结直肠癌组织LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达及与预后的关系

目的分析结直肠癌组织长链非编码RNA(LncRNA)LINC00342、微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)表达水平与患者术后5年内预后的关系。方法采集133例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达;术后随访5年记录患者生存和死亡情况。比较不同情况下LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达及临床病理参数。分析结直肠癌组织中LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达的相关性、与预后的关系及对预后的预测价值。结果结直肠癌组织中LncRNA LINC00342表达水平高于癌旁组织,miR-203a-3p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中LncRNA LINC00342与miR-203a-3p表达水平呈负相关(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例分别高于LncRNA LINC00342低表达组和miR-203a-3p高表达组(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组术后5年总生存率更低(P<0.05)。死亡组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例、LncRNA LINC00342表达水平高于存活组,miR-203a-3p表达水平低于存活组(P<0.05)。肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移、LncRNA LINC00342高表达、miR-203a-3p低表达是影响患者术后5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。LncRNA LINC00342和miR-203a-3p联合对预后的预测价值高于单独预测。结论结直肠癌组织中LncRNA LINC00342呈高表达,miR-203a-3p呈低表达,二者联合检测有望成为预测术后生存的临床评估指标。

LINC00342调控miR-384对肺鳞癌细胞增殖侵袭迁移的影响研究

目的:探讨LINC00342通过miR-384对肺鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:将肺鳞癌SK-MES-1细胞分为:ctrl组(正常培养的SK-MES-1细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00342组(转染si-LINC00342)、si-LINC00342+inhibitor-NC组(si-LINC00342和inhibitor-NC共转染)、si-LINC00342+miR-384 inhibitor组(si-LINC00342和miR-384 inhibitor共转染);RT-qPCR检测细胞中LINC00342、miR-384表达;CCK-8法及Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭;划痕实验及流式细胞仪分别检测细胞迁移和凋亡;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证LINC00342和miR-384的关系。结果:与ctrl组、si-NC组比较,si-LINC00342组SK-MES-1细胞的OD450值、细胞侵袭数目、划痕愈合率、PCNA、MMP-2和MMP-9表达明显降低,细胞凋亡率、caspase-3表达明显上升(P<0.05);抑制miR-384表达减弱了敲低LINC00342对SK-MES-1细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用,降低了细胞凋亡能力;LINC00342靶向调控miR-384表达。结论:敲低LINC00342可能通过靶向miR-384,进而抑制SK-MES-1细胞增殖、侵袭和迁移。

LncRNA LINC00342通过靶向miR-596促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究LINC00342在胃癌组织、细胞中的表达水平及影响胃癌细胞生物学功能的具体通路。方法运用生物信息学技术,通过GEO数据库及相关预测软件,进行相关筛选及文献查询后,确定所研究的LncRNA及其下游所调控的miRNA;采用qRT-PCR检测LINC00342、miR-596在胃癌细胞系及人胃黏膜细胞中、胃癌组织及相应癌旁组织中的表达差异;细胞生物学功能上,过表达胃癌BGC-823细胞系中的LINC00342,将其分为pcDNA-LINC00342组和pcDNA组;过表达胃癌MGC-803细胞系中的miR-596,将其分为miR-596-mimic组及mimic-NC组;敲低胃癌MGC-803细胞系中LINC00342的表达,将其分为si LINC00342组及si-NC组、敲低胃癌BGC-823细胞系中miR-596的表达,将其分为miR-596-inhibitor组及inhibitor-NC组;分别进行CCK-8、Edu细胞增殖实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、细胞周期实验以验证LINC00342及miR-596对胃癌细胞功能的影响;双荧光素酶标记实验验证LINC00342与miR-596的靶向调控关系。结果通过生物信息学技术及相关软件预测分析,确定所研究LncRNA为LINC00342,预测其下游调控的miRNA为miR-596;LINC00342在胃癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.05);在人胃癌细胞系中表达高于人胃黏膜细胞系(P<0.05),miR-596则相反(P<0.05);在胃癌细胞中,LINC00342的过表达能促进胃癌细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)和侵袭(P<0.001),且减少处于G0/G1期的细胞比率(P<0.01);LINC00342敲低后,胃癌细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)和侵袭(P<0.001)则受抑制,增加处于G0/G1期的细胞比率(P<0.01);miR-596则发挥着相反的作用。LINC00342和miR-596能特异性结合(P=0.0067)。结论在胃癌细胞中,LINC00342通过调控miR-596,促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA LINC00342通过靶向微RNA-384促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨lncRNA LINC00342在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及其机制。方法通过基因表达谱动态分析(GEPIA)数据库分析LINC00342在ccRCC组织中的表达及其表达水平与患者生存率的关系。采用qPCR检测ccRCC组织及ccRCC细胞系中LINC00342的表达,并分析其与ccRCC患者临床病理学特点的相关性。将ccRCC细胞分为siRNA组、阴性对照组和空白对照组,通过CCK-8实验、划痕愈合实验及Transwell实验分别验证LINC00342对ccRCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响,采用蛋白质印迹法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达变化。通过生物信息学方法预测LINC00342的靶分子,并采用双萤光素酶报告基因实验验证LINC00342与miRNA-384的靶向关系。结果GEPIA数据库的分析结果表明,LINC00342在ccRCC组织中高表达,并且高表达的ccRCC患者总生存率较低(P均<0.05)。qPCR结果显示,ccRCC组织及ccRCC细胞中LINC00342的表达水平均升高(P均<0.05)。LINC00342高表达的患者肿瘤直径更大、临床分期更晚(P均<0.05)。通过siRNA沉默LINC00342的表达能够抑制ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭,下调波形蛋白和神经钙黏素的表达,上调上皮钙黏素的表达(P均<0.05)。生物信息学分析结果显示miRNA-384存在LINC00342的结合位点,双萤光素酶报告基因实验结果表明miRNA-384是LINC00342的下游靶分子之一。结论LINC00342可以促进ccRCC细胞的恶性表型。miRNA-384是LINC00342的下游靶分子之一。

食管鳞状细胞癌组织中LncRNA linc00342的表达及临床意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)linc00342的表达及临床意义。方法选取2015年6月至2016年9月于赣榆区人民医院接受ESCC根治术的89例ESCC患者的癌组织及癌旁组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测LncRNA linc00342的表达水平,并分析肿瘤组织中LncRNA linc00342的表达水平与患者临床病理参数的关系;ROC曲线评价LncRNA linc00342对ESCC的诊断价值;采用Kaplan-Meier法进行生存分析;多因素Cox回归分析影响ESCC患者预后不良的危险因素。结果ESCC患者癌组织和癌旁组织中LncRNA linc00342的相对表达量分别为3.16±1.27和1.64±0.51,二者差异有统计学意义(t=10.478,P<0.001);LncRNA linc00342的表达水平与TNM分期(χ^(2)=2.592,P=0.011)、淋巴结转移(χ^(2)=2.240,P=0.028)有关;Kaplan-Meier生存分析显示,LncRNA linc00342高表达和低表达患者的累积生存率分别为21.74%、55.81%,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=20.896,P=0.000);单因素分析显示,TNM分期(χ^(2)=8.616,P=0.003)、淋巴结转移(χ^(2)=4.732,P=0.030)及LncRNA linc00342表达(χ^(2)=17.092,P=0.000)是影响ESCC患者预后不良的危险因素;LncRNA linc00342表达预测ESCC的ROC曲线下面积为0.903(95%CI:0.874~0.938,P<0.001);多因素Cox回归分析结果显示,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.943,95%CI:1.280~2.950,P=0.002)、淋巴结转移(HR=1.884,95%CI:1.241~2.860,P=0.003)、LncRNA linc00342高表达(HR=2.107,95%CI:1.361~3.262,P=0.001)是影响ESCC患者预后不良的独立危险因素。结论LncRNA linc00342在ESCC组织中表达上调,是影响ESCC发生及预后不良的潜在生物学指标。

连翘苷调控LINC00342影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及炎症因子表达的实验研究

背景连翘苷是中药连翘的主要活性成分之一,具有抗肝癌、肺癌和肾癌的作用,但其能否影响胃癌细胞的恶性行为还未知.长基因间非编码RNA 00342(LINC00342)是一种非小细胞肺癌和结直肠癌中表达增加的长链非编码RNA(lncRNA),其作为促癌基因促进这些肿瘤细胞的恶性行为,进而促进肿瘤的发展进程.本研究假设连翘苷可通过抑制LINC00342发挥抗胃癌作用.目的探讨连翘苷对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子表达的影响及可能机制.方法体外培养胃癌HGC-27细胞,用不同剂量(5、10、20μmol/L)连翘苷干预24 h后,CCK-8和克隆形成实验检测检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,试剂盒检测细胞培养上清液中炎症因子TNF-α和IL-6表达,qRT-PCR法检测细胞中LINC00342表达.收集51例胃癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测组织中LINC00342表达.转染LINC00342小干扰RNA或过表达载体至HGC-27细胞,上述相同方法观察LINC00342对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭及炎症因子表达的影响.结果与对照组比较,HGC-27细胞经不同剂量连翘苷干预后,细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达量均升高(P<0.05),细胞克隆数、迁移数、侵袭数及细胞中N-cadherin蛋白和LINC00342的表达量、细胞培养上清液中TNF-α和IL-6表达均降低(P<0.05).胃癌组织中LINC00342的表达量为显著高于癌旁组织(P<0.05).敲减LINC00342后,HGC-27细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表达量均升高(P<0.05),细胞克隆数、迁移数、侵袭数、细胞中N-cadherin蛋白表达、细胞培养上清液中TNF-α和IL-6表达均降低(P<0.05).过表达LINC00342逆转了连翘苷对HGC-27细胞增殖、迁移、侵袭和炎症因子表达的影响.结论连翘苷可抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭及炎症因子TNF-α和IL-6表达,其作用机制可能与下调细胞中LINC00342表达有关.

急性缺血性脑卒中患者外周血LINC00342相对表达水平及其与临床特征的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中患者外周血LINC00342相对表达水平及其与临床特征的关系。方法纳入90例急性缺血性脑卒中患者(病例组)和90例健康对照者(对照组),采用实时荧光定量PCR技术检测两组研究对象的外周血LINC00342相对表达水平。检测病例组的血糖、血脂和血压水平,并比较LINC00342高表达(外周血LINC00342相对表达水平≥7.03×10^(-3))和低表达(外周血LINC00342相对表达水平<7.03×10^(-3))患者上述指标的差异。结果病例组的外周血LINC00342相对表达水平低于对照组(P<0.05)。LINC00342低表达的急性缺血性脑卒中患者的餐后2 h血糖水平高于LINC00342高表达者(P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者的外周血LINC00342相对表达水平下调,外周血LINC00342的相对表达水平可能影响急性缺血性脑卒中的发生和患者机体的血糖代谢。

LINC00342靶向miR-384对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA LINC00342(LncRNA LINC00342)靶向微小RNA-384(miR-384)调控肾癌细胞恶性生物学行为的分子机制。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌组织与癌旁组织中LINC00342的表达;将肾癌786-O细胞分为si-NC组、si-LINC00342组、si-LINC00342+anti-miR-NC组、si-LINC00342+anti-miR-384组;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭数;通过生物信息学方法预测LINC00342的靶基因,采用双荧光素酶报告实验验证靶基因的表达。结果与癌旁组织相比,肾癌组织中LINC00342的表达水平显著升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-LINC00342组细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-384可抑制野生型载体WT-LINC00342细胞的荧光素酶活性,且LINC00342可负向调控miR-384的表达(P<0.05);抑制miR-384能逆转抑制LINC00342对786-O细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结论抑制LINC00342可通过靶向调控上调miR-384抑制肾癌细胞的恶性生物学行为。

长链非编码RNA LINC00342在头颈鳞癌中的生物学功能及临床意义

目的明确长链非编码RNA LINC00342表达水平与头颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)患者临床病理参数的关系,研究LINC00342在头颈鳞癌细胞中的生物学功能。方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库头颈鳞癌转录组中LINC00342的表达,利用转录组测序技术检测山西医科大学第一医院27例喉鳞癌组织中该基因的表达;利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测人胚肺二倍体细胞2BS和头颈鳞癌细胞系FD-LSC-1、CAL-27、Detroit562中LINC00342的表达水平;使用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲降头颈鳞癌细胞中该基因的表达,利用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成、流式细胞术、Transwell迁移和侵袭等实验检测肿瘤细胞恶性表型的变化;生物信息学方法构建以LINC00342为核心的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络,并进行基因本体论(gene ontology,GO)富集分析。使用SPSS 25.0软件和GraphPad Prism 6软件进行统计学分析及作图。结果TCGA数据库收录的头颈鳞癌组织与数据库对应的正常组织相比,LINC00342的相对表达量差异无统计学意义(P=0.522);但其表达水平与患者颈淋巴结转移、病理学分级呈正相关,男性患者的表达水平高于女性患者(P值均<0.05)。通过转录组测序发现,LINC00342在我院27例喉鳞癌中的相对表达量高于癌旁正常黏膜组织(t=1.56,P=0.036)。LINC00342在头颈鳞癌细胞系FD-LSC-1、CAL-27和Detroit562中表达均显著上调(t值分别为-12.17、-23.26和-388.57,P值均<0.001)。分别转染si-LINC00342-1和si-LINC00342-2敲降LINC00342,可抑制头颈鳞癌细胞FD-LSC-1、CAL-27和Detroit562增殖(t值分别为8.95和4.84,2.70和5.55,2.02和3.70)、克隆形成(t值分别为6.66和6.17,7.38和11.65,4.90和5.79)、迁移(t值分别为8.21和7.19,5.76和6.46,6.28和9.92)和侵袭能力(t值分别为9.29和10.25,11.30和11.36,8.02和8.66),同时促进FD-LSC-1及CAL-27细胞凋亡(t值分别为-2.21和-5.83,-3.05和-5.25),差异有统计学意义(P值均<0.05)。以LINC00342为中心的ceRNA调控网络包括10个下调的微核糖核酸(microRNA)节点和647个上调的mRNA节点,GO分析表明这些mRNA主要聚类在22个生物过程、32个分子功能以及12个细胞组分方面。结论LINC00342高表达与头颈鳞癌恶性进展相关,具有促进头颈鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭以及拮抗凋亡的重要生物学功能,是头颈鳞癌潜在的重要分子标志物。

LINC00342/miR-505-3p/PGK1基因在乳腺癌患者肿瘤转移中的表达以及对细胞生物学特性的影响

长链非编码RNA LINC00342已被证实在多种癌症中参与重要生物学功能。然而,LINC00342在乳腺癌中的作用和机制尚不清楚。在该研究中,选取28例乳腺癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织,乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞,用qRT-PCR检测LINC00342、miR-505-3p和磷酸甘油酸激酶1(PGK1)mRNA的表达情况。Western blot检测PGK1蛋白的表达情况。将乳腺癌细胞MCF-7分为NC组(空白)、si-LINC00342组(转染si-LINC00342)、si-NC组(转染si-NC)、miR-505-3p组(转染miR-505-3p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-PGK1组(转染si-PGK1)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00342+pcDNA-PGK1组(同时转染si-LINC00342与pcDNA-PGK1)和siLINC00342+pcDNA组(同时转染si-LINC00342与pcDNA)。利用Western blot检测PGK1、迁移侵袭标志物基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达情况,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭数量。双荧光素酶活性实验检测miR-505-3p与LINC00342、PGK1之间的靶向结合。结果显示,LINC00342、PGK1 mRNA和PGK1蛋白在乳腺癌组织和细胞中显著上调,miR-505-3p显著下调。干扰LINC00342、过表达miR-505-3p或干扰PGK1均能抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,以及MMP2和MMP9蛋白表达。此外,LINC00342可直接靶向miR-505-3p调控PGK1表达,高表达PGK1可逆转LINC00342低表达对MCF-7增殖、迁移和侵袭的抑制效果。该研究提示,干扰LINC00342表达可能通过靶向miR-505-3p调控PGK1的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。