CCK-8法检测HN30细胞的药物敏感性及顺铂对HN30细胞增殖影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测HN30细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、p-YAP、YAP蛋白表达水平。结果 在低氧条件下,AGZY-973细胞、HN4细胞和HN30细胞增殖率较NHOKs细胞显著增加(P<0.05)。与正常组相比,低氧组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著增加,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著降低(P<0.05);与低氧+过表达阴性对照组相比,低氧+LINC-PINT过表达组HN30细胞IC50值、HIF-1α、p-YAP/YAP表达显著降低,细胞凋亡率、24 h和48 h细胞生长抑制率、LINC-PINT表达水平显著增加(P<0.05)。结论 过表达LINC-PINT可提高缺氧诱导的HNSCC顺铂敏感性,可能与抑制Hippo/YAP信号通路的激活有关。

长链非编码RNA linc-PINT通过调控SMAD4抑制结直肠癌的恶性进展

目的研究linc-PINT在结直肠癌中的作用及其作用机制。方法通过实时荧光定量PCR检测linc-PINT在60对结肠癌患者肿瘤组织及正常组织中的表达水平,并应用卡方检验分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系,应用Log-rank检验分析其与结直肠癌患者预后的关系。应用实时荧光定量PCR检测linc-PINT在HCT116、HT29、LOVO、RKO、SW620、SW480等6种结肠癌细胞系及正常结肠粘膜细胞NCM460中的基础表达水平。通过CCK-8实验检测linc-PINT对细胞增殖的影响;应用Transwell实验检测linc-PINT对细胞迁移能力的影响;通过Western blot检测linc-PINT对SMAD4蛋白的影响。结果 linc-PINT在结直肠癌肿瘤组织中的表达水平(1.35±0.80)显著低于其在相应正常组织中的表达水平(3.67±1.56)(P <0.05);linc-PINT的表达水平与结肠癌患者的分期和肝转移等临床病理特征呈负相关(P <0.05),而与年龄、性别、分化和淋巴结转移等无明显相关性(P> 0.05);linc-PINT的表达水平与结肠癌患者预后呈正相关(P <0.05);linc-PINT在HCT116、HT29、LOVO、RKO、SW620、SW480等细胞的表达均低于其在NCM460中的表达。过表达linc-PINT可以抑制SW480细胞的增殖和迁移能力(均P <0.05);Linc-PINT与SMAD4在结肠癌肿瘤组织中的表达水平呈正相关(r=0.592,P <0.05);过表达linc-PINT后SMAD4蛋白的表达水平显著升高。结论 linc-PINT通过SMAD4调节结直肠癌的恶性进展,其可能成为结直肠癌治疗的潜在靶点。

lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴调节喉癌细胞干性

目的:探讨lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴对喉癌细胞干性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法将LINC-PINT全长序列扩增并转染到HEp-2细胞,应用Diana Tools、双荧光素酶报告分析系统分别预测和验证LINC-PINT及miR-425-5p的分子靶标,应用qRT-PCR和Western blot检测LINC-PINT和癌细胞干性相关基因(Sox-2、CD44、CD133和Nanog)及其蛋白的表达。结果:转染LINC-PINT后证实LINC-PINT过表达会引起癌细胞干性相关基因表达下调,抑制miR-425-5p可引起癌细胞干性相关基因表达下调;LINC-PINT的分子靶标为miR-425-5p,且miR-425-5p的分子靶标为PTCH1。结论:LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴抑制喉癌细胞干性而抑制喉癌的发生。

长链非编码RNA LINC-PINT通过靶向miR-524-5p调控骨肉瘤细胞增殖凋亡的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA LINC-PINT对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常成骨细胞hFOB和人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC-PINT和miR-524-5p的表达。应用脂质体法转染至pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC-PINT组(转染pcDNA-LINC-PINT)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC-PINT组(转染si-LINC-PINT)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-524-5p组(转染miR-524-5p mimics)、pcDNA-LINC-PINT+miR-NC组(共转染pcDNA-LINC-PINT和miR-NC)和pcDNA-LINC-PINT+miR-524-5p组(共转染pcDNA-LINC-PINT和miR-524-5p)HOS细胞,Western blot检测细胞中PCNA和cleaved-caspase-3蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC-PINT的表达水平分别为0.18±0.01、0.33±0.01和0.42±0.01,miR-524-5p的表达水平分别为2.65±0.23、1.68±0.14和1.51±0.13,与正常成骨细胞hFOB(分别为1.00±0.08和1.00±0.06)比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养48、72 h时,pcDNA-LINC-PINT组HOS细胞的吸光度( A)值分别为0.41±0.05和0.57±0.05,pcDNA组细胞的 A值分别为0.62±0.05和1.06±0.09,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。pcDNA-LINC-PINT组和pcDNA组细胞的凋亡率分别为(25.28±2.15)%和(9.01±0.17)%,差异有统计学意义( P<0.01)。与miR-NC组(1.00±0.03)比较,miR-524-5p组WT-LINC-PINT细胞的荧光活性(0.31±0.03)降低,差异有统计学意义(均 P<0.01)。过表达miR-524-5p可逆转LINC-PINT对HOS细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。 结论:长链非编码RNA LINC-PINT可抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡,其作用机制与靶向miR-524-5p有关,可为骨肉瘤的治疗提供新的作用靶点。

长链非编码RNA Linc-pint通过调控微RNA-21介导结直肠癌进程的机制研究

【目的】研究长链非编码RNA Linc-pint在结直肠癌(CRC)中的生物学作用及其分子机制。【方法】通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Linc-pint在31对CRC组织及其癌旁正常组织中的表达水平。分析Linc-pint的表达与患者临床病理特征之间的关系;采用Kaplan-Meier生存分析法分析Linc-pint表达与患者预后的关系,Cox回归模型分析各项临床病理特征与患者预后的关系。采用qRT-PCR检测5种常见CRC细胞株中Linc-pint表达水平,通过细胞增殖实验、Transwell侵袭和迁移实验、裸鼠皮下成瘤实验检测Linc-pint对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。通过qRT-PCR检测Linc-pint的靶基因微RNA(miR)-21在31对CRC组织及其癌旁组织中的表达,并利用皮尔森相关系数分析两者之间的相关性。在CRC细胞中过表达Linc-pint后采用qRT-PCR检测其对miR-21表达的影响。【结果】Linc-pint在癌旁正常组织中表达水平为3.95±1.16,高于CRC组织的2.74±0.95(t=6.17,P<0.05)。Linc-pint高表达CRC患者的总体生存率为62.5%(30/48),高于Linc-pint低表达CRC患者的34.3%(24/70),差异有统计学意义(P<0.05)。过表达Linc-pint后,CRC细胞增殖、侵袭及迁移能力均被抑制(均P<0.05)。在肿瘤组织和癌旁正常组织中,Linc-pint表达水平与miR-21表达水平呈负相关(r=-0.288、-0.908,均P<0.05)。【结论】Linc-pint可通过作用于miR-21介导结直肠癌的增殖、侵袭和迁移。

长非编码RNA与SAFB1相互作用中RNA二级结构的作用

为探究RNA与SAFB1蛋白相互作用过程中RNA二级结构的作用.采用足迹法确定SAFB1与LINC-PINT-1特定的结合区域,在此基础上根据RNA结构分析研究SAFB1结合区域所具有特定的二级结构.最后通过凝胶迁移率实验论证该二级结构在RNA与SAFB1蛋白结合中的作用.结果显示:在针对LINC-PINT-1的亚克隆发现只有包含30~55nt区域的亚克隆才能维持RNA结合区域的二级结构,并且证实了LINC-PINT-1与SAFB1蛋白相互作用依赖于特定的RNA二级结构.结果表明:长非编码RNA与SAFB1蛋白相互作用或依赖于特定的RNA二级结构,本研究为RNA与蛋白质相互作用的分子机制研究提供了有力的理论实验支撑.